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转化生长因子β1通过Smad3调控补体应答基因32转录的分子机制 被引量：6
1
作者 沈云琳 钮小玲 +3 位作者 刘华杰 孙蕾 匡新宇 黄文彦 《肾脏病与透析肾移植杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第5期447-452,共6页
目的:前期工作发现补体应答基因32(RGC-32)是转化生长因子β(TGF-β)诱导的肾小管上皮细胞-间充质转化(EMT)过程中Smad信号下游的关键调控分子。本研究拟进一步明确TGF-β诱导肾小管EMT过程中RGC-32的转录调控机制。方法:体外培养NRK-52... 目的:前期工作发现补体应答基因32(RGC-32)是转化生长因子β(TGF-β)诱导的肾小管上皮细胞-间充质转化(EMT)过程中Smad信号下游的关键调控分子。本研究拟进一步明确TGF-β诱导肾小管EMT过程中RGC-32的转录调控机制。方法:体外培养NRK-52E细胞,利用荧光素酶报告基因实验检测RGC-32启动子活性以确定Smad结合元件(SBE)是否为TGF-β诱导的RGC-32转录调控位点;通过凝胶迁移率实验(EMSA)明确与之结合的转录调控分子。结果:(1)转染野生型SBE片段的NRK-52E细胞荧光素酶活性明显增高,而转染突变的SBE片段的细胞无此表现,表明SBE是调控TGF-β诱导的RGC-32转录启动的关键位点。(2)合成32P标记的包含SBE的寡核苷酸探针行EMSA可见TGF-β诱导的核蛋白与探针复合物生成,且加入包含SBE序列的竞争片段可以抑制此核蛋白-探针复合物的形成,表明有蛋白与SBE结合并调控RGC-32的转录。(3)当加入不同的Smad抗体行超迁移实验发现Smad2和Smad3抗体可以和复合物相互作用,表明Smad2和Smad3可能是TGF-β诱导的转录复合物的组成部分。(4)将Smad2和Smad3分别与p-1500RGCluc共同转染NRK-52E细胞,Smad3可以显著增加RGC-32启动子活性,表明Smad3是TGF-β诱导的转录复合物的组成部分,而不是Smad2。结论:在TGF-β诱导肾小管EMT过程中,Smad3通过与RGC-32启动子区SBE结合,从而调控肾小管EMT过程。 展开更多
关键词 补体应答基因32 上皮-间充质转化 转化生长因子Β 转录调控
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补体应答基因32在小鼠部分肝切除后肝再生过程中的表达及意义 被引量：1
2
作者 李兴元 杨艳芳 +4 位作者 陈琰 胡文慧 赵小英 唐俊明 孔德营 《临床肝胆病杂志》 CAS 北大核心 2023年第10期2396-2405,共10页
目的 探讨补体应答基因32(RGC32)在部分肝切除(PH)术后肝再生过程中的表达及作用。方法 42只10周龄雄性C57BL/6小鼠,随机分为对照组[切除小鼠完整的肝脏称重、拍照作为正常对照(sham组),进一步切除肝左叶和肝中叶后称重、拍照作为手术对... 目的 探讨补体应答基因32(RGC32)在部分肝切除(PH)术后肝再生过程中的表达及作用。方法 42只10周龄雄性C57BL/6小鼠,随机分为对照组[切除小鼠完整的肝脏称重、拍照作为正常对照(sham组),进一步切除肝左叶和肝中叶后称重、拍照作为手术对照(0 d组),sham组和0 d组共用一组小鼠]、术后1天组(1 d)、术后2天组(2 d)、术后4天组(4 d)、术后6天组(6 d)、术后8天组(8 d)和术后10天组(10 d),每组6只;PH术建模成功后分别于术后1、2、4、6、8、10天处死小鼠,收集小鼠肝脏,检测肝脏大小变化。HE和油红O染色评估肝组织形态学变化,血清ALT、AST检测评价肝功能变化,免疫组化染色检测增殖细胞核抗原(PCNA)和Ki67表达并分析肝再生过程中细胞增殖变化,实时荧光定量PCR和免疫组化染色技术检测肝再生过程中RGC32的表达及其亚细胞分布。Ed U细胞增殖实验分析L02细胞过表达或者敲除RGC32对肝细胞增殖的影响。计量资料多组间比较采用方差分析,进一步两两比较采用LSD-t检验;两组间比较采用成组t检验。相关性分析采用Pearson相关分析法。