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重组梅毒螺旋体表位抗原及多表位嵌合抗原研究 被引量:8
1
作者 宋晓国 凌世淦 +4 位作者 张贺秋 马贤凯 陈坤 朱翠侠 邱艳 《军事医学科学院院刊》 CSCD 北大核心 2002年第1期28-31,34,共5页
目的 :为梅毒检测试剂提供抗原性强、特异性高的重组表位抗原和多表位嵌合抗原。方法 :对梅毒螺旋体的主要抗原蛋白TpN15 ,TpN17,TpN44 .5和TpN47的优势抗原表位进行计算机分析 ,从中选取具有强抗原性的表位。根据大肠杆菌的偏性密码子 ... 目的 :为梅毒检测试剂提供抗原性强、特异性高的重组表位抗原和多表位嵌合抗原。方法 :对梅毒螺旋体的主要抗原蛋白TpN15 ,TpN17,TpN44 .5和TpN47的优势抗原表位进行计算机分析 ,从中选取具有强抗原性的表位。根据大肠杆菌的偏性密码子 ,推断出这些抗原表位的基因序列 ,采用化学合成法合成表位抗原基因并克隆表达。结果 :获得了梅毒各抗原蛋白的优势抗原表位 ,构建了各表位基因及多表位嵌合基因的表达质粒 ,在E .coli中获得了高效表达。用获得的重组蛋白质纯品 ,对 12 2份心磷脂测定阳性血清样品进行测定 ,证明重组梅毒表位抗原和多表位嵌合抗原具有预期的抗原活性。结论 :重组梅毒表位抗原及多表位嵌合抗原具有较好的抗原活性 。 展开更多
关键词 梅毒螺旋体 表位抗原 嵌合抗原 血清诊断 研究
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应用蛋白芯片技术筛选戊型肝炎病毒优势表位抗原 被引量:3
2
作者 陈坤 宋晓国 +5 位作者 王国华 朱翠侠 冯晓燕 王佑春 李卓 张贺秋 《中国实验诊断学》 北大核心 2009年第11期1485-1487,共3页
目的筛选戊型肝炎病毒优势表位抗原以便研发新型戊型肝炎诊断试剂。方法通过计算机辅助软件分析,利用改构的高效表达载体表达了HEV 1型与HEV 4型ORF2和ORF3的17种表位抗原,利用蛋白芯片技术平台筛选优势表位抗原。结果在所获得的17种表... 目的筛选戊型肝炎病毒优势表位抗原以便研发新型戊型肝炎诊断试剂。方法通过计算机辅助软件分析,利用改构的高效表达载体表达了HEV 1型与HEV 4型ORF2和ORF3的17种表位抗原,利用蛋白芯片技术平台筛选优势表位抗原。结果在所获得的17种表位抗原中筛选到4种可以作为研发新型戊型肝炎诊断试剂候选抗原的优势表位抗原。结论利用蛋白芯片技术快速准确地筛选到4种可用于研发新型戊型肝炎诊断试剂的候选优势表位抗原。 展开更多
关键词 戊型肝炎病毒 表位抗原 蛋白芯片
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Prediction of HLA-A 2.1-restricted CTL epitopes from IGFBP7 antigen of lung carcinoma 被引量:1
3
作者 Zhao Weipeng Long Haixia +2 位作者 Zhu Bo Duan Yuzhong Chen Zhengtang 《Journal of Medical Colleges of PLA(China)》 CAS 2009年第2期63-68,共6页
Objective: With the development of peptide-based cancer specific immunotherapy, the prediction of CTL epitopes from insulin-like growth factor-binding protein 7 (IGFBP7) is very important for some research about tu... Objective: With the development of peptide-based cancer specific immunotherapy, the prediction of CTL epitopes from