RNA干扰沉默SOX9对肾细胞癌786-O细胞体外增殖、凋亡及裸鼠成瘤能力的影响 被引量：12

1

作者 楚广民 张建波 孙淼淼 《分子诊断与治疗杂志》 2018年第3期174-179,195,共7页

目的探讨RNA干扰沉默SOX9(sex determining region Y-box 9)对肾细胞癌786-O细胞体外增殖、凋亡及裸鼠成瘤能力的影响。方法以SOX9特异性的小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)序列为实验沉默组,非特异性的siRNA序列为对照组分别转... 目的探讨RNA干扰沉默SOX9(sex determining region Y-box 9)对肾细胞癌786-O细胞体外增殖、凋亡及裸鼠成瘤能力的影响。方法以SOX9特异性的小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)序列为实验沉默组,非特异性的siRNA序列为对照组分别转染786-O细胞。采用CCK-8实验与平板克隆形成实验检测786-O细胞的增殖,采用Hoechst 33342细胞染色法检测786-O细胞凋亡。通过裸鼠成瘤实验检测RNA干扰沉默SOX9对动物体内成瘤能力的影响。采用免疫组织化学技术检测增殖抗原Ki-67蛋白的表达情况。结果 siRNA转染细胞后,与对照组比,SOX9沉默组OD值明显降低,细胞集落数较对照组明显减少,差异具统计学意义(P<0.05)。与对照组相比,SOX9沉默组细胞凋亡明显增加,差异有统计学意义(P<0.05)。动物成瘤实验结果表明,SOX9沉默组瘤体体积及重量较对照组明显减少,差异有统计学意义(P<0.05)。免疫组织化学染色表明,siRNA沉默组Ki-67阳性细胞比例较对照组明显降低,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 RNA干扰沉默SOX9能显著抑制肾细胞癌786-O细胞的增殖,促进其凋亡,并且能够抑制肾癌细胞在裸鼠体内的增殖。 展开更多

关键词 小干扰RNA SOX9 786-O细胞 裸鼠成瘤

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RNAi沉默Rac1基因对结肠癌细胞增殖及裸鼠成瘤的影响 被引量：9

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作者 解娜 黄幼生 +1 位作者 罗志飞 薛逢贵 《山东医药》 CAS 北大核心 2016年第40期1-4,I0001,共5页

目的：探讨RNAi沉默Rac1基因对结肠癌细胞增殖及裸鼠成瘤的影响。方法①细胞实验：体外培养结肠癌细胞SW480，随机分为空白对照组、阴性对照组、shRNA-Rac1组，阴性对照组、shRNA-Rac1组分别转染空载质粒慢病毒、shRNA-Rac1慢病毒。采用... 目的：探讨RNAi沉默Rac1基因对结肠癌细胞增殖及裸鼠成瘤的影响。方法①细胞实验：体外培养结肠癌细胞SW480，随机分为空白对照组、阴性对照组、shRNA-Rac1组，阴性对照组、shRNA-Rac1组分别转染空载质粒慢病毒、shRNA-Rac1慢病毒。采用RT-PCR技术、Western blotting法检测各组Rac1 mRNA及其蛋白表达；采用MTT法检测各组转染24、48、72、96 h的细胞增殖情况。②动物实验：取shRNA-Rac1组、阴性对照组转染后细胞分别接种于裸鼠皮下，建立结肠癌裸鼠移植瘤模型（分别记为观察组、对照组），观察裸鼠成瘤及移植瘤生长情况，喂养35天脱臼处死，完整剥离肿瘤组织，称取瘤体质量并测量肿瘤体积。同时检测瘤体 Rac1蛋白表达情况。结果①细胞实验：与阴性对照组比较，shRNA-Rac1组Rac1 mRNA及其蛋白表达明显降低（P均＜0．05）；与阴性对照组比较，shRNA-Rac1组各时间点细胞增殖速度明显降低（P均＜0．05）。②动物实验：对照组癌细胞接种4～8天均可见瘤体形成，观察组接种35天仅2只成瘤，且瘤体形成时间较对照组晚10天。接种35天，观察组、对照组瘤体体积分别为（32．54±43．13）、（948．13±523．50）mm3，瘤体质量分别为（0．023±0．031）、（0．873±0．372）g，两组比较P均＜0．01。与对照组比较，观察组瘤体组织Rac1蛋白阳性表达率明显降低（ P＜0．05）。结论抑制Rac1表达能降低结肠癌细胞增殖速度，抑制裸鼠移植瘤生长。 展开更多

关键词 结肠癌 RAC1 RNA干扰 裸鼠成瘤 细胞增殖

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蛇床子素抑制PI3K/AKT/mTOR的活化诱导视网膜母细胞瘤Y79细胞凋亡和抑制裸鼠成瘤的研究 被引量：8

