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昆虫气味受体的研究方法与进展 被引量：13
1
作者 白鹏华 王冰 +1 位作者 张仙红 王桂荣 《昆虫学报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第3期364-385,共22页
昆虫气味受体(odorant receptors,ORs)在外周嗅觉系统识别气味信号过程中起着关键作用,参与昆虫取食、交配和产卵等重要生命活动过程。随着测序技术飞速发展以及生物信息学研究的深入,昆虫气味受体基因实现了大规模鉴定。本文详述了昆... 昆虫气味受体(odorant receptors,ORs)在外周嗅觉系统识别气味信号过程中起着关键作用,参与昆虫取食、交配和产卵等重要生命活动过程。随着测序技术飞速发展以及生物信息学研究的深入,昆虫气味受体基因实现了大规模鉴定。本文详述了昆虫气味受体基因的研究方法及其原理和优缺点,归纳总结了自2015年以来已发表文章中采用不同分析方法进行ORs鉴定和功能研究的数量和比例,列举了重要害虫气味受体的研究进展。2015-2019年利用基因组和转录组测序技术分别鉴定了2543和5111个OR基因。基因表达和蛋白定位研究有助于分析OR基因在不同组织以及不同发育阶段的表达特异性,荧光原位杂交和免疫组织化学方法常用于分析细胞和组织定位;半定量反转录PCR(semi-quantitative reverse transcription PCR,RT-PCR)技术和实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR,qRT-PCR)技术常用于研究OR基因的时空表达模式。利用冷冻电镜技术解析昆虫OR蛋白的超微晶体结构,以明确OR关键氨基酸残基与配体化合物互作规律。ORs功能研究手段不断丰富,体外异源表达系统在2015-2019年间的占比为75.76%,以爪蟾卵母细胞Xenopus oocytes系统结合双电极电压钳技术(two-electrode voltage clamp,TEVC)为主(占比43.94%),辅以转基因果蝇异源表达系统结合单感器记录技术以及细胞系异源表达ORs结合钙离子成像技术;体内功能研究方法包括RNA干扰(RNAi)技术和CRISPR/Cas9基因编辑技术,后者在ORs功能研究中取得了突破性进展并具有广泛的应用前景。最后本文对今后的研究方向提出了以下建议:(1)开展更多重大害虫及天敌昆虫嗅觉识别机制研究;(2)阐明昆虫性信息素和寄主植物挥发物协同作用的内在机理;(3)解析气味受体蛋白超微晶体结构并揭示ORs与气味分子特异性识别机制;(4)基于RNAi技术开发新型昆虫行为调节剂。 展开更多
关键词 气味受体 基因鉴定 表达定位 双电极电压钳 单感器记录 RNA干扰 基因编辑技术
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人巨细胞病毒基因时序表达对感染结局的影响 被引量：12
2
作者 赵杨 陈敦金 闻良珍 《中华微生物学和免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第10期834-838,共5页
目的　探讨人巨细胞病毒 (HCMV)主要基因序列表达情况对其感染结局的影响。方法采用不同滴度HCMV感染传代培养的人胚肺成纤维细胞 ,建立HCMV梯度感染细胞模型。分别应用FQ PCR法测定感染细胞内IE基因拷贝数、免疫组化法联合计算机病理... 目的　探讨人巨细胞病毒 (HCMV)主要基因序列表达情况对其感染结局的影响。方法采用不同滴度HCMV感染传代培养的人胚肺成纤维细胞 ,建立HCMV梯度感染细胞模型。分别应用FQ PCR法测定感染细胞内IE基因拷贝数、免疫组化法联合计算机病理图文分析系统检测p5 2蛋白表达水平以及RT PCR法测定MCPmRNA转录水平 ,光镜观察致细胞病变作用 (CPE)、电镜检查细胞超微结构改变。结果　IE基因在病毒滴度最低的A组细胞内负荷量最低 (P <0 .0 5 ,P <0 .0 1) ;p5 2蛋白在病毒滴度较高的B、C组表达水平明显高于A组 (P <0 .0 1) ,其表达定位于受染细胞核内 ;仅在B、C组内检测到MCPmRNA。A组未检出细胞病变 ,B、C组细胞检测到随感染时间延长而加重的CPE及超微结构改变。结论　HCMV受染细胞内IE基因负荷量与病毒基因组表达启动密切相关 ,p5 2蛋白高效表达是病毒基因组完整表达的必要条件 ,MCPmRNA转录是活动性HCMV感染的标志。 展开更多
