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抗人乳腺癌细胞膜表面角蛋白CK8的单克隆抗体的制备及鉴定
被引量：
3
1
作者
刘芳
邵晓枫
+5 位作者
王金宏
范冬梅
许元富
杨铭
杨纯正
熊冬生
《中国免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2008年第6期554-557,562,共5页
目的:建立针对多药耐药人乳腺癌细胞膜表面差异抗原的抗体库,并鉴定抗角蛋白CK8特异性的单克隆抗体。方法:采用细胞免疫和杂交瘤技术制备单克隆抗体库,经免疫沉淀得到抗原-抗体复合物,SDS-PAGE分离目的抗原,质谱测序,Western blot验证...
目的:建立针对多药耐药人乳腺癌细胞膜表面差异抗原的抗体库,并鉴定抗角蛋白CK8特异性的单克隆抗体。方法:采用细胞免疫和杂交瘤技术制备单克隆抗体库,经免疫沉淀得到抗原-抗体复合物,SDS-PAGE分离目的抗原,质谱测序,Western blot验证及激光共聚焦显微镜观察抗原分子的细胞膜定位。结果:成功筛选到稳定分泌抗CK8分子的单克隆抗体的杂交瘤细胞株(7F9)。结论:文中所研制的单克隆抗体具有与乳腺癌细胞膜表面CK8分子特异结合的活性,在上皮来源肿瘤标志物CK8的临床检测及CK8相关生物学活性研究中具有广泛应用前景。
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关键词
角蛋白
ck
8
膜
蛋白
单克隆抗体
质谱测序
下载PDF
职称材料
人细胞角蛋白8(CK8)基因的克隆及其在大肠杆菌中的表达
被引量：
3
2
作者
李薇
寻萌
+1 位作者
楚雍烈
郑建武
《细胞与分子免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2010年第1期41-43,共3页
目的:克隆人细胞角蛋白8(CK8)基因cDNA并在大肠杆菌中表达CK8蛋白产物。方法:运用DNA重组技术,设计CK8基因特异引物,采用反转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术从人肝细胞癌7721细胞中扩增CK8编码区cDNA,将其插入克隆载体pMD18-T simple vecto...
目的:克隆人细胞角蛋白8(CK8)基因cDNA并在大肠杆菌中表达CK8蛋白产物。方法:运用DNA重组技术,设计CK8基因特异引物,采用反转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术从人肝细胞癌7721细胞中扩增CK8编码区cDNA,将其插入克隆载体pMD18-T simple vector中,获得重组质粒pMD18-CK8,转化感受态大肠杆菌DH5α。继而采用PCR技术从重组质粒pMD18-CK8中扩增出约1500bp目的片段,再次级克隆到原核表达质粒pET-28a(+)载体中,获得pET-28a-CK8重组原核表达质粒;经酶切、PCR及测序鉴定后转化入BL21(DE3)菌株,在IPTG诱导下进行融合蛋白的表达。采用SDS-PAGE电泳及Western blot检测CK8蛋白表达水平。结果:成功建立了人CK8基因cDNA重组体的无性繁殖系。②在原核细胞中成功地表达出人CK8蛋白,该蛋白具有很好的免疫原性。结论:运用原核细胞基因工程技术成功构建和表达了人细胞角蛋白8(CK8)基因,为进一步研究CK8的基因型及探讨该基因编码的CK8蛋白的性质和生物学活性创造条件。
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关键词
人细胞
角蛋白
8
ck
8
基因克隆
原核表达
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职称材料
题名
抗人乳腺癌细胞膜表面角蛋白CK8的单克隆抗体的制备及鉴定
被引量：
3
1
作者
刘芳
邵晓枫
王金宏
范冬梅
许元富
杨铭
杨纯正
熊冬生
机构
中国医学科学院血液学研究所实验血液学国家重点实验室
出处
《中国免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2008年第6期554-557,562,共5页
基金
国家自然科学基金(批准号30572203
30570772)资助
文摘
目的:建立针对多药耐药人乳腺癌细胞膜表面差异抗原的抗体库,并鉴定抗角蛋白CK8特异性的单克隆抗体。方法:采用细胞免疫和杂交瘤技术制备单克隆抗体库,经免疫沉淀得到抗原-抗体复合物,SDS-PAGE分离目的抗原,质谱测序,Western blot验证及激光共聚焦显微镜观察抗原分子的细胞膜定位。结果:成功筛选到稳定分泌抗CK8分子的单克隆抗体的杂交瘤细胞株(7F9)。结论:文中所研制的单克隆抗体具有与乳腺癌细胞膜表面CK8分子特异结合的活性,在上皮来源肿瘤标志物CK8的临床检测及CK8相关生物学活性研究中具有广泛应用前景。
关键词
角蛋白
ck
8
膜
蛋白
单克隆抗体
质谱测序
Keywords
Cytokeratin
8
Membrane protein
Monoclonal antibody
Mass spectrography
分类号
R392.33 [医药卫生—免疫学]
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职称材料
题名
人细胞角蛋白8(CK8)基因的克隆及其在大肠杆菌中的表达
被引量：
3
2
作者
李薇
寻萌
楚雍烈
郑建武
机构
西安交通大学医学院免疫与病原生物系分子病毒研究所
出处
《细胞与分子免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2010年第1期41-43,共3页
基金
国家自然科学基金资助项目(330470089)
文摘
目的:克隆人细胞角蛋白8(CK8)基因cDNA并在大肠杆菌中表达CK8蛋白产物。方法:运用DNA重组技术,设计CK8基因特异引物,采用反转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术从人肝细胞癌7721细胞中扩增CK8编码区cDNA,将其插入克隆载体pMD18-T simple vector中,获得重组质粒pMD18-CK8,转化感受态大肠杆菌DH5α。继而采用PCR技术从重组质粒pMD18-CK8中扩增出约1500bp目的片段,再次级克隆到原核表达质粒pET-28a(+)载体中,获得pET-28a-CK8重组原核表达质粒;经酶切、PCR及测序鉴定后转化入BL21(DE3)菌株,在IPTG诱导下进行融合蛋白的表达。采用SDS-PAGE电泳及Western blot检测CK8蛋白表达水平。结果:成功建立了人CK8基因cDNA重组体的无性繁殖系。②在原核细胞中成功地表达出人CK8蛋白,该蛋白具有很好的免疫原性。结论:运用原核细胞基因工程技术成功构建和表达了人细胞角蛋白8(CK8)基因,为进一步研究CK8的基因型及探讨该基因编码的CK8蛋白的性质和生物学活性创造条件。
关键词
人细胞
角蛋白
8
ck
8
基因克隆
原核表达
Keywords
cytokeratin
8
（
ck
8
）
gene cloning
gene expression
分类号
R392.12 [医药卫生—免疫学]
下载PDF
职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
抗人乳腺癌细胞膜表面角蛋白CK8的单克隆抗体的制备及鉴定
刘芳
邵晓枫
王金宏
范冬梅
许元富
杨铭
杨纯正
熊冬生
《中国免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2008
3
下载PDF
职称材料
2
人细胞角蛋白8(CK8)基因的克隆及其在大肠杆菌中的表达
李薇
寻萌
楚雍烈
郑建武
《细胞与分子免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2010
3
下载PDF
职称材料
已选择
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