3

作者 杨娟 唐燕君 +2 位作者 李文东 李红军 康帅 《解放军医药杂志》 CAS 2020年第8期15-19,共5页

目的研究蛇床子素通过抑制PI3K/AKT/mTOR的活化,诱导视网膜母细胞瘤Y79细胞凋亡和抑制裸鼠成瘤的作用。方法将Y79细胞分为对照组和蛇床子素8、16、32μmol/L组,对照组给予生理盐水,不同浓度蛇床子素组细胞分别给予蛇床子素8、16、32μmo... 目的研究蛇床子素通过抑制PI3K/AKT/mTOR的活化,诱导视网膜母细胞瘤Y79细胞凋亡和抑制裸鼠成瘤的作用。方法将Y79细胞分为对照组和蛇床子素8、16、32μmol/L组,对照组给予生理盐水,不同浓度蛇床子素组细胞分别给予蛇床子素8、16、32μmol/L干预。检测不同浓度蛇床子素对Y79细胞凋亡和胞内磷脂酰肌醇激酶(PI3K)、蛋白激酶B(AKT)、雷帕霉素靶蛋白(mTOR)mRNA及蛋白的影响。构建视网膜母细胞瘤裸鼠腋下异位移植瘤模型,并观察蛇床子素20、50、100 mg/kg处理的裸鼠成瘤情况。结果与对照组比较,8、16、32μmol/L的蛇床子素组细胞凋亡率均显著增加,且呈浓度依赖性(P<0.05)。与对照组比较,8、16、32μmol/L的蛇床子素凋亡蛋白Caspase-3、Caspase-9的mRNA及蛋白表达水平增高,PI3K、AKT、mTOR磷酸化水平减低,且呈浓度依赖性(P<0.05)。与对照组比较,20、50、100 mg/kg的蛇床子素组裸鼠视网膜母细胞瘤体积和重量降低,且呈剂量依赖性(P<0.05)。结论蛇床子素可通过抑制PI3K/AKT/mTOR的活化来诱导视网膜母细胞瘤Y79细胞凋亡和抑制裸鼠成瘤。 展开更多

关键词 蛇床子素 PI3K/AKT/MTOR 视网膜母细胞瘤 Y79细胞凋亡 裸鼠成瘤 小鼠 近交BALB C

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阿司匹林对人慢性粒细胞白血病细胞株K562的生长抑制作用 被引量：8

4

作者 王芳妹 杨子剑 +2 位作者 韩梅 胡翔 丁小凤 《湖南师范大学自然科学学报》 CAS 北大核心 2013年第5期75-80,共6页

为研究阿司匹林对人慢性粒细胞白血病细胞株K562生长的影响,采用光学显微镜和Hoechst 33258染色观察阿司匹林处理后细胞的形态和数目变化,显示阿司匹林促进K562细胞的凋亡.MTT法、细胞计数、软琼脂克隆形成实验、FACS和裸鼠成瘤实验在... 为研究阿司匹林对人慢性粒细胞白血病细胞株K562生长的影响,采用光学显微镜和Hoechst 33258染色观察阿司匹林处理后细胞的形态和数目变化,显示阿司匹林促进K562细胞的凋亡.MTT法、细胞计数、软琼脂克隆形成实验、FACS和裸鼠成瘤实验在体外和体内检测阿司匹林对K562细胞增殖和存活的影响,发现阿司匹林明显抑制K562细胞的体外增殖和裸鼠体内成瘤能力.Western blot实验分析细胞信号通道下游基因的表达影响,显示β-catenin、STAT5A、PARP和NF-κB p65蛋白的表达量下调,而细胞周期抑制因子p21表达上调.这些结果提示阿司匹林从体外和体内抑制K562细胞的生长,其作用的机制复杂,可能影响β-catenin信号通道、JAK蛋白酪氨酸激酶/STAT5A信号通道、NF-κB信号传导通道和细胞周期的进程. 展开更多

关键词 阿司匹林 慢性粒细胞白血病 细胞增殖 裸鼠成瘤

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Xklp2靶蛋白对肺癌细胞裸鼠成瘤能力的影响及机制研究 被引量：7

5

作者 杨忠信 李晓宇 +2 位作者 蔡静 黄志昂 张双林 《实用医院临床杂志》 2018年第2期4-8,共5页

目的探讨Xklp2靶蛋白(TPX2)对肺癌细胞裸鼠成瘤能力的影响及机制。方法慢病毒感染肺癌细胞A549,以感染TPX2小干扰RNA(siRNA TPX2)和siRNA阴性对照慢病毒的细胞作为siRNA TPX2组和siRNA-NC组,同时以不做处理的细胞为Control组,RT-PCR和We... 目的探讨Xklp2靶蛋白(TPX2)对肺癌细胞裸鼠成瘤能力的影响及机制。方法慢病毒感染肺癌细胞A549,以感染TPX2小干扰RNA(siRNA TPX2)和siRNA阴性对照慢病毒的细胞作为siRNA TPX2组和siRNA-NC组,同时以不做处理的细胞为Control组,RT-PCR和Western blot检测感染后细胞中TPX2水平,噻唑蓝(MTT)检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡,将各组细胞接种到裸鼠皮下,检测各组裸鼠肿瘤体积和重量,Western blot检测肿瘤组织中活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(Cleaved Caspase-3)、TPX2、p53水平。结果 siRNA-NC组细胞中TPX2 mRNA和蛋白水平、细胞增殖活性、凋亡率及Cleaved Caspase-3、TPX2、p53水平与Control组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。siRNA TPX2组细胞中TPX2mRNA和蛋白均明显低于Control组(P<0.05)。siRNA TPX2组细胞增殖活性明显降低,凋亡率明显升高,与Control组比较差异有统计学意义(P<0.05)。接种siRNA TPX2组细胞的裸鼠肿瘤体积和重量均低于Control组,而肿瘤组织中Cleaved Caspase-3、p53水平均高于Control组,TPX2水平低于Control组(P<0.05)。结论下调TPX2抑制肺癌细胞增殖,促进肺癌细胞凋亡,抑制肺癌细胞裸鼠成瘤能力,这可能与促进p53表达和促进Caspase-3活化有关。 展开更多

关键词 Xklp2靶蛋白 肺癌 裸鼠成瘤 凋亡

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胶原蛋白Ⅴ型2链对胃癌细胞增殖、迁移和侵袭及肿瘤生长的调控作用 被引量：1