关键词 人巨细胞病毒 HCMV感染 高效表达 感染细胞 结局 细胞内 改变 基因 MRNA转录 表达定位
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外源蛋白在大肠杆菌中的表达定位策略 被引量：4
3
作者 钟向阳 石歆莹 周宏灏 《生物工程进展》 CSCD 2001年第6期50-53,共4页
外源基因在大肠杆菌中表达是对基因重组技术的成功应用。外源基因在不同的大肠杆菌表达系统中表达产物可能定位于大肠杆菌空间结构的不同位置 :胞质 ,胞质膜 ,胞周质 ,胞外膜和胞外培养基 。
关键词 大肠杆菌 外源蛋白 表达定位
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α-黑素细胞刺激素在自体中厚移植皮片中的表达 被引量：9
4
作者 薛春雨 邢新 +2 位作者 李蠡 张敬德 郑健生 《中华整形外科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第6期464-467,共4页
目的检测α黑素细胞刺激素(αmelanocytestimulatinghormone,αMSH)在人体自体中厚移植皮片中的表达,并与自身正常皮肤作对照,初步认识αMSH在自体移植皮片过度色素沉着中的作用。方法利用免疫组织化学方法,检测人体自体中厚移植皮片与... 目的检测α黑素细胞刺激素(αmelanocytestimulatinghormone,αMSH)在人体自体中厚移植皮片中的表达,并与自身正常皮肤作对照,初步认识αMSH在自体移植皮片过度色素沉着中的作用。方法利用免疫组织化学方法,检测人体自体中厚移植皮片与原供区及受区周围自体正常对照皮肤中αMSH的蛋白表达,并行统计学分析。结果αMSH的表达定位于表皮基底部黑素细胞、角朊细胞胞浆,在大部分自体中厚移植皮片中呈强阳性表达,表达率为611%,与自体正常对照皮肤中的表达差异有非常显著性意义(P<001);αMSH在受区与原供区周围正常对照皮肤中的表达差异无显著性意义。结论αMSH在自体中厚移植皮片中的表达较在自体正常对照皮肤中显著增高,在自体移植皮片过度色素沉着中起重要调控作用。 展开更多
关键词 皮片 植皮 自体 正常 移植 对照 表达差异 Α-MSH 表达定位 表达率
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β-catenin不同表达定位与胃癌临床病理特征的关系 被引量：9
5
作者 程玉 刘小超 +1 位作者 薛晶 郝美玲 《临床与实验病理学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第2期143-146,共4页
目的探讨β-catenin不同表达定位在胃癌组织中的意义及与胃癌临床病理特征的关系。方法应用免疫组化SP法检测120例胃癌组织及50例正常胃黏膜中β-catenin的表达情况。结果β-catenin在正常胃黏膜中的表达定位于细胞膜,阳性率为100. 00%... 目的探讨β-catenin不同表达定位在胃癌组织中的意义及与胃癌临床病理特征的关系。方法应用免疫组化SP法检测120例胃癌组织及50例正常胃黏膜中β-catenin的表达情况。结果β-catenin在正常胃黏膜中的表达定位于细胞膜,阳性率为100. 00%。但其在胃癌组织中细胞膜表达缺失,出现细胞质、细胞核或质/核异位表达,异位表达率高达81. 67%(98/120),其异位表达与胃癌分化程度、淋巴结转移及TNM分期有关(P <0. 05)。120例胃癌组织中,β-catenin细胞核异位表达率为36. 67%(44/120),并且其细胞核表达与胃癌TNM分期有关(P <0. 05),β-catenin细胞核阳性患者5年总体生存率明显低于细胞核阴性者(P <0. 05)。结论在胃癌的发生过程中β-catenin起重要作用,其不同表达定位与胃癌的进展有关,β-catenin有望成为胃癌诊断及治疗的潜在靶点。 展开更多
关键词 胃肿瘤 Β-CATENIN 表达定位 免疫组织化学
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肺神经内分泌癌c-kit蛋白表达的临床病理意义 被引量：7
