视网膜祖细胞干细胞特性及移植入视网膜后的研究 被引量：5

1

作者 万瑾 郑华 +3 位作者 俞亦龄 佘振珏 肖虹蕾 周国民 《解剖学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第1期3-6,F0004,共5页

目的：研究视网膜祖细胞的干细胞特性及移植入视网膜后的存活和迁移。方法：体外培养胎龄18d 大鼠的视网膜细胞,用 RT-PCR、细胞免疫荧光方法鉴定其增殖分化；成年 SD 大鼠腹腔注射 N-甲基-N-亚硝基脲形成视网膜感光细胞退化的动物模型... 目的：研究视网膜祖细胞的干细胞特性及移植入视网膜后的存活和迁移。方法：体外培养胎龄18d 大鼠的视网膜细胞,用 RT-PCR、细胞免疫荧光方法鉴定其增殖分化；成年 SD 大鼠腹腔注射 N-甲基-N-亚硝基脲形成视网膜感光细胞退化的动物模型,培养的视网膜祖细胞用 CM-Di(?) 标记后,移植入模型鼠的玻璃体腔。结果：视网膜祖细胞体外表达中间神经丝蛋白 nestin；表达 Flk-1、Pax6及 Notchl 的 mRNA；能掺入 BrdU；分化后表达视网膜各类细胞特异性蛋白；移植后在实验组大鼠视网膜能存活及迁移,而在对照组中仅聚集在玻璃体腔。结论：视网膜祖细胞具有干细胞特性,移植入受损伤视网膜后,能存活、整合及迁移。 展开更多

关键词 视网膜祖细胞 干细胞 细胞移植 视网膜 细胞存活 细胞运动

下载PDF 职称材料

干细胞对视网膜神经节细胞再生的保护作用 被引量：1

2

作者 张春丽 刘景晨 +4 位作者 周文杰 俞永珍 汤翠翠 邹秀兰 邹玉平 《中国组织工程研究》 CAS 北大核心 2023年第10期1593-1602,共10页

背景:视网膜神经节细胞的损害是不可逆性视力丧失的重要原因,干细胞在此类疾病的治疗研究中显示出巨大的潜力,但关于干细胞与眼部组织关系、发挥视神经保护机制的综合性描述较少。目的:从干细胞来源及其对视网膜神经节细胞功能维持的作... 背景:视网膜神经节细胞的损害是不可逆性视力丧失的重要原因,干细胞在此类疾病的治疗研究中显示出巨大的潜力,但关于干细胞与眼部组织关系、发挥视神经保护机制的综合性描述较少。目的:从干细胞来源及其对视网膜神经节细胞功能维持的作用出发,阐述干细胞在视网膜神经节细胞保护和再生研究中的作用与进展。方法:以“干细胞、视网膜前体细胞、视网膜祖细胞、转分化”与“视网膜神经节细胞、视网膜退行、视网膜变性”为中文关键词在万方和中国知网数据库中进行检索,以“stem cell,retinal precursor cell,retinal progenitor cell,trans differentiation”与“retinal ganglion cell,RGC,retinal degeneration”为英文关键词,分别在PubMed数据库中搜索,最终按入组标准纳入文献102篇进行综述分析。结果与结论:(1)哺乳动物眼内存在着视网膜干细胞和视网膜祖细胞,但其数量稀少、分化潜能受到限制,导致眼内视网膜神经节细胞的再生能力低下。(2)体外培养显示眼内组织中有多种细胞能直接分化为视网膜神经节细胞、另外部分细胞具有重编程为视网膜干细胞的潜能,寻找促进这些细胞增殖、分化及重编程的条件可极大地促进视网膜神经节细胞的眼内再生。(3)由于目前技术的限制,眼外干细胞的视网膜神经节细胞再生需经体外培养、诱导分化及手术再植入眼内等多个过程,步骤繁琐,但由于眼外干细胞的来源广泛、细胞数量众多,仍是视网膜神经节细胞再生研究的重点。(4)干细胞可提高受损视网膜神经节细胞的存活率并维持细胞的功能,通过表达神经营养因子、降低炎症反应、改善缺血、促进其他细胞重编程为视网膜干细胞等机制是干细胞发挥视神经保护作用的基础。(5)在干细胞为基础的视网膜神经节细胞再生研究中,存在着肿瘤形成的风险、移植细胞缺乏附着且整合到宿 展开更多