6

作者 仇建玲 吴胜文 +1 位作者 俞进友 朱正峰 《安徽医药》 CAS 2024年第2期280-285,F0003,共7页

目的 探究胶原蛋白Ⅴ型2链(COL5A2)对胃癌细胞增殖、迁移和侵袭及肿瘤生长的调控作用。方法 于2022年1―3月开展研究,基于TCGA数据库分析COL5A2在胃癌组织、正常组织中的表达差异,COL5A2对胃癌分期的作用及对病人预后的价值。荧光定量... 目的 探究胶原蛋白Ⅴ型2链(COL5A2)对胃癌细胞增殖、迁移和侵袭及肿瘤生长的调控作用。方法 于2022年1―3月开展研究,基于TCGA数据库分析COL5A2在胃癌组织、正常组织中的表达差异,COL5A2对胃癌分期的作用及对病人预后的价值。荧光定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)、蛋白质印迹法(WB)检测正常人胃黏膜上皮细胞GES-1、胃癌细胞MGC-803、MKN-45、SGC7901中COL5A2的表达。慢病毒介导稳定转染shRNA-COL5A2、shRNA、NC的MKN-45细胞。克隆形成实验、细胞计数试剂盒(CCK8)、5-乙炔基-2’-脱氧尿苷(EdU)染色检测细胞的增殖;碘化丙啶(PI)染色检测细胞周期分布;Transwell实验、伤口愈合实验检测细胞的迁移、侵袭能力;裸鼠成瘤实验检测肿瘤的生长;免疫组织化学实验检测肿瘤组织PCNA蛋白。结果 胃癌组织COL5A2相对表达量为4.74±0.45,显著高于正常组织的2.53±0.26(P<0.05),与正常组织相比,胃癌组织中COL5A2升高,与病人临床分期、预后差有关。GES-1组COL5A2相对表达量为0.25±0.04,显著低于胃癌细胞中MGC-803组0.47±0.05、MKN-45组0.72±0.08、SGC7901组0.54±0.04(P<0.05),其中MKN-45升高幅度最大。与shRNA组细胞相比,shRNACOL5A2组细胞COL5A2表达降低,细胞的克隆形成数、在48、72 h的活性、EdU阳性率、迁移和侵袭数量、划痕愈合率均降低,细胞周期阻滞G1/S期,CyclinD1和CDK4表达降低(P<0.05)。异种移植裸鼠成瘤的体积、质量均降低,肿瘤PCNA表达也降低。结论 COL5A2在胃癌中高表达,下调COL5A2抑制癌细胞增殖、迁移侵袭及肿瘤的生长。 展开更多

关键词 胃肿瘤 胶原蛋白Ⅴ型2链 裸鼠成瘤 增殖 迁移 侵袭

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TCF21基因对人肺癌A549细胞裸鼠成瘤的影响 被引量：5

7

作者 陆晓 冼磊 《实用医学杂志》 CAS 北大核心 2016年第8期1226-1229,共4页

目的:通过观察转录因子21(TCF21)基因对人肺癌A549细胞裸鼠成瘤的影响,探讨TCF21在非小细胞肺癌(NSCLC)发生、发展中的作用。方法:利用慢病毒感染在人肺癌A549细胞中过表达TCF21,并进行Western blotting验证。实验组、阴性对照组以及空... 目的:通过观察转录因子21(TCF21)基因对人肺癌A549细胞裸鼠成瘤的影响,探讨TCF21在非小细胞肺癌(NSCLC)发生、发展中的作用。方法:利用慢病毒感染在人肺癌A549细胞中过表达TCF21,并进行Western blotting验证。实验组、阴性对照组以及空白组细胞接种于BALB/c裸鼠左侧腋窝皮下,观察裸鼠成瘤情况,并绘制生长曲线。计算体积抑瘤率。结果:TCF21成功过表达,实验组较阴性对照组及空白组瘤体生长速度慢,肿瘤终体积分别为(620.08±263.07)vs.(1 406.77±351.14)vs.(620.08±263.07)mm3(P<0.05)。结论:TCF21基因过表达能有效抑制NSCLC裸鼠成瘤和移植瘤生长,表明TCF21在NSCLC发生、发展中起到重要作用,并有可能成为NSCLC靶向治疗的潜在新靶点。 展开更多

关键词 肺肿瘤 TCF21 A549细胞 裸鼠成瘤

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人肝癌组织中肝癌干细胞的分离培养与初步鉴定 被引量：5

8

作者 马俊明 雷鹏 王琦 《宁夏医科大学学报》 2015年第8期917-922,封3,共7页

目的体外分离及培养人肝癌组织中的肝癌干细胞并鉴定其生物学特性。方法取临床肝癌患者术后肝癌组织,用酶消化法分离肝癌细胞,将其接种于无血清培养基中培养,并在超低粘附24孔板中观察肝癌干细胞克隆球生长情况;用MTT比色法检测肝癌干... 目的体外分离及培养人肝癌组织中的肝癌干细胞并鉴定其生物学特性。方法取临床肝癌患者术后肝癌组织,用酶消化法分离肝癌细胞,将其接种于无血清培养基中培养,并在超低粘附24孔板中观察肝癌干细胞克隆球生长情况;用MTT比色法检测肝癌干细胞克隆球增殖能力;采用流式细胞仪鉴定并分选CD90+细胞、CD90-细胞,CD133+细胞、CD133-细胞,将4种不同细胞组成CD90+细胞CD133+细胞、CD90-细胞CD133+细胞、CD90+细胞CD133-细胞及CD90-细胞CD133-细胞,分别接种于裸鼠右侧腋窝皮下观察其成瘤能力并记录肿瘤体积;将裸鼠肿瘤组织HE染色观察。结果在无血清培养基中,肝癌干细胞可以形成少量的细胞克隆球;在72h内肝癌干细胞克隆球始终处于持续增殖状态;肝癌干细胞表面标记物CD90、CD133阳性率分别是7.2%、8.8%,并成功分选出CD90+细胞、CD90-细胞、CD133+细胞、CD133-细胞,将重组的4种不同细胞组分别接种于裸鼠皮下,结果显示,CD90+细胞CD133+细胞、CD90-细胞CD133+细胞及CD133+细胞CD90-细胞在裸鼠体内均形成肿瘤,CD90+细胞CD133+细胞接种1个月后开始有裸鼠成瘤,CD90-细胞CD133+细胞与CD133+细胞CD90-细胞接种至第2个月开始有裸鼠成瘤,而CD133-细胞CD90-细胞在整个过程中未见肿瘤形成。CD90+细胞CD133+细胞组肿瘤体积大于CD90-细胞CD133+细胞组与CD90+细胞CD133-细胞组(P<0.05);CD90-细胞CD133+细胞组与CD90+细胞CD133-细胞组比较差异无统计学意义(P>0.05)。裸鼠体内肿瘤HE染色观察与人肝癌组织病理特点相似。结论成功建立了从人肝癌组织中分离培养肝癌干细胞的方法;培养得到的肝癌干细胞能在无血清培养基中形成克隆球,且具有较强的增殖能力;其中表达CD90和/或CD133细胞,均在裸鼠体内形成肿瘤;肝癌组织中CD90+细胞和CD133+细胞具有肝癌干细胞特性,可能为肝癌干细胞。 展开更多

