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东方田鼠骨髓基因池的构建及抗日本血吸虫抗性相关基因的筛选 被引量：10
1
作者 秦志强 胡维新 +4 位作者 邬国军 许冰 申群喜 龚强 吴驰 《生命科学研究》 CAS CSCD 2004年第4期333-338,共6页
利用表达克隆法,从东方田鼠骨髓细胞中克隆出抗日本血吸虫抗性相关基因.首先提取高质量的mRNA,逆转录成cDNA,将cDNA与哺乳动物细胞瞬时表达载体pcDNA1.1/Amp连接,建立表达cDNA文库;将cDNA文库分成A-H8个基因池,转染HEK293细胞,48h后收... 利用表达克隆法,从东方田鼠骨髓细胞中克隆出抗日本血吸虫抗性相关基因.首先提取高质量的mRNA,逆转录成cDNA,将cDNA与哺乳动物细胞瞬时表达载体pcDNA1.1/Amp连接,建立表达cDNA文库;将cDNA文库分成A-H8个基因池,转染HEK293细胞,48h后收集培养上清,获得条件培养基.将条件培养基与日本血吸虫童虫一起培养,观察杀虫效应,取对童虫抑制作用最强的基因池E再分成8个亚基因池E1-8,分别转染HEK293细胞,并将条件培养基与血吸虫童虫一起培养,获得具有明显抑制血吸虫童虫活性的亚基因池E77,按上述方法反复进行筛选,直到获得有抑制作用的单个克隆,该技术的建立为克隆东方田鼠抗日本血吸虫抗性相关基因以及研究其作用机制奠定基础. 展开更多
关键词 东方田鼠 基因池 表达克隆法 日本血吸虫 抗性相关基因
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多发性骨髓瘤恶性相关基因快速表达克隆法的建立 被引量：1
2
作者 田菁燕 胡维新 钟慧 《生命科学研究》 CAS CSCD 2003年第1期42-47,共6页
为从多发性骨髓瘤细胞中克隆与鉴定恶性相关基因并试图阐明其发病分子机制,建立了一种改进的快速表达克隆法,简单、快捷、直接从多发性骨髓瘤细胞株ARH 77cDNA文库中克隆恶性相关基因.其特点是常用的表达克隆法与经典的DNA介导的NIH 3T... 为从多发性骨髓瘤细胞中克隆与鉴定恶性相关基因并试图阐明其发病分子机制,建立了一种改进的快速表达克隆法,简单、快捷、直接从多发性骨髓瘤细胞株ARH 77cDNA文库中克隆恶性相关基因.其特点是常用的表达克隆法与经典的DNA介导的NIH 3T3转染实验相结合,直接从cDNA表达文库中克隆恶性相关基因.首先建立高质量的cDNA表达文库,将cDNA表达文库分成几个基因池,转染NIH 3T3细胞;将转化活性最强的基因池再分成几个亚基因池,转染NIH 3T3细胞;将转化活性最强的亚基因池再分成次级亚基因池,直到获得有明显转化活性的单个cDNA克隆.该技术亦可用于从其他肿瘤细胞中克隆恶性相关基因. 展开更多
关键词 基因克隆 表达克隆法 恶性相关基因 多发性骨髓瘤
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新的表达克隆法
3
作者 孙国凤 《生物技术通报》 CAS CSCD 1995年第5期28-28,共1页
世界最大的产业用酶厂家丹麦Novo Nordisk公司表示正在实用化不必纯化酶、但克隆酶的基因,以曲霉为宿主大量生产酶的新系统。该系统是首先使用大肠杆菌构建编码酶的、真菌的DNA文库。接着在酵母中导入文库基因,获得在平皿上检测酶活性... 世界最大的产业用酶厂家丹麦Novo Nordisk公司表示正在实用化不必纯化酶、但克隆酶的基因,以曲霉为宿主大量生产酶的新系统。该系统是首先使用大肠杆菌构建编码酶的、真菌的DNA文库。接着在酵母中导入文库基因,获得在平皿上检测酶活性的菌株,再将基因移到曲霉Aspergillus上,大量生产具有目的活性的酶。Novo公司正在配备用该系统大量生产的酶是“Monocomponent enzyme(单一成分酶)”。Novo公司确立以洗涤剂用脂酶为开湍事业化的新系统可以说是很有优势的。 Novo公司11月销售的纤维加工用重组纤维素酶制剂也是用该系统开发的产品。据说这种单一成分酶可高效率地分解非结晶区域的纤维素的结合,但强度不会降低且有效地防止起绒毛。 展开更多
关键词 表达克隆法 大量生产 纤维素酶制剂 曲霉Aspergillus 新系统 系统开发 结晶区域 起绒毛 基因 洗涤剂用
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