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小分子药物提高慢病毒对人γδT细胞感染效率的研究
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作者 梁卉彤 林沁汝 +6 位作者 杨辛毅 杨金龙 朱豫琪 梁玥 李敏 成逸鹏 朱焕章 《复旦学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2024年第4期492-501,共10页
γδT细胞识别靶细胞表面不依赖于主要组织相容性复合体(MHC)分子呈递的抗原,高效杀伤靶细胞且不引起移植物抗宿主病(GvHD),作为细胞平台在同种异体CAR细胞疗法开发中具有良好的应用前景。慢病毒(Lentivirus)载体是CAR-T细胞制备中常用... γδT细胞识别靶细胞表面不依赖于主要组织相容性复合体(MHC)分子呈递的抗原,高效杀伤靶细胞且不引起移植物抗宿主病(GvHD),作为细胞平台在同种异体CAR细胞疗法开发中具有良好的应用前景。慢病毒(Lentivirus)载体是CAR-T细胞制备中常用的基因递送手段,为实现γδT细胞中基于慢病毒载体的高效基因递送,本研究探索能够提高慢病毒滴度以及γδT细胞慢病毒感染效率的小分子药物。结果表明:组蛋白去乙酰化酶抑制剂M344和微管抑制剂Nocodazole可有效提高慢病毒滴度,其中当浓度为0.625μmol/L时,M344可提高慢病毒滴度至2倍以上。TBK1/IKK epsilon抑制剂BX-795可提高γδT细胞中慢病毒感染效率,当感染复数(MOI)为5时,BX-795可将感染效率从3.5%提升至10.7%,且未产生细胞毒性作用。本研究将为γδT细胞中基于慢病毒载体的基因递送优化提供一种新的策略,进一步推动γδT细胞在同种异体CAR细胞研究中的应用。 展开更多
关键词 ΓΔT细胞 慢病毒载体 M344 诺考达 BX-795
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微管抑制及尾桥蛋白磷酸化促进骨肉瘤细胞U2OS微核形成
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作者 阮荻 孙林 +3 位作者 潘高 周文豪 林怡然 龚业莉 《华中科技大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2024年第2期207-213,共7页
目的探讨微管及微管相关蛋白尾桥蛋白在肿瘤细胞微核形成中的作用。方法利用DAPI染色检测不同类型细胞自发微核率;利用诺考达唑(nocodazole)抑制微管聚集后,DAPI染色和胞质分裂阻滞(cytokinesis-block,CB)微核实验观察人骨肉瘤细胞株U2O... 目的探讨微管及微管相关蛋白尾桥蛋白在肿瘤细胞微核形成中的作用。方法利用DAPI染色检测不同类型细胞自发微核率;利用诺考达唑(nocodazole)抑制微管聚集后,DAPI染色和胞质分裂阻滞(cytokinesis-block,CB)微核实验观察人骨肉瘤细胞株U2OS中微核形成情况;免疫荧光多重染色检测诺考达唑处理不同时间对U2OS细胞中微管及尾桥蛋白的影响;在U2OS细胞中过表达尾桥蛋白或利用collybistin使尾桥蛋白磷酸化,再利用免疫荧光及DAPI染色检测其对微管及微核形成的影响。结果相对于人胚肾HEK293细胞和原代神经细胞,U2OS自发微核率更高;诺考达唑处理使U2OS细胞微核数量增加,且与释放时间相关;诺考达唑处理使尾桥蛋白分布改变,逐渐聚集于细胞核;U2OS细胞中磷酸化尾桥蛋白主要表达于分裂期细胞;过表达尾桥蛋白和(或)增加其磷酸化水平并不影响U2OS细胞中微管蛋白的表达,但过表达尾桥蛋白并增加其磷酸化水平可使微核数量增多。结论肿瘤细胞内微核形成与微管聚集能力关系密切,可形成于细胞周期不同时期,具有积累效应。尾桥蛋白磷酸化后细胞中微核数量增多,提示其可能参与调节肿瘤细胞微核形成。 展开更多
关键词 微管 微核 尾桥蛋白 诺考达 collybistin U2OS
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诺考达唑抑制大鼠血管平滑肌细胞增殖的作用及机制 被引量:2
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作者 李丹 郭小梅 《医药导报》 CAS 北大核心 2014年第8期1004-1008,共5页
