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敲除BLM基因的MDA-MB-231乳腺癌细胞株的构建
1
作者 黄晏军 郑艺 +2 位作者 汤长宁 刘金河 刘杰麟 《贵州医科大学学报》 CAS 2018年第5期503-507,共5页
目的:应用规律成簇间隔短回文重复序列(CRISPR/Cas9)技术构建敲除BLM基因的人乳腺癌MDA-MB-231细胞株。方法:根据CRISPR/Cas9技术靶点设计原则,在BLM基因的3号外显子设计2条靶向小向导RNA(sgRNA),利用PX459 V2质粒载体,构建PX459 V2-sg... 目的:应用规律成簇间隔短回文重复序列(CRISPR/Cas9)技术构建敲除BLM基因的人乳腺癌MDA-MB-231细胞株。方法:根据CRISPR/Cas9技术靶点设计原则,在BLM基因的3号外显子设计2条靶向小向导RNA(sgRNA),利用PX459 V2质粒载体,构建PX459 V2-sgRNA重组质粒;将建构成功的重组质粒转染至MDA-MB-231细胞中,通过嘌呤霉素筛选获得阳性克隆,使用Cruiser^(TM)核酸内切酶检测打靶效率,将打靶效率较高的阳性克隆进行单克隆培养,再利用免疫印迹法检测筛选出敲除BLM基因的MDA-MB-231乳腺癌细胞株。结果:测序结果表明重组质粒构建成功,免疫印迹法显示敲除BLM基因后的MDA-MB-231细胞中BLM蛋白明显降低,与空白对照组相比,BLM-KO组BLM表达水平明显低于对照组。结论:应用CRISPR/Cas9技术成功构建了BLM基因敲除的MDA-MB-231细胞株。 展开更多
关键词 规律成簇间隔短回文重复序列系统 基因敲除 BLM基因 MDA-MB-231细胞 乳腺癌
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碱基编辑系统的研究进展 被引量：1
2
作者 钟静丽 林健香 +1 位作者 周建奎 乔云波 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第5期1271-1292,共22页
基于可编程核酸酶的基因编辑工具表现出编辑高效、产物纯度高、编辑副产物少的优势,已广泛应用于生物医药研发和作物育种。鉴于研究和应用的需求多样化,开发功能特异的碱基编辑器成为基因编辑领域的研究热点。目前由规律成簇的间隔短回... 基于可编程核酸酶的基因编辑工具表现出编辑高效、产物纯度高、编辑副产物少的优势,已广泛应用于生物医药研发和作物育种。鉴于研究和应用的需求多样化,开发功能特异的碱基编辑器成为基因编辑领域的研究热点。目前由规律成簇的间隔短回文重复序列系统及相关蛋白(clustered regularly interspaced short palindromic repeats and CRISPR-associated, CRISPR-Cas)和转录激活因子类效应因子(transcription activator-like effector, TALE)系统衍生的基因编辑系统包括单碱基编辑器、双碱基编辑器、线粒体碱基编辑器和CRISPR相关转座酶系统等。本文全面梳理了碱基编辑系统的发展历程,总结了各类碱基编辑器的特点、脱靶效应、优化和改良策略等,为基因编辑系统的进一步改进和应用提供参考。 展开更多
关键词 规律成簇的间隔短回文重复序列系统及相关蛋白9(CRISPR-Cas9) 碱基编辑器 转录激活因子类效应因子(TALE)系统 脱氨酶
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基于CRISPR-Cas的检测方法在RNA病毒检测中的应用现状和进展
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作者 田靖 刘刚 +2 位作者 周志坚 任瑞文 陈惠鹏 《中华医院感染学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2023年第24期3828-3834,共7页
目的 为了突破传统聚合酶链式反应(PCR)方法的限制,开发一种快速、准确和简便的检测方法用于RNA病毒检测,在新发传染病的控制方面尤为重要。本文根据基于规律成簇的间隔短回文重复序列(CRISPR)-CRISPR相关蛋白(Cas)系统的相关检测技术... 目的 为了突破传统聚合酶链式反应(PCR)方法的限制,开发一种快速、准确和简便的检测方法用于RNA病毒检测,在新发传染病的控制方面尤为重要。本文根据基于规律成簇的间隔短回文重复序列(CRISPR)-CRISPR相关蛋白(Cas)系统的相关检测技术在核糖核酸(RNA)病毒检测中的应用现状进行了文献调研和总结,对CRISPR-Cas检测系统的分类和主要差异进行了归纳和比较说明,梳理了基于CRISPR-Cas系统开发的可用于检测RNA病毒的各类检测技术的常用开发策略,并对CRISPR-Cas系统在病原检测应用中的关键技术环节进行了综合分析,提出一些目前存在的解决方案,为基于CRISPR-Cas系统的RNA病毒检测平台建立和快速检测试剂的开发和研究提供一些参考和思路。 展开更多
关键词 基于规律成簇的间隔短回文重复序列-基于规律成簇的间隔短回文重复序列相关蛋白系统 RNA病毒检测 核酸检测 策略
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