关键词 干细胞 视网膜祖细胞 视神经 视网膜神经节细胞 分化 玻璃体腔注射 视神经再生 视神经保护

下载PDF 职称材料

基因编辑技术在视神经再生修复中的应用

3

作者 隗雨 马琼 +2 位作者 王常科 梁玉玲 康宏向 《激光生物学报》 CAS 2023年第5期414-422,共9页

视网膜极易因激光意外事故、中枢神经或视网膜退行性疾病发生异常改变,严重威胁视功能。目前,仍没有针对哺乳动物视网膜损伤的完善修复机制。视网膜“干细胞”穆勒胶质(MG)细胞不能自发进入细胞周期,基因编辑手段可使MG细胞转分化,从而... 视网膜极易因激光意外事故、中枢神经或视网膜退行性疾病发生异常改变,严重威胁视功能。目前,仍没有针对哺乳动物视网膜损伤的完善修复机制。视网膜“干细胞”穆勒胶质(MG)细胞不能自发进入细胞周期,基因编辑手段可使MG细胞转分化,从而具有视网膜祖细胞的能力。转分化相关信号通路及调控因子对MG基因组重编程至关重要。基因编辑治疗利用腺病毒、慢病毒等载体将外源基因导入体内,促使哺乳动物受损视网膜中MG细胞激增和去分化,损伤的视网膜神经元再生。与传统药物治疗需要长期服药相比,基因疗法的出现有望实现通过一次治疗达到修复目的。文章就视网膜修复机制、调控视神经再生的信号通路以及基因治疗修复损伤视网膜研究现状和应用过程中存在的问题进行综述,并展望未来相关的发展趋势。未来基因编辑治疗将会给视神经再生修复研究带来深刻变革,为视网膜疾病的治疗带来新的曙光。 展开更多

关键词 视网膜损伤修复 视神经再生 视网膜祖细胞 基因治疗 基因编辑技术

下载PDF 职称材料

大鼠胚胎视网膜祖细胞分离培养及其分化特性 被引量：3

4

作者 李艳 佘振珏 周国民 《解剖学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第3期249-251,F002,共4页

目的:建立大鼠胚胎视网膜祖细胞体外培养方法并观察其分化特性。方法:取孕18d大鼠胚胎,用无血清培养技术扩增视网膜祖细胞;用免疫细胞化学、扫描电镜与透射电镜技术对祖细胞的特性及诱导分化的细胞类型进行鉴定。结果:从胚胎大鼠视网膜... 目的:建立大鼠胚胎视网膜祖细胞体外培养方法并观察其分化特性。方法:取孕18d大鼠胚胎,用无血清培养技术扩增视网膜祖细胞;用免疫细胞化学、扫描电镜与透射电镜技术对祖细胞的特性及诱导分化的细胞类型进行鉴定。结果:从胚胎大鼠视网膜神经部分离的细胞具有增殖能力,可进行传代培养,获得的细胞球能表达Nestin并具有掺入BrdU的能力。诱导分化后的细胞表达,其中,Thy1.1+细胞最多,Opsin+细胞次之,GS+细胞较少,PKC+细胞少,Syntaxin+及Peripherin+细胞极少,不表达CalbindinD28K。结论:从胚胎大鼠分离的细胞具有自我增殖能力和多向分化潜能,属于视网膜祖细胞;诱导分化产生5种视网膜细胞,以节细胞最多,未见水平细胞。 展开更多

关键词 大鼠胚胎 细胞分离培养 视网膜祖细胞 CALBINDIN 无血清培养技术 体外培养方法 免疫细胞化学 诱导分化 透射电镜技术 Nestin 多向分化潜能 增殖能力 胚胎大鼠 视网膜神经 D-28K 视网膜细胞 细胞类型 扫描电镜 传代培养