结果 PH术后肝脏逐渐增大,第0~6天为肝体比(肝脏质量/体质量)上升的高峰期,不同时间点比较差异均有统计学意义(P值均<0.05);第6~10天肝脏大小变化不明显。PH术后肝脏脂滴显著增多,随着肝再生,脂滴减少,且呈现门静脉区和中央静脉区差异化(P值均<0.05)。与sham组比较,PH术后1天,血清ALT、AST水平明显升高(P值均<0.05),随后分别于术后第6天和术后第2天恢复至sham组水平(P值均>0.05)。免疫组化染色结果显示,PH术后PCNA和Ki67阳性肝实质细胞数迅速增多,第2天数目最多,分别为86±5和89±5,随后逐渐减少;而PCNA和Ki67阳性非实质细胞数逐渐增多,第6天才达到高峰,分别为34±5和25±3,随后逐渐减少。PH术后总RGC32表达在第2天升到最高,随后逐渐降低,细胞质RGC32表达变化趋势与之一 展开更多
关键词 补体应答基因32 肝切除术 肝再生 小鼠 近交C57BL
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橙皮苷对IgA肾病大鼠免疫调节的作用研究 被引量：2
3
作者 陈明喆 李易 何伟 《西部中医药》 2017年第8期8-12,共5页
目的:探讨橙皮苷对IgA肾病大鼠肾脏组织中免疫调节蛋白转化生长因子β1(TGF-β_1)和补体应答基因32(RGC-32)表达的作用。方法:将60只雄性SD大鼠随机分为正常组,模型组及治疗组,每组20只,采用经典造模法构建IgA肾病大鼠模型,造模成功后,... 目的:探讨橙皮苷对IgA肾病大鼠肾脏组织中免疫调节蛋白转化生长因子β1(TGF-β_1)和补体应答基因32(RGC-32)表达的作用。方法:将60只雄性SD大鼠随机分为正常组,模型组及治疗组,每组20只,采用经典造模法构建IgA肾病大鼠模型,造模成功后,治疗组给予橙皮苷[10mg/(kg·d)]灌胃治疗,模型组和正常组给予相应量的生理盐水灌胃参照,分别于治疗4周和8周后,处死大鼠各半,观察大鼠血清肌酐、尿素氮、24小时蛋白尿以及血清中白介素2(IL-2)白介素6(IL-6)水平。HE染色观察其病理学改变,同时WesternBlot和RT-PCR测定肾脏组织TGF-β1和RGC-32基因表达。结果:造模成功后,模型组和治疗组有明显的肉眼或镜下血尿;与正常组大鼠相比,血肌酐(SCr)、血尿素氮(BUN)和24小时尿蛋白、IL-2以及IL-6均明显升高(P<0.05),橙皮苷治疗4周后,除SCr外,其他指标均明显降低(P<0.05),治疗8周后上述5个指标均明显降低(P<0.05);病理学检查显示正常组结构清晰,而模型组有明显的增生反应,橙皮苷治疗后对其有一定的改善。WesternBlot和RT-PCR结果显示与空白组相比,模型组TGF-β_1和RGC-32表达均明显升高,治疗后均降低(P<0.05)。结论:橙皮苷可通过降低IgA肾病大鼠血清中IL-2和IL-6含量,进而抑制肾脏组织中TGF-β_1和RGC-32的表达,最终改善大鼠症状。 展开更多
关键词 橙皮苷 Igh肾病大鼠 白介素6 转化生长因子反 补体应答基因32
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RGC32在肿瘤中的表达及其临床意义 被引量：1
4
作者 朱凤 徐文 +3 位作者 谢洋洋 周旋 吴泓波 张蕾 《医学与哲学（B）》 2015年第8期60-63,71,共5页
补体应答基因32(RGC32)作为一种重要的补体应答基因在多种正常组织及肿瘤中广泛表达,并发现其具有调控细胞周期、促进细胞分化、调节免疫等生物学功能。近年研究结果显示RGC32在不同肿瘤中的表达及作用具有差异性。在结直肠癌、胰腺癌... 补体应答基因32(RGC32)作为一种重要的补体应答基因在多种正常组织及肿瘤中广泛表达,并发现其具有调控细胞周期、促进细胞分化、调节免疫等生物学功能。近年研究结果显示RGC32在不同肿瘤中的表达及作用具有差异性。在结直肠癌、胰腺癌、非小细胞肺癌等多种肿瘤中RGC32具有正向调控作用,然而在神经胶质瘤和少数非小细胞肺癌中则可作为一种肿瘤抑制因子存在。鉴于RGC32在肿瘤中作用的复杂性,本文将对RGC32在不同肿瘤中的作用及可能机制进行综述,旨在为后来研究者提供研究方向。 展开更多
关键词 补体应答基因32 肿瘤 上皮间质转化 细胞增殖迁移 转化生长因子-Β
