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山区型和田羊毛囊KIF2.9基因的克隆与生物信息学分析 被引量:3
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作者 武振辉 张亮 李树伟 《黑龙江畜牧兽医》 CAS 北大核心 2020年第3期6-11,152,共7页
为了探究毛囊KIF2.9基因对半粗毛型地方品种绵羊羊毛品质和性状的影响,试验以山区型和田羊为试验动物,提取毛囊总RNA,反转录成cDNA,PCR扩增毛囊KIF2.9基因,并定向插入pMD18-T克隆载体中构建pMD18-T-KIF2.9克隆质粒,经双酶切、PCR鉴定及... 为了探究毛囊KIF2.9基因对半粗毛型地方品种绵羊羊毛品质和性状的影响,试验以山区型和田羊为试验动物,提取毛囊总RNA,反转录成cDNA,PCR扩增毛囊KIF2.9基因,并定向插入pMD18-T克隆载体中构建pMD18-T-KIF2.9克隆质粒,经双酶切、PCR鉴定及测序分析正确后,将山区型和田羊毛囊KIF2.9基因连接到原核表达载体pET-28a(+)中,构建毛囊KIF2.9基因的pET28a(+)-KIF2.9原核表达重组质粒,检测其正确性,并运用DNAMAN、ProtParam、ExPASy、MEGA 5.0等软件对其核苷酸和氨基酸序列进行生物信息学分析。结果表明:山区型和田羊毛囊KIF2.9基因编码序列大小为1527 bp,编码509个氨基酸。与GenBank中美利奴羊比较,毛囊KIF2.9碱基序列有20处碱基发生突变,但仅造成第292位丙氨酸→缬氨酸,第414位谷氨酰胺→谷氨酸,第466位色氨酸→苏氨酸这3处氨基酸的变异。与美利奴羊毛囊KIF2.9基因的序列比对,其碱基同源性为98.69%,但氨基酸序列同源性高达99.41%。与美利奴羊毛囊KIF2.9基因蛋白结构比对,蛋白质一级结构中原子总数、分子质量、脂肪酸系数略高于美利奴,氨基酸数目、等电点、平均疏水性等无明显差异;蛋白质二级结构中α-螺旋、β-转角、无规则卷曲和延伸链所占比例没有明显差异;蛋白质三级结构中某些肽段结构发生了变化。KIF2.9基因分子系统进化树反映山区型和田羊与美利奴羊亲缘关系较近。说明山区型和田羊与美利奴羊的羊毛类型有差异,但毛囊KIF2.9基因在氨基酸水平上高度相似,亲缘关系较近。 展开更多
关键词 山区型和田羊 毛囊 KIF2.9基因 角蛋白中间丝 基因克隆 生物信息学
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绵羊角蛋白中间丝I型基因多态性及其与羊毛性状的关系 被引量:3
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作者 应诗家 王锋 +9 位作者 石国庆 刘源 祝铁刚 王子玉 崔璐 吴勇聪 张永胜 陈玲香 张有法 陈玲 《江苏农业科学》 CSCD 北大核心 2009年第5期216-218,共3页
采用PCR-RFLP分子标记技术,检测了湖羊、哈萨克羊及中国美利奴多胎羊、"A"型羊和细型、超细型羊5个群体,共314只个体,角蛋白中间丝I型基因第1外显子的遗传多态性,并进行与绵羊羊毛性状相关性分析。结果表明:480 bp PCR产物经M... 采用PCR-RFLP分子标记技术,检测了湖羊、哈萨克羊及中国美利奴多胎羊、"A"型羊和细型、超细型羊5个群体,共314只个体,角蛋白中间丝I型基因第1外显子的遗传多态性,并进行与绵羊羊毛性状相关性分析。结果表明:480 bp PCR产物经M spⅠ消化分析后在5个绵羊群体中均有2个等位基因突变(M占0.910 8,N占0.089 2)和3种基因型(MM占0.839 2,MN占0.141 5,NN占0.019 3),优势等位基因M基因频率比欧洲绵羊和印度绵羊品种高。序列比对发现,第1个M spⅠ酶切位点发生1个碱基C→T突变(g.160 C>T)。中国美利奴羊在该位点处于Hardy-W e inberg不平衡状态(P<0.05),其中中国美利奴细型、超细型群体在该位点处于Hardy-W e inberg极不平衡状态(P<0.01)。该位点与羊毛纤维直径不相关。 展开更多
关键词 中国美利奴 角蛋白中间丝I型基因 羊毛性状 多态性 羊毛弹力
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绵羊角蛋白中间丝基因KIF1.2的克隆及序列分析
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作者 刘鑫 姜仁军 +1 位作者 王成 李树伟 《塔里木大学学报》 2013年第1期12-17,共6页
为了分析南疆地方品种羊和田羊毛囊角蛋白中间丝KIF1.2基因,以和田羊为实验动物,从绵阳毛囊中提取总RNA,利用反转录获得的cDNA第一链为模板,通过PCR扩增KIF1.2基因,插入pMD18-T克隆载体中经限制性内切酶双酶切和PCR检测双重鉴定并测定... 为了分析南疆地方品种羊和田羊毛囊角蛋白中间丝KIF1.2基因,以和田羊为实验动物,从绵阳毛囊中提取总RNA,利用反转录获得的cDNA第一链为模板,通过PCR扩增KIF1.2基因,插入pMD18-T克隆载体中经限制性内切酶双酶切和PCR检测双重鉴定并测定序列。结果,扩增出序列长度为1215 bp的基因片段,测序结果与GenBank上已公布的序列同源性为99%。该实验研究将为进一步通过基因和蛋白的调节来改良南疆地方品种羊和田羊羊毛品质提供必要的理论依据。 展开更多
关键词 和田羊 KIF1.2角蛋白中间丝基因 基因克隆 序列分析