关键词 肝癌组织 肿瘤干细胞 CD133 CD90 裸鼠成瘤

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薯蓣皂苷元体内外抑制胃癌增殖的机制 被引量：4

9

作者 霍中华 胡君 +3 位作者 储著陵 吕胜 尹鹏 章丽 《江苏大学学报（医学版）》 CAS 2014年第5期394-398,共5页

目的:研究薯蓣皂苷元抑制胃癌增殖及转移的主要途径及其机制。方法:分别使用1,10,100μg/mL浓度薯蓣皂苷元处理人血管内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVEC)和胃癌BGC-823细胞,制作细胞生长曲线,观察薯蓣皂苷元对细... 目的:研究薯蓣皂苷元抑制胃癌增殖及转移的主要途径及其机制。方法:分别使用1,10,100μg/mL浓度薯蓣皂苷元处理人血管内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVEC)和胃癌BGC-823细胞,制作细胞生长曲线,观察薯蓣皂苷元对细胞增殖能力的影响;选取一定浓度的薯蓣皂苷元处理HUVEC和BGC-823细胞,体外成管实验和划线法分别检测药物处理对血管内皮细胞成管能力及肿瘤细胞迁移能力的影响。将BGC-823细胞接种到裸鼠制作皮下肿瘤模型,连续静脉注射薯蓣皂苷元,分析比较其对皮下肿瘤的抑制效果。结果:与对照组比较,薯蓣皂苷元可明显抑制内皮细胞增殖活性(P<0.05),且具有浓度依赖性;而相同处理方式对BGC-823细胞的增殖活性基本无影响;10μg/mL的薯蓣皂苷元对BGC-823细胞的迁移能力具有明显的抑制作用,能够明显抑制HUVEC细胞体外成管能力;与模型组比较,薯蓣皂苷元给药组肿瘤抑制率明显增高(达38.2%),差异有统计学意义(P<0.05)。结论:薯蓣皂苷元可以通过抑制内皮细胞增殖活性影响肿瘤血供,并最终抑制皮下肿瘤模型的增殖,同时,其可通过直接的作用抑制胃癌的迁移。 展开更多

关键词 薯蓣皂苷元 人血管内皮细胞 BGC-823细胞 增殖活性 体外成管 迁移 裸鼠成瘤

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shRNA沉默NRP-1基因抑制鼻咽癌CNE-2Z细胞生长的体内外研究 被引量：4

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作者 孙瑾 王亮 +3 位作者 娄卫华 曹华 田秀芬 桑建中 《中华耳鼻咽喉头颈外科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第4期312-317,共6页

目的 构建靶向神经纤毛蛋白质1（Neuropilin-1,NRP-1）的短发卡RNA （shRNA）表达载体,观察NRP-1对人鼻咽癌细胞系CNE-2Z细胞生长增殖的影响.通过体内裸鼠成瘤实验观察最优质粒对肿瘤的抑制效果.方法 根据NRP-1 mRNA序列设计并构建3个靶... 目的 构建靶向神经纤毛蛋白质1（Neuropilin-1,NRP-1）的短发卡RNA （shRNA）表达载体,观察NRP-1对人鼻咽癌细胞系CNE-2Z细胞生长增殖的影响.通过体内裸鼠成瘤实验观察最优质粒对肿瘤的抑制效果.方法 根据NRP-1 mRNA序列设计并构建3个靶向NPR-1基因,并含荧光素标记的shRNA真核表达载体（pSilencer-shRNA1、pSilencer-shRNA2和pSilencer-shRNA3）;以脂质体Lipofectamine 2000转染的方法将shRNA表达质粒转导入CNE-2Z细胞及裸鼠瘤体内,于激光共聚焦荧光显微镜观察shRNA转染表达情况;以四甲基偶氮唑盐（MTT）法检测细胞增殖活性;实时定量PCR（RT-PCR）检测NRP-1基因在mRNA水平表达的抑制作用;Western印迹法在蛋白水平上检测对目的基因的封闭效果.体内裸鼠成瘤实验观察质粒对肿瘤的抑制效果.结果 质粒成功转染CNE-2Z细胞及瘤体,可见大量的癌细胞表达绿色荧光.MTT实验证明NRP-1 shRNA抑制CNE-2Z细胞的生长增殖;RT-PCR结果表明NP-1的mRNA表达降低;Western印迹法结果验证目的基因蛋白同时表达下调;体内裸鼠成瘤实验证实转染6周后,转染组瘤体积生长较阴性对照组、空白对照组明显受到抑制[（0.599 ±0.002）比（1.141 ±0.013）、（1.165 ±0.308）cm^3,均P＜0.05],抑瘤率为48.6％.结论 表达shRNA的NRP-1基因特异的真核表达质粒能有效转染体内、外鼻咽癌细胞,沉默NRP-1基因能有效抑制鼻咽癌细胞生长增殖.为鼻咽癌基因治疗奠定了良好的实验基础。 展开更多