insulin-like growth factor-binding protein 7 (IGFBP7) is very important for some research about tumor metastasis. Because HLA-A2.1-expressing individuals cover 〉50% in the population of China, we aimed at identifying IGFBPT-encoded peptide presented by HLA-A2.1. Methods: In our study, a HLA-A2.1 restricted CTL epitope was identified by using the following two-step procedure: (a) computer-based epitope prediction from the amino acid sequence of IGFBP7 antigen; (b) Validation with epitope molecular modeling. Results: We obtained four epitopes with high immunogenicity scores by all of the three algorithms, i.e., BIMAS, SYFPEITH1 and IMTECH. Each of the four candidates satisfied the criteria of the HLA-A2.1- restricted CTL epitopes in molecular modeling analysis. Conclusion: The combination of BIMAS, SYFPEITHI and IMTECH method can improve the prediction efficiency and accuracy. Due to this research herein, this four epitopes have potential value for further studied, also have potential application in peptide-mediated immunotherapy. These epitopes may be useful in the design of therapeutic peptide vaccine for lung carcinoma and as immunotherapeutic strategies against lung carcinoma after identified by immunology experiment. 展开更多
关键词 Insulin-like growth factor-binding protein 7 EPITOPE Cytotoxic T lymphocyte
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自身免疫性血细胞减少症
4
作者 JudithMarsh 张薇 沈悌 《国际内科双语杂志(中英文)》 2002年第2期92-96,34-37,共9页
自身免疫性血细胞减少症的特点是患者自身免疫系统产生抗体并直接与下列细胞的表位抗原相互作用:
关键词 自身免疫性血细胞减少症 自身免疫系统 抗体 表位抗原 发病机制 红细胞 中性粒细胞 血小板
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基于结核分枝杆菌多表位抗原的诊断试剂研制及临床评价
5
作者 陈堃 冯晓燕 +6 位作者 杨锡琴 宋晓国 王国华 朱翠侠 邓敏 许辛 张贺秋 《中国卫生检验杂志》 北大核心 2012年第10期2379-2380,共2页