6
作者 赵坡 侯宁 +1 位作者 邵云 李向红 《中华医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第22期1526-1529,共4页
目的探讨ckit癌基因蛋白在肺神经内分泌癌中的表达及其临床病理意义。方法采用免疫组化SP法检测90例肺神经内分泌癌患者癌组织中ckit蛋白表达并分析其与各临床病理指标及预后的关系。结果ckit蛋白表达定位于癌细胞胞膜及胞质;ckit表达... 目的探讨ckit癌基因蛋白在肺神经内分泌癌中的表达及其临床病理意义。方法采用免疫组化SP法检测90例肺神经内分泌癌患者癌组织中ckit蛋白表达并分析其与各临床病理指标及预后的关系。结果ckit蛋白表达定位于癌细胞胞膜及胞质;ckit表达阳性率分别为类癌21.4%(3/14),不典型类癌90.0%(18/20),大细胞神经内分泌癌38.7%(12/31),小细胞癌76.0%(19/25),差异有统计学意义(P=0.000)。ckit表达癌在Ⅰ期为26.3%(5/19),Ⅱ期62.5%(15/24),Ⅲ期67.4%(29/43),Ⅳ期75.0%(3/4),差异有统计学意义(P=0.014)。ckit在患者性别中的分布为男性64.8%(46/71),女性31.6%(6/19),差异有统计学意义(P=0.017)。ckit表达癌在肿瘤直径大小的分布为<5cm者43.1%(22/51),≥5cm者76.9%(30/39),差异有统计学意义(P=0.002)。ckit表达在淋巴结转移患者为66.1%(47/71),无转移者26.3%(5/19),差异有统计学意义(P=0.003)。ckit阴性表达癌患者的中位生存时间为97个月,ckit阳性癌的患者中位生存时间为16个月,二者比较差异有统计学意义(LogRank=22.85,P=0.000)。ckit蛋白表达与患者肿瘤部位(P=1.000)、年龄(P=0.394)无关。结论ckit蛋白在肺神经内分泌癌的发生、演进过程中起着重要作用,并可作为分子指标监测患者预后。 展开更多
关键词 肺神经内分泌癌 临床病理意义 蛋白表达 大细胞神经内分泌癌 免疫组化SP法 临床病理指标 生存时间 统计学 癌基因蛋白 不典型类癌 淋巴结转移 C-KIT 表达定位 小细胞癌 肿瘤直径 阴性表达 肿瘤部位 指标监测 癌患者 表达及
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AQP在人胃肠道不同部位表达与功能的研究进展 被引量：7
7
作者 丛靓 刘冠男 +1 位作者 刘艳春 李东复 《医学综述》 2017年第12期2293-2297,共5页
胃肠道水通道蛋白(AQP)是一类特异性转运水分子的蛋白质家族,通过其特殊性的漏斗形三级蛋白结构,可以帮助水分子快速的通过胃肠道细胞膜,从而参与胃肠道水分的分泌、吸收及细胞内外水平衡的调节。研究AQP的异常表达对研究胃肠道水分泌... 胃肠道水通道蛋白(AQP)是一类特异性转运水分子的蛋白质家族,通过其特殊性的漏斗形三级蛋白结构,可以帮助水分子快速的通过胃肠道细胞膜,从而参与胃肠道水分的分泌、吸收及细胞内外水平衡的调节。研究AQP的异常表达对研究胃肠道水分泌吸收异常相关疾病有重大的意义。AQP在胃、小肠、大肠中的种类及表达量不同,研究AQP时所用的分子生物学方法也不同。因此,探索消化道不同部位AQP的生理、病理特点,可以为消化道水分泌相关疾病开辟新途径。 展开更多
关键词 水通道蛋白 表达定位 胃肠道细胞膜
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重组N-乙酰鸟氨酸脱乙酰基酶的表达、纯化和复性研究 被引量：7
8
作者 李环 陈悦 +3 位作者 翁秋萍 吴明刚 韦萍 欧阳平凯 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第3期487-492,共6页