目的研究诺考达唑抑制大鼠血管平滑肌细胞(rVSMCs)的作用及机制。方法将rVSMCs分为A、B、C、D 4组,A组常规培养,B组无血清培养24 h,C组无血清培养48 h后常规培养18 h,D组先后加入胸腺嘧啶核苷(工作浓度为0.05 g·mL-1)作用12 h后再... 目的研究诺考达唑抑制大鼠血管平滑肌细胞(rVSMCs)的作用及机制。方法将rVSMCs分为A、B、C、D 4组,A组常规培养,B组无血清培养24 h,C组无血清培养48 h后常规培养18 h,D组先后加入胸腺嘧啶核苷(工作浓度为0.05 g·mL-1)作用12 h后再加入诺考达唑(工作浓度为0.05 g·mL-1)继续维持12 h。分别进行细胞周期的检测,观察细胞超微结构的变化,检测糖代谢、氨基酸代谢与ATP以及NAD/NADH的变化以及线粒体融合蛋白2(Mfn-2)的表达。结果流式细胞术检测结果显示B、C、D组细胞分别阻滞于G0/G1期,S期及G2/M期。电子显微镜检测显示D组线粒体的数量减少,体积缩小。D组与A组及C组相比,糖代谢、氨基酸代谢均显著降低,ATP的产生明显减少,NADH的生成显著增加(P<0.05)。Western Blot示G2/M期细胞阻滞与诺考达唑均可导致Mfn-2表达增高(P<0.05)。结论诺考达唑可明显降低rVSMCs能量代谢,阻断rVSMCs的增殖状态,可能与Mfn-2抗动脉粥样硬化的作用有关。 展开更多
关键词 诺考达 增殖 血管平滑肌细胞 大鼠 代谢 能量 线粒体融合蛋白-2 动脉粥样硬化
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微管对狂犬病病毒胞内感染的影响 被引量:1
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作者 高洁 赵铭昕 +5 位作者 刘恩华 赵维荣 段铭 关振宏 张茂林 郭艺迪 《湖北农业科学》 2019年第10期121-125,共5页
狂犬病病毒(Rabies virus,RABV)依赖宿主细胞完成其感染周期,且在胞浆内复制。微管作为一种细胞骨架,是介导胞内物质运输的重要通道。为探究狂犬病病毒胞内感染是否依赖于细胞骨架——微管,利用小鼠神经母细胞瘤细胞(N2a),接种实验室标... 狂犬病病毒(Rabies virus,RABV)依赖宿主细胞完成其感染周期,且在胞浆内复制。微管作为一种细胞骨架,是介导胞内物质运输的重要通道。为探究狂犬病病毒胞内感染是否依赖于细胞骨架——微管,利用小鼠神经母细胞瘤细胞(N2a),接种实验室标准攻击毒株CVS-11,通过诺考达唑(Nocodazole)抑制剂破坏微管形成,采用实时荧光定量PCR方法、WesternBlot方法、免疫荧光方法检测微管对于RABV感染量的影响,并采用TCID50法测定微管对RABV病毒滴度的影响。结果表明,Nocodazole通过抑制微管的形成,使RABVN基因水平降低25%、N蛋白水平降低50%,免疫荧光检测到病毒感染率降低70%,上清液中病毒滴度由106.5TCID50/mL降低至104.5TCID50/mL,说明狂犬病病毒胞内感染依赖于细胞骨架-微管的参与。该结果为进一步研究狂犬病病毒胞内运输及其复制机制的研究提供了理论依据。 展开更多
关键词 狂犬病病毒 微管 诺考达 胞内感染
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诺考达唑和阿非科林对人胚胎干细胞周期的影响
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作者 魏建峰 王昱博 《生物技术》 CAS CSCD 北大核心 2015年第6期591-596,共6页
[目的]探究诺考达唑和阿非科林联合应用对人胚胎干细胞周期同步化到G1和S期的作用并观察药物对细胞生长和生物功能的影响。[方法]采用诺考达唑和阿非科林先后作用于胚胎干细胞,流式细胞仪测定细胞周期,显微镜下观察药物对细胞生长状态... [目的]探究诺考达唑和阿非科林联合应用对人胚胎干细胞周期同步化到G1和S期的作用并观察药物对细胞生长和生物功能的影响。[方法]采用诺考达唑和阿非科林先后作用于胚胎干细胞,流式细胞仪测定细胞周期,显微镜下观察药物对细胞生长状态的影响,荧光染色技术观察胚层标志物α-SMA和β-tubulin表达。[结果]加入诺考达唑和阿非科林后,G1期为66.35%,S期为33.52%,多数细胞被同步化在G1期;诺考达唑作用16 h,G1期为18.45%,S期为79.10%,多数细胞从周期抑制中恢复;能够形成典型的拟胚体;荧光染色显示α-SMA和β-tubulin均有表达。[结论]诺考达唑和阿非科林联合作用能够使胚胎干细胞66.35%同步化在G1期,诺考达唑作用16 h,79.10%的细胞同步化在S期。中胚层标志物α-平滑肌肌动蛋白和外胚层标志物β微管蛋白在蛋白水平均有明显表达。去除药物后,细胞未发生显著性损伤。 展开更多
关键词 胚胎干细胞 诺考达 阿非科林 细胞周期