目的:基于结核分枝杆菌多表位抗原研制的新型结核免疫诊断试剂进行临床评价,评价其灵敏度和特异性,探讨其应用价值。方法:采用建立的间接ELISA方法,分别检测结核病和肺部其他疾病及健康人群血清样品。结果:508份肺结核患者样品中,检出阳... 目的:基于结核分枝杆菌多表位抗原研制的新型结核免疫诊断试剂进行临床评价,评价其灵敏度和特异性,探讨其应用价值。方法:采用建立的间接ELISA方法,分别检测结核病和肺部其他疾病及健康人群血清样品。结果:508份肺结核患者样品中,检出阳性433份,灵敏度85.23%(433/508),健康人523份中,检出阳性49份,特异性90.63%(49/523)。结论:研制的新型的结核抗体免疫诊断试剂灵敏度高,特异性强,可用于结核感染的大规模筛查试验。 展开更多
关键词 结核分支杆菌 表位抗原 酶联免疫法
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噬菌体展示外源多肽的免疫原性研究 被引量:11
6
作者 王桂云 朱筱娟 王丽 《东北师大学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2001年第3期101-104,共4页
利用噬菌体展示技术将丝状噬菌体fd基因 8克隆入 pKK2 2 3-3质粒中 .将白色念珠菌特异表位基因插入到修饰后的质粒载体中 ,并制备了杂合噬菌体 .利用纯化的该表位抗原PA免疫小鼠 ,结果表明该噬菌体 -表位抗原PA在有无佐剂存在的情况下... 利用噬菌体展示技术将丝状噬菌体fd基因 8克隆入 pKK2 2 3-3质粒中 .将白色念珠菌特异表位基因插入到修饰后的质粒载体中 ,并制备了杂合噬菌体 .利用纯化的该表位抗原PA免疫小鼠 ,结果表明该噬菌体 -表位抗原PA在有无佐剂存在的情况下均产生抗体 ,用ELISA方法采用双波长 (4 50 / 6 30nm)检测抗体 ,其在有无佐剂存在的情况下光密度值无明显差别 .免疫后小鼠脾淋巴细胞在有无佐剂的情况下均产生明显增殖 ,未见明显的毒副作用 ,具有良好的安全性 .该方法产生的抗体与传统的合成多肽相比具有方法简便、低价高效等特点 .它将成为生产高效低价疫苗的有效途径 .该噬菌体 -表位抗原PA为真菌疫苗的研制打下基础 . 展开更多
关键词 噬菌体-表位抗原 噬菌体展示 免疫 疫苗 外源多肽
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乙型肝炎病毒多表位抗原基因的设计、合成及表达 被引量:10
7
作者 骆利敏 李明 +3 位作者 夏虎 黄建生 王萍 董文其 《中华微生物学和免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第6期426-432,共7页
目的 设计合成乙型肝炎病毒多表位抗原基因并在大肠杆菌中表达 ,以期获得兼具预防和治疗作用的新型乙肝疫苗。方法 设计并合成一条乙型肝炎病毒 (HBV)多表位抗原基因 (P T) ,该基因包括HBV前S2区的核苷酸序列 ,和分别来自乙型肝炎表... 目的 设计合成乙型肝炎病毒多表位抗原基因并在大肠杆菌中表达 ,以期获得兼具预防和治疗作用的新型乙肝疫苗。方法 设计并合成一条乙型肝炎病毒 (HBV)多表位抗原基因 (P T) ,该基因包括HBV前S2区的核苷酸序列 ,和分别来自乙型肝炎表面抗原、乙型肝炎核心抗原、乙型肝炎DNA聚合酶的其它 4个连续的HLA限制性抗原表位的核苷酸序列。基因合成后克隆入载体质粒pWR4 5 0 1,转化大肠杆菌BL2 1,IPTG诱导P T基因与载体质粒的 β 半乳糖酐酶基因融合表达。结果 成功合成并拼接出乙型肝炎多表位抗原基因P T ,阳性重组子PWR HBV P T构建成功 ,并在大肠杆菌中融合表达出相对分子质量 (Mr)约 75× 10 3的碱性蛋白质。结论 初步设计成功HBV多表位抗原基因 ,在大肠杆菌中可表达出具有良好抗原性的重组融合蛋白 ,可能是较理想的HBV预防、治疗性疫苗候选物。 展开更多
关键词 乙型肝炎病毒 表位抗原基因 基因表达 HBV 疫苗
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小鼠及家兔对丙型肝炎病毒多表位DNA疫苗免疫应答的研究 被引量:12