下载PDF 职称材料

胚胎大鼠视网膜超微结构与Nestin表达的增龄变化 被引量：2

5

作者 李艳 佘振珏 +1 位作者 俞彰 周国民 《中国组织化学与细胞化学杂志》 CAS CSCD 2004年第2期138-141,共4页

目的　研究在体视网膜祖细胞分布及分化发育规律。方法　运用透射电镜观察E18(E :胚胎 )视网膜超微结构 ,采用免疫组化了解Nestin在不同发育时期视网膜的表达变化。结果　E18视网膜超微结构 :①在神经母细胞层中、外侧 ,大多数细胞核浆... 目的　研究在体视网膜祖细胞分布及分化发育规律。方法　运用透射电镜观察E18(E :胚胎 )视网膜超微结构 ,采用免疫组化了解Nestin在不同发育时期视网膜的表达变化。结果　E18视网膜超微结构 :①在神经母细胞层中、外侧 ,大多数细胞核浆比例大 ,核呈纺锤形或椭圆形 ,染色较深 ,常染色质细小 ,异染色质少 ,胞质内含丰富核糖体及少量线粒体。②在近巩膜侧的神经母细胞层可见有丝分裂细胞。 2 .Nestin表达丰富的部位主要集中在E16和E18的神经母细胞层 ;P4和P7(P :出生后 )发育期内网层和神经纤维层 ,但在P2 1,Nestin在视网膜包括睫状体边缘区均呈阴性。结论　 1.E18视网膜祖细胞主要位于神经母细胞层。 2 .Nestin阳性细胞产生视网膜细胞的顺序是先产生节细胞 ,感光细胞和内核层细胞次之 ,最后为米勒细胞。 展开更多

关键词 视网膜祖细胞 超微结构 巢蛋白

下载PDF 职称材料

Leptin对缺氧状态下大鼠视网膜祖细胞体外增殖和分化的影响

6

作者 邢瑶 刘子瑶 +1 位作者 张晓辉 王建明 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第3期354-359,共6页

目的 探讨Leptin对体外培养的缺氧状态下视网膜祖细胞(RPCs)增殖、分化的影响及细胞中PTEN蛋白表达的变化。方法 原代培养大鼠RPCs,不同浓度Leptin作用RPCs细胞,分为:常氧培养组(Control组)、缺氧培养(Hypoxia)+0、0.3、1.0、3.0、10、3... 目的 探讨Leptin对体外培养的缺氧状态下视网膜祖细胞(RPCs)增殖、分化的影响及细胞中PTEN蛋白表达的变化。方法 原代培养大鼠RPCs,不同浓度Leptin作用RPCs细胞,分为:常氧培养组(Control组)、缺氧培养(Hypoxia)+0、0.3、1.0、3.0、10、30 nmol/L Leptin组,分别培养至12、24、48 h,CCK-8法检测细胞增殖活性。将原代培养的RPCs细胞分为:Control组、Hypoxia组、Hypoxia+Leptin组,培养48 h后,转换为分化培养基继续培养6 d,采用免疫荧光染色法对GFAP阳性细胞比例和β-tubulin Ⅲ阳性细胞比例进行统计分析。Control组、Hypoxia组、Hypoxia+Leptin组细胞培养48 h后,采用Western blot法检测各组RPCs中PTEN蛋白表达水平。结果 原代培养的P0代RPCs为圆形悬浮生长,培养2 d后细胞可聚集成神经球。低浓度Leptin(0.3、1.0、3.0 nmol/L)作用RPCs 48 h,细胞增殖活性较Control组及Hypoxia组增强,RPCs细胞增殖活性随Leptin浓度增高呈递增趋势,其中,3.0 nmol/L Leptin作用48 h细胞增殖活性最强(P<0.05);高浓度Leptin(10 nmol/L,30 nmol/L)组细胞增殖活性较对照组减弱(P<0.05)。细胞培养48 h,与Control组及Hypoxia组相比,Hypoxia+Leptin组β-tubulin Ⅲ阳性细胞比例和GFAP阳性细胞比例均无显著性差异(P>0.05),而PTEN蛋白表达量较对照组显著下调(P<0.05)。结论 低浓度Leptin可促进缺氧状态下大鼠RPCs细胞增殖,抑制细胞中PTEN蛋白表达,对细胞分化无明显影响。 展开更多