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胸苷和诺考达唑对胃癌细胞周期同步化的调节作用
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作者 钱亚琼 吴敏解 茅利明 《中国卫生检验杂志》 CAS 2019年第20期2504-2506,共3页
目的观察有丝分裂阻滞剂胸苷和诺考达唑对胃癌MGC-803细胞株细胞周期同步化的调节作用及其形态的影响。方法以2mmol/L的胸苷和50ng/ml的诺考达唑处理细胞,最后在不同时间点收集细胞,并用流式细胞仪检测细胞周期;光镜下观察各组细胞形态... 目的观察有丝分裂阻滞剂胸苷和诺考达唑对胃癌MGC-803细胞株细胞周期同步化的调节作用及其形态的影响。方法以2mmol/L的胸苷和50ng/ml的诺考达唑处理细胞,最后在不同时间点收集细胞,并用流式细胞仪检测细胞周期;光镜下观察各组细胞形态变化。结果胸苷处理后,细胞周期被阻滞在G1/S期;50ng/ml诺考达唑处理后,细胞周期均被阻滞在G2/M期;以双胸腺嘧啶苷法处理细胞后,细胞形态无明显变化;以50ng/ml诺考达唑法处理细胞后,细胞形态呈现煎蛋样改变,且细胞形态变大,胞质显著增多,细核呈现多形性。结论胸苷和诺考达唑对胃癌细胞周期同步化具有调节作用,且当药物撤离后,细胞周期可逐渐恢复;胸苷对细胞形态影响较小,而诺考达唑对细胞形态产生显著变化。 展开更多
关键词 胸苷 诺考达 胃癌 同步化 流式细胞仪 倒置显微镜
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免疫电镜观察培养脊髓神经元中微管相关蛋白-5的表达
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作者 王春芳 石玉秀 王雅芳 《解剖科学进展》 CAS 2002年第4期295-298,共4页
目的 研究微管相关蛋白 5在培养脊髓神经元的表达变化。方法 使用ACLAR膜培养脊髓神经元 ,分为四组 ,即正常脊髓神经元组 ,加诺考达唑 (nocodazole)组 ,加乙酸佛波醇 (PMA)组 ,空白对照组。免疫电镜观察四组微管相关蛋白 5的分布。结... 目的 研究微管相关蛋白 5在培养脊髓神经元的表达变化。方法 使用ACLAR膜培养脊髓神经元 ,分为四组 ,即正常脊髓神经元组 ,加诺考达唑 (nocodazole)组 ,加乙酸佛波醇 (PMA)组 ,空白对照组。免疫电镜观察四组微管相关蛋白 5的分布。结果 正常脊髓神经元微管相关蛋白 5阳性颗粒在胞浆及突起中均匀分布 ,nocodazole引起微管相关蛋白 5阳性颗粒排列紊乱 ,PMA则使微管相关蛋白 5阳性颗粒在胞浆及突起中密集存在。结论 微管相关蛋白 5在脊髓神经元的胞浆及突起中均有表达 。 展开更多
关键词 微管相关蛋白-5 神经元 电镜 诺考达 佛波醇酯
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The up-regulated differentially expressed genes in HL-60 cell line treated with nocodazole
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作者 张晓晖 黄高升 +3 位作者 王哲 程虹 冯骥良 阎庆国 《Journal of Medical Colleges of PLA(China)》 CAS 2005年第4期209-214,共6页
Objective:Microtubule damaging agents such as nocodazole have been used in the clinical cancer chemotherapy. However, the molecular mechanisms of apoptosis induction activity of these agents are still unclear. We pre... Objective:Microtubule damaging agents such as nocodazole have been used in the clinical cancer chemotherapy. However, the molecular mechanisms of apoptosis induction activity of these agents are still unclear. We previously demonstrated that nocodazole induced apoptosis in human leukemic