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绵羊毛角蛋白Ⅱ型中间丝9基因的扩增及表达 被引量:4
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作者 于永生 王晓阳 +2 位作者 朴庆林 罗晓彤 金海国 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2011年第6期64-67,共4页
本试验旨在构建绵羊毛角蛋白Ⅱ型中间丝9(keratin typeⅡintermediate filament 9,KIFⅡ-9)基因cDNA的毛囊特异性表达载体,转染辽宁绒山羊胎儿成纤维细胞,筛选出稳定表达外源基因并可用于核移植的转基因细胞克隆。通过PCR扩增得到的KAP... 本试验旨在构建绵羊毛角蛋白Ⅱ型中间丝9(keratin typeⅡintermediate filament 9,KIFⅡ-9)基因cDNA的毛囊特异性表达载体,转染辽宁绒山羊胎儿成纤维细胞,筛选出稳定表达外源基因并可用于核移植的转基因细胞克隆。通过PCR扩增得到的KAP6-1基因启动子,然后与RT-PCR扩增得到的KIFⅡ-9 cDNA序列连接构成皮肤特异性表达载体pcDNA3.1-KK,将重组表达载体以脂质体介导转染胎儿成纤维细胞,通过G418筛选获得转基因细胞克隆,结果显示,外源KAP6-1启动子序列和KIFⅡ-9 cDNA整合到细胞基因组中,为下一步通过核移植方法获得转基因绒山羊提供了条件。 展开更多
关键词 辽宁绒山羊 角蛋白Ⅱ型中间丝基因 毛囊特异性表达载体 转基因体细胞
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角蛋白裂解法治疗亚临床阶段人乳头瘤病毒感染的临床试验研究
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作者 刘永浩 王玉玲 +1 位作者 姚勇 肖凤华 《中国医药科学》 2015年第17期181-183,188,共4页
目的探讨角蛋白裂解法治疗亚临床阶段人乳头瘤病毒感染的临床效果。方法自行配置药物治疗亚临床阶段人乳头瘤病毒感染尖锐湿疣患者31例,涂擦整个外阴表皮和肛周表皮,每周记录皮损情况,并记录是否有病理复发情况。同时在皮肤的第二个增... 目的探讨角蛋白裂解法治疗亚临床阶段人乳头瘤病毒感染的临床效果。方法自行配置药物治疗亚临床阶段人乳头瘤病毒感染尖锐湿疣患者31例,涂擦整个外阴表皮和肛周表皮,每周记录皮损情况,并记录是否有病理复发情况。同时在皮肤的第二个增殖周期是做HPV-DNA-PCR检查,并记录检查的结果。结果 31例患者在用药过程中,在一个皮肤增殖周期内有约20例复发,在第一个皮肤增殖周期中未见有疣体长出皮肤表面。HPV-DNA-PCR、阴性率为35.5%。第二个周期是为74.2%。第三个周期时为80.6%。仍然约有20%的病理查出HPV-DNA阳性,但是未见有疣体长出。在检验出的DNA分型中其中HPV6型阳性率最高,HPV6,HPV11,HPV42,HPV18,HPV52,HPV56这六种DNA分型出现约95%的概率。结论本法治疗亚临床阶段人乳头瘤病毒感染效果良好,副作用小。 展开更多
关键词 角蛋白 角蛋白相关中间丝聚合蛋白 人乳头瘤病毒 过氧二酰胺 乙酸 甘油
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转K2.9基因绒山羊体细胞核移植技术体系的优化研究 被引量:1
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作者 潘晓燕 于永生 +5 位作者 刘晓辉 王正朝 王晓阳 朴庆林 张立春 金海国 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2012年第10期2067-2075,共9页
【目的】利用体细胞核移植技术制备转毛角蛋白Ⅱ型中间丝K2.9基因的高绒质绒山羊胚胎,为绒山羊优良品种的培育提供一种全新的技术材料。【方法】以含有Neor基因标记的K2.9毛囊特异表达载体pcDNA3.1-K转染绒山羊胎儿成纤维细胞,经G418筛... 【目的】利用体细胞核移植技术制备转毛角蛋白Ⅱ型中间丝K2.9基因的高绒质绒山羊胚胎,为绒山羊优良品种的培育提供一种全新的技术材料。【方法】以含有Neor基因标记的K2.9毛囊特异表达载体pcDNA3.1-K转染绒山羊胎儿成纤维细胞,经G418筛选获得转K2.9基因细胞,将获得的转基因阳性细胞与体外成熟的绒山羊卵母细胞进行核移植,并对生产的重构胚进行了体外培养。本文分别进行了激活方法、供体细胞和卵母细胞来源的筛选,且对获得的囊胚进行了PCR鉴定。【结果】(1)Iono+6-D对成年羊卵母细胞的孤雌激活效果好于A23187+6-D,显著提高了胚胎的卵裂率。(2)羔羊孤雌胚的卵裂率显著低于成年羊,但囊胚率差异不显著。(3)来自2只绒山羊胎儿的转基因成纤维细胞对核移植胚的发育没有显著影响,但2号羊的转基因细胞显著提高了融合率。(4)以羔羊卵进行核移植,显著降低了核移植胚的发育率。(5)对获得的囊胚进行PCR鉴定,成功扩增到目的基因。【结论】将K2.9毛囊特异表达载体pcDNA3.1-K转染的绒山羊胎儿成纤维细胞作为供体细胞,核移植到成年羊卵母细胞中,以Iono+6-D进行激活,首次成功、高效地获得携带K2.9基因的绒山羊囊胚。 展开更多
关键词 绒山羊 角蛋白Ⅱ型中间丝基因 胎儿成纤维细胞 转基因 体细胞核移植
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