8
作者 黄建生 陈丽珊 +8 位作者 雷呈祥 解咏梅 张潜 沈先荣 贾福星 张丽芸 陈立茵 郭明秋 任大明 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2001年第1期52-54,共3页
目的探讨HCV复合多表位DNA疫苗的可行性。方法把HCV多表位抗原基因PCX克隆到真核表达载体pREP9(RSV启动子)及pCDNA3(CMV启动子)中,构建真核表达载体pREP9/PCX及pcDNA3/PCX。将其... 目的探讨HCV复合多表位DNA疫苗的可行性。方法把HCV多表位抗原基因PCX克隆到真核表达载体pREP9(RSV启动子)及pCDNA3(CMV启动子)中,构建真核表达载体pREP9/PCX及pcDNA3/PCX。将其肌肉注射免疫小鼠及家兔,检测特异性体液免疫和细胞免疫的水平,并观察免疫小鼠的安全性。结果质粒pREP9/PCX及pcDNA3/PCX于免疫后第 6wk和第 10 wk时,开始可检测到抗 GZ-PCX IgG,随后抗体滴度逐渐升高,但水平较低,持续时间较短。pcDNA3/PCX肌肉注射免疫家兔后,于第8wk开始出现特异性抗体,至 3个月后滴度升至 1: 3 200,随后也开始下降。免疫小鼠及家兔可诱发针对GZ-PCX融合蛋白的迟发型超敏反应,并刺激淋巴细胞转化。免疫后小鼠的体重正常,肝脾脏未见明显肿大,具有良好的安全性。结论HCV多表位基因可诱发特异性免疫应答且安全性好,为HCV疫苗的研究提供了一定的理论及实验依据。 展开更多
关键词 丙型肝炎病毒 表位抗原 基因免疫 免疫应答
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口蹄疫病毒复合多表位DNA疫苗的设计及构建 被引量:11
9
作者 马鸣潇 金宁一 +8 位作者 刘慧娟 鲁会军 田明尧 金明兰 沈国顺 张林 李旭 计越 金扩世 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2007年第3期190-194,共5页
目的构建口蹄疫病毒(FMDV)复合多表位基因工程疫苗表达盒OAAT及其DNA疫苗。方法以O型、A型FMDV结构蛋白VP1全基因和Asia1型FMDV两个基因拓扑型的结构蛋白VP1基因上的5个抗原表位基因作为主要免疫原基因,非结构蛋白3ABC上的2个Th2细胞表... 目的构建口蹄疫病毒(FMDV)复合多表位基因工程疫苗表达盒OAAT及其DNA疫苗。方法以O型、A型FMDV结构蛋白VP1全基因和Asia1型FMDV两个基因拓扑型的结构蛋白VP1基因上的5个抗原表位基因作为主要免疫原基因,非结构蛋白3ABC上的2个Th2细胞表位基因及结构蛋白VP4上的1个Th2细胞表位基因作为辅助基因,构建表达盒。将构建好的表达盒OAAT克隆到真核表达载体pVAX1 PCMV启动子下游,构建三价口蹄疫核酸疫苗pVAX1-OAAT,并用Western blot和IFA方法检测目的蛋白在HeLa细胞中的表达。结果通过InsightⅡ软件同源建模和DNAStar5.0软件分析表明,所构建的FMDV复合多表位基因工程疫苗表达盒OAAT理论上符合设计要求,且在真核细胞获得了正确表达。结论已成功设计FMDV复合多表位基因工程疫苗表达盒OAAT,并构建了三价口蹄疫核酸疫苗pVAX1-OAAT。 展开更多
关键词 口蹄疫病毒 复合多表位抗原 表达盒 DNA疫苗
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HCV复合多表位抗原基因表达及免疫原性的研究 被引量:10
10
作者 黄建生 解咏梅 +1 位作者 林元凯 任大明 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 1999年第3期268-271,共4页