报道重组N-乙酰鸟氨酸脱乙酰基酶(NAOase)的研究进展。重组NAOase由大肠杆菌argE基因编码,在重组菌BL21(DE3)-pET22b-argE中的表达量为32.5%,大多以无活性的包涵体存在。低温诱导可增大有活性的可溶表达部分的比例。可溶性NAOase经Ni-NT... 报道重组N-乙酰鸟氨酸脱乙酰基酶(NAOase)的研究进展。重组NAOase由大肠杆菌argE基因编码,在重组菌BL21(DE3)-pET22b-argE中的表达量为32.5%,大多以无活性的包涵体存在。低温诱导可增大有活性的可溶表达部分的比例。可溶性NAOase经Ni-NTA凝胶亲和纯化后得到SDS-PAGE电泳纯的酶,比酶活为1193.2u/mg蛋白。诱导条件影响整菌蛋白的成分及比例。37℃诱导生成的包涵体经尿素梯度洗涤后纯度较22℃高。低的蛋白浓度和合适的氧化还原体系是影响复性的关键因素。稀释法和透析法皆可使包涵体部分复性。在合适的条件下以稀释法复性时,约有17.78%包涵体可顺利复活。包涵体经尿素洗涤、溶解、Ni-NTA凝胶柱亲和纯化后,获得了高纯度的NAOase。 展开更多
关键词 重组N-乙酰鸟氨酸脱乙酰基酶 表达定位 亲和纯化 包涵体 复性
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绿色荧光蛋白表达质粒的构建及鉴定 被引量：4
9
作者 杨健 任碧轩 唐恩洁 《川北医学院学报》 CAS 2005年第2期123-125,共3页
目的构建能表达绿色荧光蛋白的载体———pCDNA3.1-GFP。方法使用基因重组方法从质粒pGreenlantern中获取绿色荧光蛋白基因片段,克隆入PCDNA3.1的多克隆区,构建成PCDNA3.1-GFP,通过限制性核酸内切酶NotI与BamHI对所建质粒进行分析后,转... 目的构建能表达绿色荧光蛋白的载体———pCDNA3.1-GFP。方法使用基因重组方法从质粒pGreenlantern中获取绿色荧光蛋白基因片段,克隆入PCDNA3.1的多克隆区,构建成PCDNA3.1-GFP,通过限制性核酸内切酶NotI与BamHI对所建质粒进行分析后,转染HepG2细胞并观察绿色荧光蛋白表达。结果经限制性内切酶及转染HepG2细胞表达鉴定,证实成功构建了PCDNA3.1-GFP。结论成功构建成携有绿色荧光蛋白报告基因哺乳动物表达载体,该质粒可用于融合表达目的蛋白,并将目的蛋白表达定位。 展开更多
关键词 表达质粒 鉴定 绿色荧光蛋白报告基因 PCDNA3.1 限制性核酸内切酶 HepG2细胞 PCDNA3 限制性内切酶 基因片段 蛋白表达 细胞表达 表达载体 哺乳动物 融合表达 表达定位 组方法 多克隆 克隆人 分析后 转染
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HSPA2和SPATA6在彭波半细毛羊睾丸组织中的细胞定位及表达差异分析
10
作者 朱爱文 刘海霞 +5 位作者 德庆卓嘎 韩大勇 格桑加措 闫伟 平措班旦 朱戈辉 《草业科学》 CAS CSCD 北大核心 2024年第4期967-974,共8页
热休克蛋白A2(HSPA2)是热休克蛋白HSP70家族重要成员,能够促进睾丸支持细胞增殖;精子发生相关基因6(SPATA6)能够调控肌球蛋白合成的微丝运输系统,影响精子细胞骨架形成。在雄性哺乳动物生殖过程中,两者均起重要作用。为研究HSPA2和SPATA... 热休克蛋白A2(HSPA2)是热休克蛋白HSP70家族重要成员,能够促进睾丸支持细胞增殖;精子发生相关基因6(SPATA6)能够调控肌球蛋白合成的微丝运输系统,影响精子细胞骨架形成。在雄性哺乳动物生殖过程中,两者均起重要作用。为研究HSPA2和SPATA6在雄性彭波半细毛羊生殖过程中的表达规律和细胞定位,以不同年龄阶段(3月龄、12月龄和3岁龄)彭波半细毛羊睾丸组织为研究对象,运用实时荧光定量PCR(real time quantitative PCR,qRT-PCR)、Western blot和免疫组织化学染色法(IHC)从转录和翻译水平检测了HSPA2和SPATA6在不同年龄阶段彭波半细毛羊睾丸组织的表达水平和分布模式,分析预测HSPA2和SPATA6在彭波半细毛羊睾丸发育和精子发生过程中的调控作用。结果表明:12月龄和3岁龄彭波半细毛羊睾丸组织中HSPA2 mRNA的相对表达量以及蛋白表达量极显著高于3月龄(P<0.01);12月龄SPATA6 mRNA的相对表达量以及蛋白表达量极显著高于3月龄(P<0.01),显著高于3岁龄(P<0.05)。不同年龄阶段彭波半细毛羊睾丸组织的支持细胞和间质细胞中HSPA2和SPATA6蛋白均有分布。初步推断,HSPA2和SPATA6的表达水平变化在调控彭波半细毛羊精子发生过程和促进精子成熟中具有重要作用。 展开更多
关键词 彭波半细毛羊 热休克蛋白A2 精子发生相关基因6 睾丸 表达定位 免疫组化 蛋白质免疫印迹