关键词 神经纤毛蛋白质1 鼻咽肿瘤 基因治疗 裸鼠成瘤 NEUROPILIN-1

原文传递

甘草查尔酮A通过Akt/ERK信号通路抑制骨肉瘤增殖

11

作者 范晓丽 王梨明 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第4期653-658,共6页

目的 探究甘草查尔酮A(licochalcone A,LCA)对骨肉瘤细胞增殖和凋亡的影响及相关分子机制。方法 体外培养骨肉瘤HOS和U2OS细胞,通过MTT实验检测不同浓度LCA处理不同时间对HOS和U2OS细胞增殖的影响;加入终浓度分别为对照组(含0.1%DMSO的... 目的 探究甘草查尔酮A(licochalcone A,LCA)对骨肉瘤细胞增殖和凋亡的影响及相关分子机制。方法 体外培养骨肉瘤HOS和U2OS细胞,通过MTT实验检测不同浓度LCA处理不同时间对HOS和U2OS细胞增殖的影响;加入终浓度分别为对照组(含0.1%DMSO的培养液)、5、10及20μmol·L^(-1)的LCA处理细胞48 h,流式细胞术检测LCA对HOS和U2OS细胞凋亡的影响,通过Western blot检测LCA对细胞凋亡相关蛋白cleaved PARP1、Bcl-2、Bax以及Akt和ERK蛋白表达水平的影响;通过裸鼠荷瘤实验从体内水平探究LCA的抗肿瘤作用。结果 MTT实验结果表明,LCA可抑制骨肉瘤HOS和U2OS细胞的增殖,并且呈时间和剂量依赖性;流式细胞术的结果表明,LCA可引起细胞凋亡。Western blot结果显示,ERK和Akt的磷酸化被抑制,cleaved PARP1和Bax的表达量升高,Bcl-2的表达量降低。裸鼠荷瘤实验表明,注射LCA后肿瘤体积明显减小(P<0.05),肿瘤的质量明显减小(P<0.01)。结论 LCA可以抑制骨肉瘤细胞的增殖并诱导凋亡,其作用机制可能与抑制Akt/ERK信号通路有关。 展开更多

关键词 甘草查尔酮A 骨肉瘤 细胞增殖 细胞凋亡 Akt/ERK信号通路 裸鼠成瘤

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长链非编码RNA FENDRR在子宫颈癌中的作用 被引量：3

12

作者 兰霄霄 周志阳 +1 位作者 徐欣欣 吴雪清 《温州医科大学学报》 CAS 2018年第4期262-266,共5页

目的:探讨长链非编码RNA FENDRR在子宫颈癌(下面简称宫颈癌)中的作用。方法:在宫颈癌细胞系中使用si RNA干扰技术特异性干扰FENDRR的表达,用q RT-PCR检测si RNA的干扰效率;运用CCK-8和Transwell实验分别检测干扰FENDRR表达对宫颈癌细胞... 目的:探讨长链非编码RNA FENDRR在子宫颈癌(下面简称宫颈癌)中的作用。方法:在宫颈癌细胞系中使用si RNA干扰技术特异性干扰FENDRR的表达,用q RT-PCR检测si RNA的干扰效率;运用CCK-8和Transwell实验分别检测干扰FENDRR表达对宫颈癌细胞体外增殖和运动能力的影响;运用裸鼠成瘤实验验证干扰FENDRR表达对宫颈癌细胞体内成瘤能力的影响。结果:si RNA转染使FENDRR在Si Ha和He La细胞中的相对表达量分别由(1.013±0.120)、(1.001±0.025)降为(0.226±0.024)、(0.099±0.010),差异均有统计学意义(P<0.01);干扰FENDRR后宫颈癌细胞系的增殖能力明显增强(P<0.01),迁移和侵袭能力也显著增强(P<0.01);干扰FENDRR后宫颈癌细胞He La在裸鼠体内的成瘤能力明显增强,与对照组相比肿瘤体积从(853.2±59.4)mm^3增加到(1 155.0±51.5)mm^3(P<0.01),肿瘤的质量从(0.544±0.053)g增加到(0.814±0.061)g(P<0.05)。结论:干扰FENDRR的表达明显增强宫颈癌细胞的体外增殖和运动能力以及体内成瘤能力,FENDRR可能在宫颈癌的进展中发挥重要的抑癌作用。 展开更多

关键词 长链非编码RNA FENDRR基因 宫颈肿瘤 RNA 小分子干扰 细胞增殖 细胞运动 裸鼠成瘤

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siRNA沉默FAM83A基因表达对非小细胞肺癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响 被引量：3

13

作者 李景攀 王永生 +1 位作者 李启源 田青 《现代肿瘤医学》 CAS 2020年第9期1437-1440,共4页

目的:研究FAM83A基因对非小细胞肺癌细胞增殖、迁移、侵袭及肿瘤生长的影响。方法:运用qRT-PCR法检测非小细胞肺癌细胞H1299中FAM83A的表达;将blank组(未作任何处理)、si-control组(转染si-control)、si-FAM83A组(转染si-FAM83A)用脂质... 目的:研究FAM83A基因对非小细胞肺癌细胞增殖、迁移、侵袭及肿瘤生长的影响。方法:运用qRT-PCR法检测非小细胞肺癌细胞H1299中FAM83A的表达;将blank组(未作任何处理)、si-control组(转染si-control)、si-FAM83A组(转染si-FAM83A)用脂质体法转染至H1299细胞;Western blot检测细胞中FAM83A、p16、p21、MMP-2、MMP-9的蛋白表达;MTT法检测细胞的增殖;Transwell小室检测细胞的迁移和侵袭;裸鼠成瘤实验检测肿瘤的生长。结果:沉默FAM83A后,H1299细胞的增殖、迁移和侵袭能力均得到显著下调,并且p16、p21的蛋白表达明显上调,MMP-2、MMP-9的蛋白表达明显下调。最重要的是,沉默FAM83A后的异种移植裸鼠体内的肿瘤生长能力得到明显抑制。结论:沉默FAM83A可抑制非小细胞肺癌细胞的增殖、迁移和侵袭,并抑制裸鼠体内肿瘤的生长。 展开更多