分类号Q781文献标识码A文章编号00016209(1999)03026871丙型肝炎是常见的传染病之一,易于慢性化及发展为肝硬化,且与肝癌的发生关系密切,目前尚无理想的防治手段。国内外对丙型肝炎疫苗的研究仍处... 分类号Q781文献标识码A文章编号00016209(1999)03026871丙型肝炎是常见的传染病之一,易于慢性化及发展为肝硬化,且与肝癌的发生关系密切,目前尚无理想的防治手段。国内外对丙型肝炎疫苗的研究仍处于克隆表达HCV部分基因产物或合成... 展开更多
关键词 丙型肝炎病毒 表位抗原基因 免疫原性
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梅毒螺旋体优势表位抗原嵌合表达蛋白对国家参考品的反应性 被引量:8
11
作者 陈坤 张贺秋 +5 位作者 宋晓国 王国华 朱翠侠 刘荷中 邱艳 凌世淦 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2003年第2期106-107,共2页
目的 采用含梅毒螺旋体 (Tp)不同优势表位抗原连接嵌合表达 ,筛选用于ELISA试剂检测梅毒抗体的多表位抗原。方法 筛选Tp优势抗原表位 ,进行不同的连接嵌合表达 ,用于ELISA试剂检测 3 0份国家参考品血清。结果 不同抗原组合连接 (Tp15... 目的 采用含梅毒螺旋体 (Tp)不同优势表位抗原连接嵌合表达 ,筛选用于ELISA试剂检测梅毒抗体的多表位抗原。方法 筛选Tp优势抗原表位 ,进行不同的连接嵌合表达 ,用于ELISA试剂检测 3 0份国家参考品血清。结果 不同抗原组合连接 (Tp15 47、Tp42 15 47、Tp17 42 15 47)对血清的反应性不同。结论 含有多个抗原表位的嵌合抗原 。 展开更多
关键词 梅毒螺旋体 优势表位抗原 嵌合表达蛋白 酶联免疫检测试剂
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口蹄疫三价重组鸡痘病毒疫苗分子设计及其构建 被引量:9
12
作者 马鸣潇 金宁一 +6 位作者 刘慧娟 沈国顺 郑敏 金明兰 鲁会军 霍晓伟 马海利 《高技术通讯》 CAS CSCD 北大核心 2007年第3期288-294,共7页
针对我国口蹄疫(FMD)流行情况,利用计算机软件模拟分析,构建了口蹄疫病毒(FMDV)复合多表位基因工程疫苗表达盒OAAT。该表达盒以O型、A型FMDV结构蛋白VP1全基因和AsiaⅠ型FMDV2个基因拓扑型的结构蛋白VP1基因上的5个抗原表位基因(其... 针对我国口蹄疫(FMD)流行情况,利用计算机软件模拟分析,构建了口蹄疫病毒(FMDV)复合多表位基因工程疫苗表达盒OAAT。该表达盒以O型、A型FMDV结构蛋白VP1全基因和AsiaⅠ型FMDV2个基因拓扑型的结构蛋白VP1基因上的5个抗原表位基因(其中2个抗原表位来源于FMDVIND63/7株,该毒株与我国新疆分离株属于同一基因拓扑型,其余3个抗原表位来源于FMDVYNBS/58株)作为主要免疫原基因,以非结构蛋白上的2个Th2细胞表位基因及结构蛋白上的1个Th2细胞表位基因作为辅助基因。将构建好的表达盒OAAT和猪IL-18基因分别插入到鸡痘病毒(FPV)表达载体pUTA-16-LacZ复合启动子(ATI-P7.5×20)和单一启动子(P7.5)下游,构建了携带OAAT表达盒和猪IL-18基因的重组鸡痘病毒转移载体质粒pUTAL-OAAT-IL18。应用脂质体转染法,将重组鸡痘病毒转移载体质粒与282E4株FPV共转染鸡胚成纤维细胞(CEF),经BrdU进行3次加压蚀斑筛选后,以不同代次的细胞mRNA为模板,利用FMDVVP1基因和猪IL-18基因特异引物进行RT-PCR和IFA检测,筛选出OAAT和猪IL-18基因共表达的重组鸡痘病毒rF-PV-OAAT-IL18,该重组鸡痘病毒的构建为新型FMDV活载体疫苗的研究奠定了基础。 展开更多
关键词 复合多表位抗原 表达盒 OAAT口蹄疫病毒 鸡痘病毒
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刚地弓形虫多表位抗原基因在转基因番茄中的表达研究 被引量:7
13
作者 周晓红 黄小琴 +4 位作者 钟任佳 朱巧珍 赵莹 郭瑜琪 陈晓光 《中国寄生虫学与寄生虫病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第6期432-437,共6页