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P21-GFP融合基因表达载体的构建与在视网膜色素上皮细胞的表达定位 被引量：3
11
作者 韩勇娟 曾水清 +1 位作者 胡义珍 张海江 《临床眼科杂志》 2005年第3期277-279,290,共4页
目的构建绿色荧光蛋白GFP-p21融合基因表达载体,并观察其在人视网膜色素上皮细胞中的表达及定位,为研究细胞周期蛋白激酶抑制因子p21对视网膜色素上皮细胞细胞周期的影响提供实验基础。方法以含有p21的全长序列的质粒为模板PCR扩增p21cD... 目的构建绿色荧光蛋白GFP-p21融合基因表达载体,并观察其在人视网膜色素上皮细胞中的表达及定位,为研究细胞周期蛋白激酶抑制因子p21对视网膜色素上皮细胞细胞周期的影响提供实验基础。方法以含有p21的全长序列的质粒为模板PCR扩增p21cDNA,应用基因重组技术与GFP基因融合,构建以绿色荧光蛋白GFP为报告基因的重组表达质粒pGFP-p21。利用脂质体转染体外培养的人视网膜色素上皮细胞,在活细胞状态下用荧光显微镜直接观察pGFP-p21融合蛋白在细胞中的分布和定位,用WesternBlot方法分析其蛋白的表达。结果1酶切、DNA测序均证实插入片断的正确性。2荧光显微镜观察结果显示在空载体pEGFP-C1转染组中,细胞内绿色荧光呈弥散分布;重组质粒pGFP-p21转染组中,绿色荧光主要集中在细胞核内。3WesternBlot证实了pGFP-P21融合基因的表达。结论成功的构建了pGFP-p21质粒。视网膜色素上皮细胞能高效表达pGFP-p21融合基因,且主要定位于细胞核内,与p21基因的表达方式相同。 展开更多
关键词 基因表达载体 培养的人视网膜色素上皮细胞 表达定位 细胞周期蛋白激酶抑制因子 Western 绿色荧光蛋白 荧光显微镜 基因重组技术 重组表达质粒 Blot 细胞核内 融合基因 PCR扩增 脂质体转染 DNA测序 PEGFP P21基因 全长序列
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绵羊GPx5基因克隆、生物信息学分析及表达特性的研究 被引量：5
12
作者 张春香 郭云雁 +4 位作者 白元生 杨子森 张国林 焦光月 任有蛇 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第7期1075-1083,共9页
本研究旨在克隆绵羊硒非依赖性谷胱甘肽过氧化酶5(GPx5)基因,预测蛋白结构与功能,并研究其在睾丸和附睾头中的表达定位特点。采用5′RACE和RT-PCR克隆GPx5基因,用生物信息学分析预测GPx5结构、特性和功能,采用免疫组化和Western blottin... 本研究旨在克隆绵羊硒非依赖性谷胱甘肽过氧化酶5(GPx5)基因,预测蛋白结构与功能,并研究其在睾丸和附睾头中的表达定位特点。采用5′RACE和RT-PCR克隆GPx5基因,用生物信息学分析预测GPx5结构、特性和功能,采用免疫组化和Western blotting方法进行表达定位研究。结果显示,绵羊GPx5的开放阅读框(ORF)660bp(GenBank:JQ 320282),GPx5编码219aa,分子量约25ku的碱性蛋白,第1~21个aa为潜在的信号肽,其三级结构域为αβ型,有11个可能磷酸化位点,有7种保守的特异性蛋白质激酶的结合位点;亚细胞定位预测显示GPx5存在于细胞外;其38~151aa属于谷胱甘肽过氧化酶家族保守结构域,其36~215aa类硫氧还蛋白超家族保守结构域。绵羊GPx5在附睾头的假复层柱状上皮细胞大量表达,附睾头上皮细胞和睾丸间质细胞少量表达,附睾头液和精浆中均有GPx5蛋白。绵羊GPx5是分泌型,具有谷胱甘肽过氧化酶活性和类硫氧还蛋白作用。GPx5可能是某信号转导通路的信号分子,但需进一步验证。 展开更多
关键词 GPx5 生物信息学分析 表达定位 睾丸和附睾头 绵羊
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鼠伤寒沙门菌六型分泌系统效应蛋白Clpv对巨噬细胞极化的影响 被引量：1
13
作者 杜付熙 王文婕 +8 位作者 尚珂 余祖华 李静 贾艳艳 廖成水 丁轲 张春杰 程相朝 陈松彪 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第7期2620-2632,共13页