关键词 LEPTIN 缺氧 视网膜祖细胞 细胞增殖 细胞分化

下载PDF 职称材料

BrdU标记小鼠视网膜祖细胞的研究 被引量：1

7

作者 孙雪荣 董志章 +2 位作者 邓飞 胡惠玲 葛坚 《生物医学工程学杂志》 EI CAS CSCD 北大核心 2013年第1期125-130,共6页

为了探讨BrdU(5-Bromo-2′-deoxyuridine)体外标记视网膜祖细胞(RPCs)的适宜浓度,将不同浓度BrdU(0.2、1、5和10μmol/L)与小鼠孕龄(E)17.5dRPCs共培养48h后,进行增殖或分化培养。用免疫荧光检测BrdU标记百分率及细胞分化潜能,用细胞计... 为了探讨BrdU(5-Bromo-2′-deoxyuridine)体外标记视网膜祖细胞(RPCs)的适宜浓度,将不同浓度BrdU(0.2、1、5和10μmol/L)与小鼠孕龄(E)17.5dRPCs共培养48h后,进行增殖或分化培养。用免疫荧光检测BrdU标记百分率及细胞分化潜能,用细胞计数法检测其增殖能力,用乳酸脱氢酶(LDH)法检测其细胞毒性。结果发现,0.2μmol/L BrdU不能明显标记RPCs,而1、5和10μmol/L 3种浓度BrdU均可有效标记RPCs,且三者的标记率相近(P>0.05),1μmol/L BrdU无明显细胞毒性,对RPCs增殖、分化亦无明显影响,而5μmol/L和10μmol/L Br-dU均能抑制细胞增殖,并引起LDH释放增加,说明有明显的细胞毒性,10μmol/L BrdU还会阻碍RPCs向MAP2+神经元方向分化,但对其向GFAP+或glutamine synthetase+神经胶质细胞分化无明显影响。本研究表明,1μmol/L BrdU既能有效标记E17.5RPCs,又无显著毒副作用,是较适宜的浓度。 展开更多

关键词 视网膜祖细胞 BRDU 细胞毒性 分化

原文传递

miR-326-3p对视网膜祖细胞分化调控作用的研究

8

作者 高慧芹 庄艾 +1 位作者 张丹丹 谷平 《临床眼科杂志》 2020年第4期299-302,共4页

目的探讨微小RNA-326-3p(miR-326-3p)在视网膜祖细胞(RPCs)分化过程中的作用,旨在为干细胞移植治疗视网膜退行性疾病研究提供新的思路。方法将RPCs随机分为对照组(Control组)、miR-326-3p过表达组(Mimics组)和miR-326-3p敲降组(Inhibit... 目的探讨微小RNA-326-3p(miR-326-3p)在视网膜祖细胞(RPCs)分化过程中的作用,旨在为干细胞移植治疗视网膜退行性疾病研究提供新的思路。方法将RPCs随机分为对照组(Control组)、miR-326-3p过表达组(Mimics组)和miR-326-3p敲降组(Inhibitors组),在分化培养基中培养7 d后,分别转染miR-326-3p-Control、Mimics和Inhibitors,转染48 h后收取细胞RNA和蛋白,通过qPCR实验和Western blotting实验检测RPCs分化指标胶质细胞标记物(GFAP)、双极神经元标记物(PKC-a)、视杆细胞标记物(Rhodopsin)、视锥和视杆细胞标记物(Recoverin)和中间神经元标记物β3-微管蛋白(β3-tubulin)在3组中的表达量。结果(1)miR-326-3p在视网膜祖细胞分化过程中的表达量明显增加;(2)与Control组相比,Mimics组中miR-326-3p过表达后RPCs分化指标GFAP、PKC-a、Rhodopsin、Recoverin和β3-tubulin表达量明显的增加;而Inhibitors组中敲除miR-326-3p后这些分化指标明显降低。结论miR-326-3p在视网膜祖细胞分化过程中内源性表达量明显增加,并且其对视网膜祖细胞的分化有明显促进作用。 展开更多

关键词 微小RNA-326-3p 视网膜祖细胞 分化 视网膜退行性疾病

下载PDF 职称材料

治疗致盲性眼病的干细胞来源及应用

9

作者 何翔宇 龚宇 +2 位作者 卞白士姣 付琰 阴正勤 《中国细胞生物学学报》 CAS CSCD 2017年第6期833-838,共6页

除了人胚胎、胎儿脐带血中已经发现的多种干细胞,在成体哺乳动物组织器官特异性的干细胞龛位(生态位)中,包括骨髓、脑、皮肤、心脏、眼、肾、肺、胃肠道、胰腺、肝、乳房、卵巢以及睾丸中也发现了相当种类的成体干细胞群。以上干细胞均... 除了人胚胎、胎儿脐带血中已经发现的多种干细胞,在成体哺乳动物组织器官特异性的干细胞龛位(生态位)中,包括骨髓、脑、皮肤、心脏、眼、肾、肺、胃肠道、胰腺、肝、乳房、卵巢以及睾丸中也发现了相当种类的成体干细胞群。以上干细胞均处于相对未分化状态,并保留了自我更新及向特定组织分化的潜能,这让干细胞具备了维持组织稳态和修复创伤后组织的能力。近年来,再生医学领域不乏运用干细胞直接进行或诱导成为视觉相关细胞后再进行眼病治疗的研究,体现了干细胞治疗极其广阔的应用前景。该文将综述用于致盲性眼病治疗的干细胞潜在来源以及相关研究进展。 展开更多