关键词 FAM83A 非小细胞肺癌 增殖 迁移 侵袭 裸鼠成瘤

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胃泌素对人胃癌细胞裸鼠移植瘤生长与转移潜能影响研究 被引量：2

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作者 曾怡 姜琼 +2 位作者 周建奖 谢渊 赵艳 《中华肿瘤防治杂志》 CAS 北大核心 2015年第19期1505-1511,共7页

目的探讨胃泌素在胃癌细胞生长、侵袭和转移中的作用。方法构建过表达胃泌素的细胞模型,用裸鼠成瘤实验检测体内肿瘤形成;细胞伤愈和Transwell小室实验检测体外细胞侵袭和转移;蛋白质印迹法、实时荧光定量PCR和酶联免疫吸附实验(enzyme-... 目的探讨胃泌素在胃癌细胞生长、侵袭和转移中的作用。方法构建过表达胃泌素的细胞模型,用裸鼠成瘤实验检测体内肿瘤形成;细胞伤愈和Transwell小室实验检测体外细胞侵袭和转移;蛋白质印迹法、实时荧光定量PCR和酶联免疫吸附实验(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)检测基质金属蛋白酶-2(matrix metalloproteinases,MMP-2)和血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)的表达及分泌。结果过表达胃泌素的胃癌细胞,裸鼠体内成瘤率为100%(6/6),高于对照细胞50%(3/6)。接种后25d,移植瘤的体积和体质量分别为(0.980 9±0.626 0)cm3和(0.445 6±0.280 1)g,均高于对照细胞的(0.222 1±0.352 6)cm3和(0.128 0±0.201 4)g,P值分别为0.018和0.048。Transwell小室实验结果显示,过表达胃泌素和对照的SGC-7901细胞的迁移细胞数为(24±4)和(10±5)个/400倍视野,q=4.24,P<0.05;AGS细胞为(86±5)和(24±4)个/400倍视野,q=4.93,P<0.05。SGC-7901细胞的侵袭细胞数为(58±5)和(16±5)个/400倍视野,q=4.65,P<0.05;AGS细胞为(112±5)和(68±3)个/400倍视野,q=5.24,P<0.05。蛋白质印迹法、实时荧光定量PCR和ELISA结果显示,与对照细胞比较,过表达胃泌素的SGC-7901细胞中MMP-2和VEGF蛋白相对表达量分别增加166%和190%,AGS细胞中分别增加50%和68%;SGC-7901细胞中MMP-2和VEGF mRNA的相对表达量分别上调20.82倍和98.61倍,AGS细胞中分别上调32.58倍和26.71倍;培养液中MMP-2和VEGF的含量也增加,差异均有统计学意义,P值均<0.05。加入丙谷胺后,胃泌素的促进作用被抑制。结论胃泌素能促进胃癌细胞体内外肿瘤生长、侵袭和转移,有可能成为阻断胃癌侵袭转移的新靶点。 展开更多

关键词 胃肿瘤 胃泌素 裸鼠成瘤 肿瘤转移 肿瘤浸润 印迹法 蛋白质

原文传递

miR-24-3p靶向MMP-16对鼻咽癌5-8F细胞侵袭、迁移和裸鼠成瘤的影响 被引量：2

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作者 徐杰 徐鹏 +3 位作者 李梦娇 任建兰 刘俊玲 郎锦义 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2020年第13期1589-1593,共5页

目的:探究miR-24-3p靶向MMP-16对鼻咽癌(NPC)5-8F细胞侵袭、迁移和裸鼠成瘤的影响。方法:体外培养鼻咽癌5-8F细胞,并分为空白组(Control)、阴性对照组(mimic-nc)和目的基因组(miR-24-3p mimic);RT-PCR检测NPC患者肿瘤样本和miR-24 mimi... 目的:探究miR-24-3p靶向MMP-16对鼻咽癌(NPC)5-8F细胞侵袭、迁移和裸鼠成瘤的影响。方法:体外培养鼻咽癌5-8F细胞,并分为空白组(Control)、阴性对照组(mimic-nc)和目的基因组(miR-24-3p mimic);RT-PCR检测NPC患者肿瘤样本和miR-24 mimic转染5-8F细胞后miR-24-3p表达情况;Transwell检测细胞侵袭情况,划痕检测细胞迁移情况。生物信息学预测miR-24与MMP-16的靶向关系并荧光素实验验证;Western blot检测miR-24 mimic转染5-8F后,MMP-16的表达情况。裸鼠右前肢皮下注射转染miR-24 mimic的5-8F细胞,RT-PCR检测miR-24表达;30 d后取出肿瘤组织检测重量;免疫组化检测MMP-16含量。结果:与NPC患者肿瘤样本相比,癌旁组织miR-24-3p表达较高(P<0.05);miR-24-3p mimic组5-8F细胞侵袭能力显著降低(P<0.05);miR-24-3p mimic组5-8F细胞迁移能力显著降低(P<0.05);荧光素酶报告实验表明miR-24-3p序列上存在MMP-16结合位点;miR-24-3p mimic组MMP-16表达显著降低(P<0.05);miR-24-3p过表达可显著降低裸鼠体内肿瘤质量、MMP-16表达及MMP-16阳性率(P<0.05)。结论:miR-24-3p可靶向作用于MMP-16抑制NPC 5-8F细胞增殖、侵袭和迁移。 展开更多

关键词 鼻咽癌 miR-24-3p 基质金属蛋白酶-16 裸鼠成瘤

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miR-338-3p靶向调控RNF121促进人肺癌A549的增殖及侵袭能力 被引量：2

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作者 谢景臣 谢协驹 +1 位作者 李川 赵展庆 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第7期908-916,共9页