【目的】探讨Ⅵ型分泌系统(typeⅥsecretion system,T6SS)效应蛋白Clpv在鼠伤寒沙门菌(Salmonella enterica serovar Typhimurium)致病过程中的功能。【方法】以鼠伤寒沙门菌SL1344基因组为模板克隆clpv基因,并比较与其他革兰氏阴性菌... 【目的】探讨Ⅵ型分泌系统(typeⅥsecretion system,T6SS)效应蛋白Clpv在鼠伤寒沙门菌(Salmonella enterica serovar Typhimurium)致病过程中的功能。【方法】以鼠伤寒沙门菌SL1344基因组为模板克隆clpv基因,并比较与其他革兰氏阴性菌台湾假单胞菌(Pseudomonas taiwanensis)、植生拉乌尔菌(Raoultella planticola)、鳗利斯顿氏菌(Listonella anguillarum)、菠萝多源菌(Pantoea ananatis)、粘放线菌(Actinomyces viscosus)和大肠埃希菌(Escherichia coli)的同源性;将clpv基因克隆至pEGFP-N1载体构建重组质粒pEGFP-Clpv,利用Western blotting、实时荧光定量聚合酶链式反应(real-time quantitative polymerase chain reaction,q-PCR)、荧光显微镜以及流式细胞术检测蛋白表达、定位及诱导小鼠巨噬细胞M1型和M2型极化水平。【结果】clpv基因全长为2637 bp,与台湾假单胞菌的同源性最高;Western blotting、qPCR和免疫荧光检测表明重组蛋白大小约120 kDa,在细胞中有明显绿色荧光并且主要定位于细胞膜;q-PCR和流式细胞术结果发现Clpv转染组巨噬细胞M1型极化显著增加(P<0.01),M2型巨噬细胞极化显著减少(P<0.01)。【结论】成功克隆表达鼠伤寒沙门菌T6SS效应蛋白Clpv,并明确其胞内表达定位以及对巨噬细胞极化的影响。 展开更多
关键词 鼠伤寒沙门菌 Ⅵ型分泌系统 Clpv蛋白 表达定位 极化
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神经生长因子抗体对哮喘模型大鼠肺中趋化素样因子1表达的影响 被引量：5
14
作者 孔令雷 胡金凤 陈乃宏 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第6期757-760,共4页
目的观察神经生长因子(NGF)抗体对OVA诱导的哮喘模型大鼠肺中趋化因子CKLF1的表达变化。方法采用OVA诱导的大鼠哮喘模型,通过腹腔给予NGF(8 ng.kg-1)及NGF抗体(0.1 mg.L-1),采用Western blot、ELISA和免疫组化观察CKLF1在支气管肺泡灌洗... 目的观察神经生长因子(NGF)抗体对OVA诱导的哮喘模型大鼠肺中趋化因子CKLF1的表达变化。方法采用OVA诱导的大鼠哮喘模型,通过腹腔给予NGF(8 ng.kg-1)及NGF抗体(0.1 mg.L-1),采用Western blot、ELISA和免疫组化观察CKLF1在支气管肺泡灌洗液(BALF)及肺组织中的表达变化。结果 CKLF1在OVA诱导的哮喘模型大鼠肺组织中的蛋白表达升高(P<0.05);NGF抗体能够降低CKLF1的表达;CKLF1在哮喘大鼠BALF中的含量升高(P<0.05),NGF抗体能够降低BALF中CKLF1的含量(P<0.05);NGF对肺组织及BALF中CKLF1的表达没有明显的影响。结论 NGF抗体能够抑制哮喘模型大鼠肺组织及支气管肺泡灌洗液中CKLF1的表达和释放,改善哮喘症状。 展开更多
关键词 趋化素样因子1 神经生长因子 哮喘 OVA 支气管肺泡灌洗液 表达定位
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双峰驼TLR5抗体制备及其在淋巴结中的表达
15
作者 王亭玮 刘转霞 +6 位作者 陆佳 李沛轩 刘柯江 曾巍巍 索南吉 谢东旭 王雯慧 《西北农林科技大学学报（自然科学版）》 CSCD 北大核心 2023年第12期1-8,共8页
