目的探讨miR-25-3p靶向解整合素金属蛋白酶10(ADAM10)调控Notch信号通路对P19细胞向心肌细胞分化的影响。方法采用二甲基亚砜(DMSO)诱导P19细胞向心肌细胞分化,分别收集诱导分化第0、5、10天的细胞,实时荧光定量PCR检测诱导分化过程中...目的探讨miR-25-3p靶向解整合素金属蛋白酶10(ADAM10)调控Notch信号通路对P19细胞向心肌细胞分化的影响。方法采用二甲基亚砜(DMSO)诱导P19细胞向心肌细胞分化,分别收集诱导分化第0、5、10天的细胞,实时荧光定量PCR检测诱导分化过程中心肌分化标志物GATA结合蛋白4(GATA4)、心肌肌钙蛋白T(cTnT)、心房利钠尿多肽(ANP)的mRNA以及miR-25-3p水平, Western blot法检测诱导分化过程中ADAM10蛋白水平。通过逆转录病毒感染P19细胞过表达miR-25-3p,采用实时荧光定量PCR检测感染后P19细胞中miR-25-3p水平, Western blot法检测感染后P19细胞ADAM10蛋白水平。生物信息学软件预测并通过荧光素酶报告实验验证miR-25-3p与ADAM10之间的靶向结合作用。感染后的P19细胞经DMSO诱导分化10d后,免疫荧光实验检测细胞中心肌肌钙蛋白I(cTnI)蛋白的表达情况,并计算心肌细胞分化率;Western blot法检测GATA4、cTnT、ANP以及Notch信号通路相关蛋白Notch1、Hes家族bHLH转录因子1(Hes1)、Hairy相关转录因子1(Hey1)和Hey2蛋白水平。结果P19细胞向心肌细胞诱导分化的第0、5、10天过程中, GATA4、cTnT、ANP的mRNA水平及ADAM10蛋白水平均逐渐增加,而miR-25-3p水平逐渐降低;逆转录病毒感染后, P19细胞中miR-25-3p水平显著增加,而ADAM10蛋白水平显著降低;生物信息学分析证实ADAM10为miR-25-3p的靶基因;诱导分化10 d后,过表达miR-25-3p可显著降低心肌细胞分化率,下调GATA4、cTnT、ANP及Notch信号通路相关分子Notch1、Hes1、Hey1和Hey2的蛋白水平。结论miR-25-3p可显著抑制P19细胞向心肌细胞分化,其机制可能与其靶向抑制ADAM10表达,进而抑制Notch信号通路的激活有关。展开更多
目的研究去整合素金属蛋白酶10(a disintegrin and metalloprotease 10,ADAM10)在喉癌中的表达及其临床意义。方法采用实时荧光定量RT-PCR法(n=21)与组织芯片免疫组化法(n=62)检测ADAM10在喉癌组织与正常黏膜组织中的表达情况,并分析其...目的研究去整合素金属蛋白酶10(a disintegrin and metalloprotease 10,ADAM10)在喉癌中的表达及其临床意义。方法采用实时荧光定量RT-PCR法(n=21)与组织芯片免疫组化法(n=62)检测ADAM10在喉癌组织与正常黏膜组织中的表达情况,并分析其差异。结果实时荧光定量RT-PCR结果显示喉癌组织中ADAM10表达显著高于正常黏膜组织中的表达(P<0.001),其倍数为2.691±1.568。组织芯片结果显示ADAM10在喉癌组织中阳性面积百分比为15.243±7.824,在正常黏膜组织中则为1.887±1.918,喉癌组织中ADAM10的表达量高于正常黏膜组织(P<0.001)。ADAM10的表达与组织学分级相关,与其他临床参数无关。结论 ADAM10在喉癌组织中有高表达,其表达与肿瘤组织学分级相关。展开更多
文摘目的探讨miR-25-3p靶向解整合素金属蛋白酶10(ADAM10)调控Notch信号通路对P19细胞向心肌细胞分化的影响。方法采用二甲基亚砜(DMSO)诱导P19细胞向心肌细胞分化,分别收集诱导分化第0、5、10天的细胞,实时荧光定量PCR检测诱导分化过程中心肌分化标志物GATA结合蛋白4(GATA4)、心肌肌钙蛋白T(cTnT)、心房利钠尿多肽(ANP)的mRNA以及miR-25-3p水平, Western blot法检测诱导分化过程中ADAM10蛋白水平。通过逆转录病毒感染P19细胞过表达miR-25-3p,采用实时荧光定量PCR检测感染后P19细胞中miR-25-3p水平, Western blot法检测感染后P19细胞ADAM10蛋白水平。生物信息学软件预测并通过荧光素酶报告实验验证miR-25-3p与ADAM10之间的靶向结合作用。感染后的P19细胞经DMSO诱导分化10d后,免疫荧光实验检测细胞中心肌肌钙蛋白I(cTnI)蛋白的表达情况,并计算心肌细胞分化率;Western blot法检测GATA4、cTnT、ANP以及Notch信号通路相关蛋白Notch1、Hes家族bHLH转录因子1(Hes1)、Hairy相关转录因子1(Hey1)和Hey2蛋白水平。结果P19细胞向心肌细胞诱导分化的第0、5、10天过程中, GATA4、cTnT、ANP的mRNA水平及ADAM10蛋白水平均逐渐增加,而miR-25-3p水平逐渐降低;逆转录病毒感染后, P19细胞中miR-25-3p水平显著增加,而ADAM10蛋白水平显著降低;生物信息学分析证实ADAM10为miR-25-3p的靶基因;诱导分化10 d后,过表达miR-25-3p可显著降低心肌细胞分化率,下调GATA4、cTnT、ANP及Notch信号通路相关分子Notch1、Hes1、Hey1和Hey2的蛋白水平。结论miR-25-3p可显著抑制P19细胞向心肌细胞分化,其机制可能与其靶向抑制ADAM10表达,进而抑制Notch信号通路的激活有关。