目的获得稳定表达弓形虫多表位抗原基因(Tg-MAG)的转基因番茄植株。方法用植物组成型启动子E35S、番茄果实特异性E82.2启动子以及E35S-E81.1复合式启动子驱动弓形虫Tg-MAG的植物表达载体pC35MG、pCE2MG与pC35E1MG,以农杆菌介导的T-DNA... 目的获得稳定表达弓形虫多表位抗原基因(Tg-MAG)的转基因番茄植株。方法用植物组成型启动子E35S、番茄果实特异性E82.2启动子以及E35S-E81.1复合式启动子驱动弓形虫Tg-MAG的植物表达载体pC35MG、pCE2MG与pC35E1MG,以农杆菌介导的T-DNA转化法转化番茄子叶和下胚轴;经芽诱导、伸长以及生根的连续性抗性筛选和培育,获得Tg-MAG转基因番茄植株,练苗后移栽花盆中培育至开花、结果。用PCR、RT-PCR、蛋白质印迹(Western blotting)分别对Tg-MAG转基因植株进行DNA、RNA、蛋白水平的鉴定。结果获得的Tg-MAG转基因番茄植株经PCR和RT-PCR鉴定,得到预期360bp的Tg-MAG片段,经Western blotting筛选获得能正确表达预期相对分子质量(Mr)为11900的Tg-MAG重组蛋白,且8株具有免疫反应性,其中有2株于番茄果实中所表达的重组蛋白能与抗弓形虫速殖子主要表面抗原1(SAG1)单克隆抗体K7H3发生强免疫反应。结论获得Tg-MAG转基因番茄株系,在其果实中成功表达具有良好免疫反应性的Tg-MAG重组蛋白。 展开更多
关键词 刚地弓形虫 表位抗原基因 转基因番茄 表达
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HCV多表位抗原基因的表达及其在小鼠中诱导的抗体应答研究 被引量:6
14
作者 王子来 陈丽珊 +3 位作者 李琦涵 陈肖楚 程帆 任大明 《复旦学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2004年第2期163-168,174,共7页
丙型肝炎病毒 (HCV)是引起病毒性非甲非乙肝炎的主要病原 .全世界约有 1.7亿HCV的感染者 ,我国估计占 4 0 0 0万以上 .发展有效的丙型肝炎疫苗刻不容缓 .构建了 3段串联重复的丙型肝炎病毒多表位抗原基因 3pcx ,将其克隆到His融合表达载... 丙型肝炎病毒 (HCV)是引起病毒性非甲非乙肝炎的主要病原 .全世界约有 1.7亿HCV的感染者 ,我国估计占 4 0 0 0万以上 .发展有效的丙型肝炎疫苗刻不容缓 .构建了 3段串联重复的丙型肝炎病毒多表位抗原基因 3pcx ,将其克隆到His融合表达载体 pET 2 8b(+)上后在大肠杆菌BL2 1(DE3)中得到了高效表达 .3PCX经Ni2 + NTA agarose柱纯化后免疫BALB/c小鼠 ,诱发了高水平的抗体免疫应答 . 展开更多
关键词 丙型肝炎 疫苗 表位抗原 免疫反应
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人工合成多表位抗原的研究进展 被引量:6
15
作者 张耀光 江莉 《国际医学寄生虫病杂志》 CAS 2010年第6期360-365,共6页
通过表位作图、表面展示及计算机预测等技术确定抗原表位的序列,再通过基因工程技术将多个表位串联起来形成多表位抗原。目前,有关多表位抗原的研究已取得长足进步,该文对特异性表位的选择和鉴定、多表位抗原基因的分子设计和合成等... 通过表位作图、表面展示及计算机预测等技术确定抗原表位的序列,再通过基因工程技术将多个表位串联起来形成多表位抗原。目前,有关多表位抗原的研究已取得长足进步,该文对特异性表位的选择和鉴定、多表位抗原基因的分子设计和合成等方面的研究进展进行了综述。 展开更多
关键词 表位抗原 分子设计 基因合成
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丙型肝炎病毒多表位抗原在小鼠与家兔中的免疫应答 被引量:5
16