【目的】制备兔抗双峰驼Toll样受体5(TLR5)的多克隆抗体并鉴定其活性。【方法】选择双峰驼TLR5基因序列,经软件分析选择其编码区的膜外区1~499氨基酸位为主要抗原位,再选取对应的核苷酸序列进行基因合成,并与pET-28a(+)载体连接构建重... 【目的】制备兔抗双峰驼Toll样受体5(TLR5)的多克隆抗体并鉴定其活性。【方法】选择双峰驼TLR5基因序列,经软件分析选择其编码区的膜外区1~499氨基酸位为主要抗原位,再选取对应的核苷酸序列进行基因合成,并与pET-28a(+)载体连接构建重组质粒pET28a-TLR5,对其进行BamHⅠ和XhoⅠ双酶切鉴定。将pET28a-TLR5转染大肠杆菌原核表达系统,用IPTG进行诱导表达,对IPTG浓度(0.1,0.2,0.4,0.6,0.8,1.0 mol/L)和诱导时间(2,3,4,5,6,7,8,9 h)进行优化。将表达的蛋白经亲和层析法纯化后免疫新西兰白兔以制备多克隆抗体,采用ELISA法检测多抗效价,用Western blot检测和免疫组化验证评价多克隆抗体的特异性。【结果】成功构建了重组质粒pET28a-TLR5,经IPTG诱导后获得了重组蛋白(大小约为57 ku),且以包涵体的形式表达。IPTG最佳诱导表达条件为:IPTG浓度为1 mol/L,诱导时间为6 h。TLR5多抗血清效价为1∶128000。Western blot鉴定表明,TLR5多抗血清能特异性识别目的蛋白;免疫组化结果表明,TLR5多抗能很好地识别成年双峰驼十二指肠肠系膜淋巴中的TLR5阳性细胞。【结论】成功制备出特异性良好的兔抗双峰驼TLR5多克隆抗体,能够用于TLR5的检测。 展开更多
关键词 双峰驼 TLR5 原核表达 抗体制备 表达定位
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己烯雌酚对小鼠子宫内膜层粘连蛋白表达的影响 被引量：4
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作者 魏纪东 张顺利 +3 位作者 靳萍 廖媛 赵瑾 杨林松 《河南师范大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 2002年第1期112-114,共3页
研究己烯雌酚 (DES)影响下小鼠子宫内膜层粘连蛋白 (LN)的表达变化 .2 6只雌性昆明小鼠随机分为三组 :未孕对照组 ,小剂量 (0 .2 8μgDES /g体重 )注射组 ,大剂量 (1.1μgDES /g体重 )注射组 .用免疫组化SP法和图像分析技术进行LN定位... 研究己烯雌酚 (DES)影响下小鼠子宫内膜层粘连蛋白 (LN)的表达变化 .2 6只雌性昆明小鼠随机分为三组 :未孕对照组 ,小剂量 (0 .2 8μgDES /g体重 )注射组 ,大剂量 (1.1μgDES /g体重 )注射组 .用免疫组化SP法和图像分析技术进行LN定位、定量测定 .正常小鼠子宫内膜LN在上皮基膜、血管内皮基膜均有表达 .注射己烯雌酚后 ,LN表达部位基本不变 ,表达量有明显增加 (P <0 .0 5 ) ,并随己烯雌酚剂量增加而增强 (P <0 .0 5 ) .通过影响LN的表达 ,可能是雌激素调控胚泡着床的机理之一 . 展开更多
关键词 己烯雌酚 层粘连蛋白 子宫内膜 免疫组织化学 图像分析 小鼠 胚泡着床 表达定位
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剪接因子SQD在家蚕中的表达定位与功能分析
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作者 蔡敏玲 张康 +2 位作者 张纯 邓惠敏 朱子丹 《环境昆虫学报》 CSCD 北大核心 2023年第2期451-463,共13页
BmSQD(Bombyx mori SQUID)是一种具有RRM结构域(RNA recognition motif,RRM)的核内不均一核糖核蛋白(heterogeneous nuclear ribonucleoproteins,hnRNPs)。为探究SQD在家蚕中的表达定位和功能,在生物信息学分析和克隆表达与抗体制备的... BmSQD(Bombyx mori SQUID)是一种具有RRM结构域(RNA recognition motif,RRM)的核内不均一核糖核蛋白(heterogeneous nuclear ribonucleoproteins,hnRNPs)。为探究SQD在家蚕中的表达定位和功能,在生物信息学分析和克隆表达与抗体制备的基础上,本文通过对变态发育和胚胎发育时期部分组织的BmSQD蛋白水平和mRNA水平表达量进行分析,辅以组织细胞定位的免疫组化分析,对SQD蛋白的基本特性和在家蚕Bombyx mori中的表达定位及功能进行了研究。