HL-60 cells. In order to investigate the genes involved in this process, cDNA RDA was performed to identify upregulated genes in the apoptosis process induced by nocodazole. Methods :Sixteen up-regulated genes were identified and confirmed to be differentially expressed, including ribosomal proteins, cytochrome b, Wilm's tumor related protein QM gene, alpha-tubulin isoform 1, heterogeneous nuclear ribonucleoprotein C enzymes, follicular lymphoma variant translocation 1, Ribophorin I , etc. Results:It was the first time for several genes reported to be related to apoptosis, including one functionally unkown gene, BING4. We also analyzed the expression of these genes in apoptosis induced by etoposide, and results showed 9 genes were also up-regulated, indicating they could be important genes involved in apoptosis. Conclusion:The study provides important clues to understand mechanism of apoptosis induced by nocodazole, and establishes foundation for further study. 展开更多
关键词 cDNA representational differential analysis APOPTOSIS LEUKEMIA NOCODAZOLE ETOPOSIDE
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诺考达唑对体外小鼠卵裂球M期阻抑及后续发育的影响
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作者 罗光彬 夏文明 +2 位作者 李元玲 白文林 杜新 《沈阳农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第2期181-186,共6页
为获得更多具有后续发育能力的小鼠M期卵裂球,以测定细胞间期和M期的重编程因子表达情况,用不同浓度的诺考达唑(Nocodazole)对小鼠1-cell胚胎及2-cell胚胎进行了不同时间的处理,筛选出了控制卵裂球停留在M期的最佳处理浓度及处理时间。... 为获得更多具有后续发育能力的小鼠M期卵裂球,以测定细胞间期和M期的重编程因子表达情况,用不同浓度的诺考达唑(Nocodazole)对小鼠1-cell胚胎及2-cell胚胎进行了不同时间的处理,筛选出了控制卵裂球停留在M期的最佳处理浓度及处理时间。结果表明:0.10,0.15和0.20μg·m L-1的诺考达唑可有效且可逆地使小鼠1-cell胚胎或2-cell胚胎阻抑在M期;在诺考达唑去除后的1~2h,胚胎细胞重新恢复有丝分裂,完成卵裂;0.10μg·m L-1的诺考达唑处理12h可很好地将1-cell胚胎阻抑于M期,且对胚胎的后续发育影响不大;0.20μg·m L-1的诺考达唑处理18h对2-cell胚胎阻抑效果最好,而解除诺考达唑处理后3h内的胚胎发育能力略低于0.15μg·m L-1处理组,但差异不显著(p】0.05)。由于两组(0.15μg·m L-1组和0.20μg·m L-1组)对2-cell胚胎阻抑效果及发育能力两方面均差异不显著(p】0.05),因此选用0.15μg·m L-1的诺考达唑处理2-cell胚胎。用0.10μg·m L-1和0.15μg·m L-1的诺考达唑分别对小鼠的1-cell胚胎及2-cell胚胎处理12h和18h,可获得更多有发育能力的小鼠M期卵裂球。 展开更多
关键词 小鼠 重编程 诺考达 M期 卵裂球
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