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RGC32在肿瘤中的研究进展 被引量：1
5
作者 禹乐(综述) 余英豪(审校) 《东南国防医药》 2020年第1期71-75,共5页
补体应答基因32(RGC32)是一种重要的补体应答基因,同时在细胞周期调控、促进组织细胞间质转化、免疫的调节、肿瘤的转移等过程中也起到关键作用。RGC32可在多种正常组织及肿瘤中广泛表达,其异常表达具有肿瘤相关性和组织差异性,如在结... 补体应答基因32(RGC32)是一种重要的补体应答基因,同时在细胞周期调控、促进组织细胞间质转化、免疫的调节、肿瘤的转移等过程中也起到关键作用。RGC32可在多种正常组织及肿瘤中广泛表达,其异常表达具有肿瘤相关性和组织差异性,如在结直肠癌、胰腺癌、乳腺癌、胃癌、卵巢癌等多种肿瘤中具有正向调控作用,在神经胶质瘤、多发性骨髓瘤中发挥反向的调节作用,在非小细胞肺癌中既可起到抑制作用又可起到促进作用。目前关于RGC32在肿瘤中的作用尚未形成统一的观点,文章就RGC32在肿瘤中的研究进行综述。 展开更多
关键词 补体应答基因32 肿瘤 细胞增殖分化 上皮间质转化转
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转录因子MZF1对大鼠RGC32基因启动活性的影响及可能的结合部位
6
作者 王璐璐 何风霞 +5 位作者 赵聃 虞天一 张婧 卢燕来 邱文 王迎伟 《南京医科大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2015年第2期143-148,共6页
目的 :构建大鼠补体应答基因32(response gene to complement,RGC32)启动子(全长和截短)荧光素酶报告质粒,并观察人胚肾细胞(HEK293)过表达髓锌指基因1(myeloid zinc finger gene1,MZF1)对大鼠RGC32基因启动活性的影响。同时,筛选其可能... 目的 :构建大鼠补体应答基因32(response gene to complement,RGC32)启动子(全长和截短)荧光素酶报告质粒,并观察人胚肾细胞(HEK293)过表达髓锌指基因1(myeloid zinc finger gene1,MZF1)对大鼠RGC32基因启动活性的影响。同时,筛选其可能的MZF1结合位点。方法:将RGC32基因启动子全长(-686^-1 nt)插入到荧光素酶报告基因载体p GL3-basic中,获得RGC32基因启动子全长荧光素酶报告质粒(p GL3-RGC32-FL)后,再将p GL3-RGC32-FL与本课题组前期构建的大鼠野生型MZF1表达质粒(p IRES2-EGFP-MZF1)共转染HEK293细胞,检测其荧光素酶活性,以确定MZF1对RGC32基因的启动作用。另用生物信息学软件预测RGC32基因启动子上转录因子MZF1潜在的结合位点,并据此构建3个RGC32基因启动子截短的荧光素酶报告质粒(即p GL3-RGC32-1、p GL3-RGC32-2和p GL3-RGC32-3)。将上述RGC32基因启动子全长和各截短的荧光素酶报告质粒与MZF1过表达质粒共转染HEK293细胞,再行荧光素酶活性测定,以筛选MZF1的结合位点。结果:菌液PCR及核酸测序证实,大鼠RGC32基因启动子(全长和各截短)的荧光素酶报告质粒均构建成功。将p GL3-RGC32-FL和p IRES2-EGFPMZF1共转染HEK293细胞发现,RGC32基因启动子活性显著增加。而将p GL3-RGC32-FL、p GL3-RGC32-1、p GL3-RGC32-2和p GL3-RGC32-3分别与p IRES2-EGFP-MZF1共转染HEK293细胞后显示,p GL3-RGC32-3的启动活性显著低于p GL3-RGC32-FL、p GL3-RGC32-1和p GL3-RGC32-2。提示MZF1可能结合在RGC32基因启动子的-286^-86 nt区域。结论 :成功构建了大鼠RGC32基因启动子全长及截短荧光素酶报告质粒,证实过表达MZF1可促进RGC32基因的启动,并初步筛查出转录因子MZF1在RGC32基因启动子上可能的结合区域。 展开更多