近期研究表明,miR-338-3p对肺癌的增殖和侵袭具有重要作用,但其通过靶向调控环指蛋白121(ring finger protein 121, RNF121)在肺癌增殖和侵袭中的研究尚不清楚。为探究其机制,体外培养正常肺细胞系MRC-5和非小细胞肺癌系A549,采用qRT-PC... 近期研究表明,miR-338-3p对肺癌的增殖和侵袭具有重要作用,但其通过靶向调控环指蛋白121(ring finger protein 121, RNF121)在肺癌增殖和侵袭中的研究尚不清楚。为探究其机制,体外培养正常肺细胞系MRC-5和非小细胞肺癌系A549,采用qRT-PCR和Western印迹检测发现,A549肺癌细胞较MRC-5细胞中miR-338-3p表达下降,而RNF121表达增加(P<0.05)。通过TargetScan(http://www. targetscan. org/mamm31/)靶基因预测软件预测与RNF121的3′UTR结合的miR-338-3p。双荧光素酶报告证实了两者互补结合。构建靶向干扰RNF121的shRNA载体并转染细胞。CCK8检测各组细胞增殖情况;Annexin V-FITC/PI双染检测细胞凋亡;Transwell实验和细胞集落形成检测各组细胞侵袭和克隆增殖能力;将各组细胞接种于裸鼠皮下,绘制肿瘤生长曲线并测定瘤体大小;之后获取肿瘤组织通过TUNEL染色检测组织中细胞凋亡情况。结果显示:与Blank组比较,miR-338-3p mimic和sh-RNF121组中细胞增殖、侵袭以及细胞克隆形成能力被抑制但凋亡显著增加。体内实验显示,上述组成瘤能力降低,肿瘤组织中凋亡增强(P<0.05)。而miR-338-3p抑制组中细胞增殖活力、侵袭以及细胞克隆形成能力增强,且凋亡被显著抑制,同时裸鼠成瘤能力提高,肿瘤组织中凋亡减弱(P<0.05)。NC组、miR-338-3p inhibitor+sh-RNF121组部分指标与Blank组比较未见显著性差异(P>0.05)。综上所述,miR-338-3p能够靶向抑制RNF121的表达进而抑制A549细胞的增殖和侵袭,抑制裸鼠皮下移植瘤的生长,RNF121有望成为非小细胞肺癌治疗的新靶点。 展开更多

关键词 非小细胞肺癌 环指蛋白121 正常肺细胞系A549 裸鼠成瘤

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松油烯4醇体内外对人肺癌细胞系A-549增殖抑制作用 被引量：2

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作者 潘乾广 石瑶 +4 位作者 叶秀峰 胡仕林 晏家瑛 周也涵 万丹 《局解手术学杂志》 2014年第5期481-485,共5页

目的探讨松油烯4醇体内外对人肺癌细胞系A-549增殖抑制作用及其可能机制。方法不同浓度松油烯4醇作用于A-549细胞24 h后,应用MTT法检测抑制率及IC50;CCK-8比色分析法绘制不同浓度下的生长曲线;透射电镜观察药物作用后细胞超微结构的变化... 目的探讨松油烯4醇体内外对人肺癌细胞系A-549增殖抑制作用及其可能机制。方法不同浓度松油烯4醇作用于A-549细胞24 h后,应用MTT法检测抑制率及IC50;CCK-8比色分析法绘制不同浓度下的生长曲线;透射电镜观察药物作用后细胞超微结构的变化;流式细胞仪检测细胞周期、凋亡、细胞内Ca2+浓度变化;将A-549细胞移植瘤裸鼠分为对照组、低剂量组、高剂量组药物连续腹腔注射10 d后分别测量各组移植瘤体积和重量,观察药物的体内抗肿瘤作用。结果 A-549细胞24 h的IC50为0.067%v/v;CCK-8实验结果表明给药组生长曲线明显较对照组平缓,并与给药剂量呈显著相关性;电镜观察可见经松油烯4醇处理的A549细胞内自噬泡数量明显增加。FCM检测周期显示S期阻滞;检测显示细胞凋亡率明显增加,凋亡率呈现浓度-效应关系;各药物干预组A-549细胞内Ca2+荧光强度均明显高于对照组(P<0.05)。体内实验显示各实验组经松油烯4醇治疗后移植瘤生长缓慢,治疗结束时治疗组移植瘤质量及瘤体积明显低于对照组(P<0.05),高、低剂量组的瘤质量抑制率分别为77.6%和53.3%。结论松油烯4醇在体外能抑制A-549细胞的增殖。 展开更多

关键词 松油烯4醇 A-549 裸鼠成瘤 CA2+ 凋亡 自噬

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人胃癌细胞系SGC-7901干细胞样细胞的富集与鉴定 被引量：1

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作者 林静瑜 黄可儿 +1 位作者 秦书敏 来慧丽 《广州中医药大学学报》 CAS 2019年第2期263-268,共6页

