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小鼠金属硫蛋白──I　cDNA在蓝藻中的克隆和表达 被引量：15
1
作者 孙军 金苹 +3 位作者 徐旭东 施定基 李令媛 茹炳根 《生物工程进展》 CSCD 1994年第6期39-42,共4页
生物工程技术在工业、农业和环境保护上的应用日益广泛，将工程微生物应用于环境污染的治理，是一条快速、安全又经济的途径。本文报道了获得一种清除重金属污染工程藻的研究。将小鼠金属硫蛋白－Ｉ（ｍｏｕｓｅｍｅｔａｌｌｏｔｈｉｏ... 生物工程技术在工业、农业和环境保护上的应用日益广泛，将工程微生物应用于环境污染的治理，是一条快速、安全又经济的途径。本文报道了获得一种清除重金属污染工程藻的研究。将小鼠金属硫蛋白－Ｉ（ｍｏｕｓｅｍｅｔａｌｌｏｔｈｉｏｎｅｉｎ－Ｉ，ｍＭＴ－Ｉ）ｃＤＮＡ基因片段插入到质粒ｐＲＬ４３９上的强启动子ＰｐｓｂＡ之后，并与穿梭载体ｐＤＣ－８相连构建成功大肠杆菌──蓝藻穿梭表达载体ｐＤＣ－ＭＴ，然后通过三亲结合转移法将ｐＤＣ－ＭＴ转入固氮丝状体蓝藻鱼腥藻（Ａｎａｂａｅｎａ）７１２０中，经新霉素筛选获遗传稳定的转外源ＤＮＡ藻株；纯化单藻落扩大培养后，提取蓝藻质粒，斑点杂交确定ｍＭＴ－ＩｃＤＮＡ的转人；在培养基中加入重金属Ｃｄ，培养后收集藻细胞，用ＷｅｓｔｅｒｎＢｌｏｔｔｉｎｇ，极谱法和原子吸收等多种方法确定金属硫蛋白的表达，并计算表达量约为４０μｇＭＴ／ｇ藻鲜重。 展开更多
关键词 金属硫蛋白 蓝藻 角腥藻 表达 CDNA 基因克隆
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