作者 黄建生 彭春娴 +11 位作者 解咏梅 张潜 沈先荣 吉冬梅 SaidA.Saleh 贾福星 KazunariK.Yokoyama 许谆 郑维扬 兰和魁 郭明秋 任大明 《科学通报》 EI CAS CSCD 北大核心 1999年第23期2519-2524,共6页
在丙型肝炎病毒 (hepatitisCvirus,HCV)基因组中优选 5个具有良好免疫原性的高度保守T/B细胞表位 ,组合成一个HCV多表位抗原基因 ,并与β 半乳糖苷酶基因融合后在E .coli中高效表达了具有HCV免疫特异性的GZ PCX抗原 .纯化的蛋白质免疫... 在丙型肝炎病毒 (hepatitisCvirus,HCV)基因组中优选 5个具有良好免疫原性的高度保守T/B细胞表位 ,组合成一个HCV多表位抗原基因 ,并与β 半乳糖苷酶基因融合后在E .coli中高效表达了具有HCV免疫特异性的GZ PCX抗原 .纯化的蛋白质免疫小鼠与家兔后 ,诱发了高滴度 ( 10 -6)的抗 GZ PCXIgG ,并可在高水平上维持数月 .弗氏完全佐剂与死减毒鼠伤寒沙门氏菌均可发挥高效的佐剂效应 .用GZ PCX抗原及其表位多肽刺激后 ,可诱发较高水平的特异性CTL应答、迟发性超敏反应及淋巴细胞增殖 .在免疫小鼠的肠道灌洗液中可检测到抗 GZ PCXsIgG .免疫后小鼠未见明显的毒副反应 ,具有良好的安全性 ,可望发展一种针对不同型。 展开更多
关键词 表位抗原 疫苗 免疫应答 丙型肝炎病毒 防治
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HIV多表位核酸疫苗构建及其免疫原性 被引量:3
17
作者 李臻 金宁一 +5 位作者 金洪涛 沈国顺 付延军 辛苏文 韩贞珍 刘玉生 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2007年第3期178-180,共3页
目的设计新型HIV复合多表位疫苗,并检测其在小鼠体内的免疫效果。方法检索抗原表位数据库,进行新型HIV多表位核酸疫苗的设计,利用化学合成的方法合成多表位基因,并构建重组质粒pVAX1-MEGNp24,转染BHK-21细胞,间接免疫荧光法检测多表位... 目的设计新型HIV复合多表位疫苗,并检测其在小鼠体内的免疫效果。方法检索抗原表位数据库,进行新型HIV多表位核酸疫苗的设计,利用化学合成的方法合成多表位基因,并构建重组质粒pVAX1-MEGNp24,转染BHK-21细胞,间接免疫荧光法检测多表位基因的表达。重组质粒免疫BALB/c小鼠,ELISA法检测抗体动态变化,流式细胞仪检测脾T淋巴细胞亚类。结果重组质粒pVAX1-MEGNp24经酶切及测序分析,证明构建正确。间接免疫荧光显示能在BHK-21细胞中表达多表位基因。免疫小鼠可诱导小鼠特异性体液免疫和细胞免疫。结论已成功构建了重组质粒pVAX1-MEGNp24,小鼠免疫试验显示其具有良好的免疫原性。 展开更多
关键词 人免疫缺陷病毒 核酸疫苗 表位抗原
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结核分枝杆菌可视化抗体检测蛋白芯片的制备 被引量:4
18
作者 冯晓燕 陈坤 +6 位作者 李惠文 宋晓国 王国华 韦攀健 朱翠侠 张洪涛 张贺秋 《生物技术通讯》 CAS 2009年第1期50-54,共5页
目的:利用克隆表达的7种结核分枝杆菌优势表位抗原,建立可视化抗体检测蛋白芯片,用于结核病辅助诊断。方法:将7种结核分枝杆菌优势表位抗原,即38kD、ESAT-6、CFP10、MPT64、Mtb8、Mtb8.4和Mtb16.3点于修饰的基片上,制备可检测7种结核抗... 目的:利用克隆表达的7种结核分枝杆菌优势表位抗原,建立可视化抗体检测蛋白芯片,用于结核病辅助诊断。方法:将7种结核分枝杆菌优势表位抗原,即38kD、ESAT-6、CFP10、MPT64、Mtb8、Mtb8.4和Mtb16.3点于修饰的基片上,制备可检测7种结核抗体的多靶点蛋白微阵列,建立免疫金银染色检测系统;使用该芯片对48例临床结核病患者血液样品进行检测,并与"金标准"痰涂片(48例)和痰培养(其中的29例)检测结果进行比较,分析其敏感性;对30名献血员血液样品进行检测,分析其特异性。结果:可视化抗体检测蛋白芯片的敏感性分别为98.5%和96.6%,而痰涂片和痰培养检测方法的敏感性分别为35.4%和48.3%;可视化抗体检测蛋白芯片的特异性为93.3%。结论:建立的结核分枝杆菌可视化抗体检测蛋白芯片检测敏感性显著高于痰涂片和痰培养方法,可用于结核病的临床辅助诊断,提高痰涂片和痰培养假阴性的检出率。 展开更多