关键词 致盲性眼病 干细胞 成体干细胞 诱导多能干细胞 胚胎干细胞 视网膜祖细胞

原文传递

胚胎干细胞诱导分化为视网膜祖细胞的体外研究

10

作者 邱莹 彭广华 《眼科新进展》 CAS 北大核心 2015年第5期404-408,共5页

目的探讨小鼠胚胎干细胞(mouse embryonic stem cell,m ESC)诱导为视网膜祖细(retinal progenitor cells,RPC)的体外培养方法,为致盲性视网膜变性疾病的治疗提供种子细胞。方法用细胞免疫荧光染色法和流式细胞术对m ESC进行m ESC标记物... 目的探讨小鼠胚胎干细胞(mouse embryonic stem cell,m ESC)诱导为视网膜祖细(retinal progenitor cells,RPC)的体外培养方法,为致盲性视网膜变性疾病的治疗提供种子细胞。方法用细胞免疫荧光染色法和流式细胞术对m ESC进行m ESC标记物阶段特异性胚胎抗原1、细胞增殖核抗原Ki67、细胞周期和碱性磷酸酶进行鉴定后,在无血清条件下悬浮培养形成拟胚体(embryoid bodies,EB)并添加抑制因子1、左右决定因子A和γ-促分泌酶抑制剂等诱导分化为RPC,并对其分化的细胞进行标记物兔来源配对盒基因6(paired box6,Pax6)、兔来源性别决定区Y框蛋白(Sox2)和鼠来源转录因子同源异型框蛋白(orthodentical homeobox 2,Otx2)的检测以及增殖能力和细胞周期的检测。结果 m ESC标记物碱性磷酸酶阳性表达,特异性胚胎抗原1阳性率为(80.66±0.64)%,Ki67和细胞周期检测显示有较高增殖能力。定向诱导分化后,RPC标记物Pax6、Sox2和Otx2阳性率分别为(50.87±2.97)%、(49.10±2.60)%和(32.01±3.87)%,Ki67和细胞周期检测均显示诱导后的RPC具有一定的增殖能力。结论在特定的细胞因子作用下,m ESC可以诱导分化为RPC。 展开更多

关键词 胚胎干细胞 视网膜祖细胞 分化

下载PDF 职称材料

缺氧培养下大鼠视网膜祖细胞与脑神经干细胞内钙离子浓度差异的研究（英文）

11

作者 高珊 康前雁 +1 位作者 李雪颖 罗禹 《国际眼科杂志》 CAS 2013年第2期219-224,共6页

目的:比较缺氧培养条件下新生大鼠视网膜祖细胞(retinal progenitor cells,RPCs)与脑神经干细胞(neural stemcells,NSCs)钙离子浓度的差异。方法:分离新生大鼠RPCs及大脑皮质NSCs,进行无血清体外培养;采用荧光免疫细胞化学的方法进行干... 目的:比较缺氧培养条件下新生大鼠视网膜祖细胞(retinal progenitor cells,RPCs)与脑神经干细胞(neural stemcells,NSCs)钙离子浓度的差异。方法:分离新生大鼠RPCs及大脑皮质NSCs,进行无血清体外培养;采用荧光免疫细胞化学的方法进行干细胞鉴定;缺氧培养后,光镜观察细胞形态,采用钙离子荧光探针结合激光共聚焦显微镜测定细胞内钙离子荧光强度。结果:缺氧培养后,大脑皮质NSCs较早出现肿胀、伸出突起等变化,随缺氧时间延长,两种细胞内钙离子荧光强度逐渐增强,缺氧12h后RPCs内钙离子荧光强度小于脑皮质NSCs(P<0.05),差异具有统计学意义。结论:缺氧培养12hRPCs内钙离子浓度低于大脑皮质NSCs。 展开更多

关键词 视网膜祖细胞 脑神经干细胞 缺氧 钙离子浓度

下载PDF 职称材料

The Isolation, incubation and differentiation of retinal progenitor cells

12

作者 YanLi ZhenjueShe GuominZhou 《中国组织化学与细胞化学杂志》 CAS CSCD 2004年第3期373-373,共1页

关键词 分离 培养 分化 视网膜祖细胞 增殖

下载PDF 职称材料