关键词 补体应答基因32 髓锌指基因1 荧光素酶报告质粒 启动子活性
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补体应答基因-32过表达对SW480细胞骨架的影响 被引量：4
7
作者 田杰 徐川 +1 位作者 杨敏慧 李祖国 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第7期1179-1182,共4页
目的通过基因重组技术构建pcDNA3.0-RGC32重组质粒,并检测其对细胞骨架的影响。方法扩增RGC32的全长并定向克隆到真核表达载体pcDNA3.0,获得重组质粒pcDNA3.0-RGC32,转染SW480细胞,采用G418筛选单克隆,Westernblot检测转染前后SW480细胞... 目的通过基因重组技术构建pcDNA3.0-RGC32重组质粒,并检测其对细胞骨架的影响。方法扩增RGC32的全长并定向克隆到真核表达载体pcDNA3.0,获得重组质粒pcDNA3.0-RGC32,转染SW480细胞,采用G418筛选单克隆,Westernblot检测转染前后SW480细胞中RGC32的表达水平,并制作转染前后SW480细胞骨架标本,并采用划痕实验观察细胞的迁移能力。结果 pcDNA3.0-RGC32真核表达载体构建成功,转染重组载体后细胞中RGC32的表达量明显增多。转染重组质粒前,SW480细胞骨架中微丝纤维束少而短、极性不明显;转染重组载体后的细胞微丝纤维束数量增多,变长,有了明显的极性,并且可见细胞膜向前伸出丝状结构的伪足或者是片状结构的伪足,细胞骨架发生了重组,并且过表达后细胞的迁移能力增强。结论通过过表达RGC32,促进细胞骨架重组,有利于细胞运动,推测细胞骨架重组是RGC32促进肿瘤转移的重要机制。 展开更多
关键词 补体应答基因-32 细胞骨架 转移 结直肠癌 迁移能力
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苦瓜总皂苷对IgA肾病大鼠免疫调节因子TGF-β_1表达影响 被引量：2
8
作者 陈明喆 李易 +1 位作者 陈伟 何伟 《辽宁中医药大学学报》 CAS 2017年第7期46-49,共4页
目的:研究苦瓜总皂苷对IgA肾病大鼠转化生长因子-β(Transforming growth factor-β,TGF-β)表达的影响。方法:随机选取48只雄性SD大鼠,所有大鼠均于适应性喂养1周后随机分为空白对照组、IgA肾病组以及苦瓜总皂苷治疗组,n=16,经典造模... 目的:研究苦瓜总皂苷对IgA肾病大鼠转化生长因子-β(Transforming growth factor-β,TGF-β)表达的影响。方法:随机选取48只雄性SD大鼠,所有大鼠均于适应性喂养1周后随机分为空白对照组、IgA肾病组以及苦瓜总皂苷治疗组,n=16,经典造模法造模成功后,治疗组给予苦瓜总皂苷20 mg/(kg·d)治疗,IgA肾病组和空白组给予等量生理盐水灌胃1 m L/(kg·d),分别在治疗4周和8后,每组处死一半大鼠,观察血清尿素氮、血肌酐、24 h蛋白尿和血清中白介素-2(IL-2)的白介素-6(IL-6)的含量,此外HE染色分析其病理学,Western Blot和RT-PCR检测TGF-β_1和RGC-32表达。结果:IgA肾病组和治疗组所有大鼠均造模成功,主要表现为有明显肉眼或镜下血尿;此外与空白组相比,IgA肾病组和治疗组血清中BUN、24 h尿蛋白、SCr、IL-2和IL-6明显升高(P<0.05),苦瓜总皂苷治疗4周后,上述指标均明显降低(P<0.05),治疗8周后进一步降低;病理学检查显示空白组纹理结构清晰,而IgA肾病组有明显增生反应,苦瓜总皂苷对其有一定的改善。Western Blot和RT-PCR结果显示与空白组相比,IgA肾病组肾脏组织中TGF-β_1表达明显降低(P<0.05),治疗8周后进一步降低,但其对RGC-32基本没有改善作用。结论:苦瓜总皂苷可通过降低肾脏组织中TGF-β_1的表达,进而有助于炎性因子和肾功能的改善,防止其疾病的进一步进展。 展开更多
关键词 苦瓜总皂苷 IGA肾病大鼠 白介素-6 转化生长因子-Β1 补体应答基因-32
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