关键词 结核分枝杆菌 优势表位抗原 可视化抗体检测蛋白芯片
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乙型肝炎病毒多表位抗原DNA疫苗的免疫原性 被引量:5
19
作者 骆利敏 李明 +3 位作者 夏虎 陈百虹 王萍 郝文波 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第5期517-521,共5页
目的 :探讨HBV复合多表位DNA疫苗诱导体液及细胞免疫的可行性。方法 :将HBV多表位抗原基因BPT克隆到真核表达载体pcDNA3.1中 ,构建重组真核表达载体pcDNA3.1/BPT。将其通过肌肉注射免疫BALB/c小鼠 ,用间接免疫ELISA法、CTL杀伤功能检测... 目的 :探讨HBV复合多表位DNA疫苗诱导体液及细胞免疫的可行性。方法 :将HBV多表位抗原基因BPT克隆到真核表达载体pcDNA3.1中 ,构建重组真核表达载体pcDNA3.1/BPT。将其通过肌肉注射免疫BALB/c小鼠 ,用间接免疫ELISA法、CTL杀伤功能检测和淋巴细胞增殖试验 ,检测特异性体液免疫和细胞免疫的水平 ,并观察其对免疫小鼠的毒副作用。结果 :用重组质粒pcDNA3.1/BPT免疫BALB/c小鼠后 ,在效靶比为 10 0∶1时 ,可诱导显著地特异性CTL应答 (P <0 .0 5 )。ELISA检测免疫小鼠血清特异性IgG的水平明显升高 (P <0 .0 5 )。在BPT基因原核表达蛋白的刺激下 ,免疫小鼠脾淋巴细胞增殖显著 (P <0 .0 5 )。RT PCR分析表明 ,IL 12mRNA的水平亦明显升高。结论 :HBV多表位基因疫苗可诱发特异性免疫应答 ,为预防。 展开更多
关键词 乙型肝炎病毒 表位抗原 基因免疫 免疫应答
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治疗性HIV-1重组DNA疫苗的构建与免疫效果评价 被引量:2
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作者 宋英今 金宁一 +3 位作者 张立树 李子建 金洪涛 郎守民 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2005年第2期126-128,共3页
目的 构建编码HIV- 1多表位抗原基因 (MEG)与p2 4基因嵌合的核酸疫苗 ,并评价其免疫效果。方法 将编码HIV -1多表位抗原基因 (MEG)与p2 4基因插入到真核表达载体pVAXI中 ,构建HIV- 1治疗性重组核酸疫苗质粒。通过ELISA试剂盒检测免疫... 目的 构建编码HIV- 1多表位抗原基因 (MEG)与p2 4基因嵌合的核酸疫苗 ,并评价其免疫效果。方法 将编码HIV -1多表位抗原基因 (MEG)与p2 4基因插入到真核表达载体pVAXI中 ,构建HIV- 1治疗性重组核酸疫苗质粒。通过ELISA试剂盒检测免疫恒河猴血清中HIV -1特异性抗体 ,并通过淋巴细胞转化实验检测HIV -1特异性T淋巴细胞增殖反应。结果 构建的重组核酸疫苗质粒pVAXI -MEGp2 4免疫恒河猴后 ,能有效地刺激产生T淋巴细胞特异性增殖反应 ,并诱导产生抗HIV -1特异性抗体。结论 所构建的重组核酸疫苗质粒能诱导机体产生免疫反应。 展开更多
关键词 HIV-1 核酸疫苗质粒 治疗性 特异性抗体 MEG 恒河猴 表位抗原 原基 免疫效果 ELISA试剂盒
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