【目的】富集/分离人胃癌细胞系SGC-7901干细胞样细胞,并评价其干细胞生物学特性。【方法】分别采用成球条件培养法和流式侧群(SP)细胞分选法分离SGC-7901干细胞样细胞,通过克隆形成实验、体内成瘤实验、化疗耐药实验鉴定SGC-7901细胞球... 【目的】富集/分离人胃癌细胞系SGC-7901干细胞样细胞,并评价其干细胞生物学特性。【方法】分别采用成球条件培养法和流式侧群(SP)细胞分选法分离SGC-7901干细胞样细胞,通过克隆形成实验、体内成瘤实验、化疗耐药实验鉴定SGC-7901细胞球、SP细胞的干细胞特性。【结果】(1)成球条件培养法:在含有表皮生长因子(EGF)、碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)、B27、N-2的无血清条件培养基及超低吸附培养板的培养条件下,SGC-7901细胞能够成球悬浮生长,且可连续传代;克隆形成实验结果显示:SGC-7901细胞球克隆数高于SGC-7901细胞;体内成瘤实验显示:裸鼠移植相同数量级的SGC-7901细胞球和SGC-7901细胞,SGC-7901细胞球成瘤率高于SGC-7901细胞;化疗耐药实验结果显示:在相同浓度下,3种化疗药(5-氟尿嘧啶、盐酸多柔比星、顺铂)对SGC-7901细胞球的平均抑制率均低于SGC-7901细胞。(2)侧群分选法:Hoechst33342浓度为2.5μg/mL,SGC-7901细胞SP细胞分选率为4.74%,维拉帕米对照组SP细胞分选率为0.19%,差异显著(P <0.01);克隆形成实验与体内成瘤实验显示:SP与非侧群(non-SP)细胞克隆形成能力与致瘤性无显著性差异(P>0.05)。【结论】在超低吸附培养板和无血清条件培养基培养的SGC-7901细胞球具有肿瘤干细胞特性;SGC-7901细胞存在着SP亚群,但其肿瘤干细胞特性不明显。 展开更多

关键词 SGC-7901 胃癌干细胞 成球培养 侧群分选 克隆形成 化疗耐药 裸鼠成瘤

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APE-1对肝癌细胞裸鼠成瘤能力及PKM2表达的影响及机制探索 被引量：1

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作者 孙志鹏 许光中 +3 位作者 阿民布和 樊庆 彭吉润 张能维 《安徽医科大学学报》 CAS 北大核心 2020年第12期1872-1876,共5页

目的探索脱嘌呤脱嘧啶核酸内切酶-1(APE-1)对肝癌细胞裸鼠成瘤能力及丙酮酸激酶M2(PKM2)表达的影响及机制。方法基于沉默APE-1表达的肝癌Hep3B稳定细胞株,进行BALB/c-Nude裸鼠皮下成瘤。APE-1沉默组接种APE-1沉默表达的细胞,对照组接种... 目的探索脱嘌呤脱嘧啶核酸内切酶-1(APE-1)对肝癌细胞裸鼠成瘤能力及丙酮酸激酶M2(PKM2)表达的影响及机制。方法基于沉默APE-1表达的肝癌Hep3B稳定细胞株,进行BALB/c-Nude裸鼠皮下成瘤。APE-1沉默组接种APE-1沉默表达的细胞,对照组接种转染空白质粒的细胞,每组10只裸鼠。8周后处死裸鼠,计算成瘤率,完整剥离肿瘤组织,称瘤体重量并计算肿瘤体积。免疫组化及Westernblot法检测肿瘤组织中APE-1及细胞增殖标志性蛋白增殖细胞核抗原(PCNA)、核KI-67抗原(Ki-67)表达。同样方法检测PKM2蛋白表达后,基于TCGA数据库中374例肝癌患者数据,分析APE-1与PKM2表达相关性,并比较PKM2不同表达肝癌患者中生存曲线差异。结果2组裸鼠成瘤率均为100%,APE-1沉默组的肿瘤重量及体积均小于对照组(P<0.05)。APE-1沉默组肿瘤组织中APE-1、PC-NA、Ki-67和PKM2蛋白表达均低于对照组(P<0.05)。APE-1和PKM2表达线性正相关(P<0.001),且PKM2在肝癌患者中高表达组和低表达组整体生存曲线分布比较差异有统计学意义(P<0.001),低表达组生存期更长。结论APE-1可能通过影响PKM2抑制肝癌细胞裸鼠成瘤能力,具有较强的抗肿瘤潜能。 展开更多

关键词 APE-1 肝癌 裸鼠成瘤 PKM2表达

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B超弹性成像监测下应用吉西他滨耐药乳腺癌细胞4T1构建裸鼠乳腺癌肝转移模型 被引量：1

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作者 叶志东 黄迪 +4 位作者 黄宇 张强 麦振豪 赵俐 古维立 《广州医药》 2016年第1期49-53,共5页

目的构建吉西他滨耐药乳腺癌细胞4T1耐药株并建立裸鼠乳腺癌肝转移模型。方法采用低浓度加量持续诱导法,诱导吉西他滨耐药乳腺癌细胞4T1耐药株,命名为4T1/Gem;CCK-8法测定4T1与4T1/Gem细胞的增殖抑制率,计算耐药指数;Western blot法检... 目的构建吉西他滨耐药乳腺癌细胞4T1耐药株并建立裸鼠乳腺癌肝转移模型。方法采用低浓度加量持续诱导法,诱导吉西他滨耐药乳腺癌细胞4T1耐药株,命名为4T1/Gem;CCK-8法测定4T1与4T1/Gem细胞的增殖抑制率,计算耐药指数;Western blot法检测细胞P-gp蛋白表达;B超引导下注射4T1/Gem细胞悬液诱导裸鼠肝脏成瘤;HE染色观察肿瘤组织病理情况,免疫组化法检测瘤组织ER、PR、HER2、Ki-67和P-gp蛋白的表达。结果经过14个月的诱导成功建立4T1/Gem细胞株,可在含40μg/m L的Gem培养液中稳定生长。4T1/Gem细胞耐药指数为4T1细胞的788.547倍。与亲代相比,4T1/Gem处于G1期和G2期的细胞增加,S期细胞减少;上调P-gp蛋白的表达。4T1/Gem细胞成功建立裸鼠乳腺癌肝转移模型,瘤组织中ER、PR、HER2蛋白阴性表达,Ki-67阳性10%和P-gp蛋白阳性表达。结论成功构建吉西他滨耐药乳腺癌细胞4T1耐药株并建立裸鼠乳腺癌肝转移模型,为开发治疗乳腺癌肝转移化疗耐药的药物提供实验基础。 展开更多

关键词 乳腺癌 吉西他滨 耐药 P—gp蛋白 裸鼠成瘤

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