生物信息学分析显示,昆虫中的SQD同源基因相似性高,尤其是SQD蛋白二级结构的α螺旋和β折叠按照β1-α1-β2-β3-α2-β4的空间顺序组合形成的两个RRM结构域在昆虫中高度保守;BmSQD是一种亲水性且具有特定空间结构的hnRNPs蛋白,存在潜在的磷酸化位点;BmSQD在家蚕中的大部分组织中都有表达,尤其在卵巢与精巢等重要组织,且主要在家蚕发育的重要时期如胚胎发育与变态发育时期高表达,主要定位在细胞核内,对基因转录后调节起到剪接调控作用。本文为研究SQD蛋白在昆虫变态发育和胚胎发育中的剪接调控机制提供数据参考的意义。 展开更多
关键词 家蚕 BmSQD 生物信息学分析 表达定位 剪接调控机制
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热休克蛋白90在门静脉高压大鼠肠系膜血管中的表达 被引量：2
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作者 艾建华 杨镇 《中华实验外科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第2期224-225,共2页
目的　研究门静脉高压症时肠系膜血管热休克蛋白 90 (HSP90 )的表达 ,并对其表达定位。方法　SD大鼠分为实验组和假手术组 ,用门静脉部分结扎法制作门静脉高压模型。 4周后取肠系膜血管组织 ,采用免疫组织化学技术、免疫印迹 (Westernbl... 目的　研究门静脉高压症时肠系膜血管热休克蛋白 90 (HSP90 )的表达 ,并对其表达定位。方法　SD大鼠分为实验组和假手术组 ,用门静脉部分结扎法制作门静脉高压模型。 4周后取肠系膜血管组织 ,采用免疫组织化学技术、免疫印迹 (Westernblot)、逆转录 聚合酶链反应 (RT PCR)法在蛋白及mRNA水平测定门静脉高压大鼠肠系膜血管HSP90的表达。结果　门静脉高压大鼠肠系膜血管HSP90的表达增强 ,且保持在蛋白及mRNA水平上的一致。HSP90不仅在血管内膜而且还在血管平滑肌层有明显的表达。结论　HSP90可能参与了门静脉高压内脏血管病变的形成 ,从而为进一步揭示门静脉高压内脏血管病变的发病机制提供了新的思路。 展开更多
关键词 肠系膜 门静脉高压 血管病变 表达定位 大鼠 热休克蛋白90 HSP90 MRNA水平 逆转录一聚合酶链反应 免疫印迹
原文传递
ABCE1基因在人肾小球系膜细胞中的表达 被引量：4
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作者 周红丽 靳蕊霞 +1 位作者 韩亚荣 黄波 《基础医学与临床》 CSCD 北大核心 2010年第4期424-425,共2页
关键词 人肾小球系膜细胞 E1基因 ATP结合盒转运子 ABC 家族成员 表达定位 组织器官 线粒体
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转移相关基因1在肺癌中的研究进展
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作者 薛洪省 孙海迪 +1 位作者 杜婉钰 顾春东 《癌症进展》 2023年第11期1171-1175,共5页
肺癌是一种转移和耐药高发的肿瘤类型,如何有效控制转移和耐药仍是目前亟需解决的问题,但目前对于临床中肺癌的转移仍缺乏深层次的机制认识和足够的治疗靶点。通过对肿瘤转移的复杂过程进行研究,找到转移过程中“关键节点”基因及其蛋... 肺癌是一种转移和耐药高发的肿瘤类型,如何有效控制转移和耐药仍是目前亟需解决的问题,但目前对于临床中肺癌的转移仍缺乏深层次的机制认识和足够的治疗靶点。通过对肿瘤转移的复杂过程进行研究,找到转移过程中“关键节点”基因及其蛋白产物具有重要意义。研究发现,转移相关基因1(MTA1)在肿瘤转移和耐药过程中起着至关重要的作用。本文通过梳理相关文献报道,对MTA1在肺癌中的表达定位、发生发展中的调控机制及应用价值、存在的问题进行综述,为肺癌诊治提供新的方向和思路。 展开更多
关键词 肺癌 转移相关基因1 表达定位 调控机制
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