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小桐子光呼吸转氨酶GGAT与SGAT基因的克隆及原核表达分析
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作者 王海波 李芙蓉 +5 位作者 吴贞莹 殷艳花 吴家艳 孙春燕 朱志峰 崔庆晗 《植物生理学报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第7期1392-1400,共9页
谷氨酸:乙醛酸氨基转移酶(GGAT)与丝氨酸:乙醛酸氨基转移酶(SGAT)是植物光呼吸中催化乙醛酸转氨基生成甘氨酸的关键限速酶。基于同源序列比对的方法,从小桐子基因组中鉴定到1个GGAT基因(命名为JcGGAT)与1个SGAT基因(命名为JcSGAT),基因... 谷氨酸:乙醛酸氨基转移酶(GGAT)与丝氨酸:乙醛酸氨基转移酶(SGAT)是植物光呼吸中催化乙醛酸转氨基生成甘氨酸的关键限速酶。基于同源序列比对的方法,从小桐子基因组中鉴定到1个GGAT基因(命名为JcGGAT)与1个SGAT基因(命名为JcSGAT),基因长度分别为5 113和4 526 bp,分别编码481和401 aa的酶蛋白。氨基酸序列分析显示,小桐子GGAT与SGAT蛋白的C端过氧化物酶体定位信号肽分别为-SRM-与-SRI-。启动子区顺式作用元件分析表明,小桐子GGAT基因重点响应非生物胁迫信号如厌氧、干旱,而SGAT基因主要响应激素信号如脱落酸、赤霉素及茉莉酸甲酯。qRT-PCR表达分析显示, GGAT基因与小桐子的抗冷性直接相关。随着低温处理时间的延长,其表达量逐渐升高,并且在低温处理12 h时达到最大表达量,较对照显著提高4.74倍(P<0.01)。构建了小桐子GGAT与SGAT基因原核表达载体pGEX-4T-1-JcGGAT与pET-28a-JcSGAT,并在BL21(DE3)中诱导表达,分别得到81.0和47.8 kDa的蛋白条带,与理论融合蛋白的分子量一致。 展开更多
关键词 小桐子 谷氨酸:乙醛酸氨基转移酶 丝氨酸:乙醛酸氨基转移酶 基因克隆 原核表达
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