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中国小麦花叶病毒CP和CRP蛋白的原核表达、抗血清制备及RNA2侵染性克隆构建
被引量：
3
1
作者
孔凡惠
脱建波
+5 位作者
魏娇
唐伟
李向东
迟胜起
田延平
于金凤
《山东农业科学》
2015年第8期6-10,共5页
中国小麦花叶病毒(Chinese wheat mosaic virus,CWMV)引起的小麦土传花叶病在山东烟台、威海等地危害严重。本研究克隆了CWMV烟台分离物的衣壳蛋白(Coat protein,CP)及富含半胱氨酸蛋白(Cysteine-rich protein,CRP)基因,并将其连接到原...
中国小麦花叶病毒(Chinese wheat mosaic virus,CWMV)引起的小麦土传花叶病在山东烟台、威海等地危害严重。本研究克隆了CWMV烟台分离物的衣壳蛋白(Coat protein,CP)及富含半胱氨酸蛋白(Cysteine-rich protein,CRP)基因,并将其连接到原核表达载体p EHISTEV,转化大肠杆菌Rosetta。经IPTG诱导,表达出分子量均为19 k D的CP和CRP。将二者从凝胶中切下,乳化后免疫新西兰大耳兔4次,获得了两种蛋白的多克隆抗体。ELISA检测表明,CWMV CP和CRP抗血清的效价分别为1∶4096和1∶2048。Western blot分析证明该抗血清只与感染CWMV的小麦有特异性反应,而与健康或感染小麦黄花叶病毒的小麦无反应。利用含T3启动子的引物通过RT-PCR扩增出CWMV RNA2全长片段,经T/A克隆连接到p MD18-T,获得质粒p MD18-T-CWMV-RNA2。该质粒经XbaⅠ线性化后,利用T3 RNA聚合酶进行体外转录,转录产物摩擦接种本氏烟,15℃培养3天后,利用Western blot可从接种叶片中检测到瞬时表达的CWMV CP蛋白。
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关键词
中国小麦花叶病毒
衣壳
蛋白
(
cp
)
富含半胱氨酸
蛋白
(CRP)
抗血清制备
侵染性克隆
下载PDF
职称材料
风疹病毒衣壳蛋白与宿主细胞相互作用蛋白的初步筛选及分析
2
作者
韩月雯
吴瑞
+1 位作者
马超锋
李园园
《病毒学报》
CAS
CSCD
北大核心
2021年第5期1074-1078,共5页
风疹病毒(Rubella virus,RV)的衣壳蛋白(Capsid protein,CP)不仅是病毒颗粒的重要组成部分,而且还可以通过与宿主蛋白之间的相互作用来调控病毒的转录和复制。为了系统研究衣壳蛋白与宿主蛋白之间的相互作用关系,我们从RV基因组中克隆...
风疹病毒(Rubella virus,RV)的衣壳蛋白(Capsid protein,CP)不仅是病毒颗粒的重要组成部分,而且还可以通过与宿主蛋白之间的相互作用来调控病毒的转录和复制。为了系统研究衣壳蛋白与宿主蛋白之间的相互作用关系,我们从RV基因组中克隆获得衣壳蛋白基因序列,将该序列导入含有eXact⁃6His串联亲和纯化标签的慢病毒表达载体中,并构建了稳定表达eXact⁃6His⁃Capsid融合蛋白的293T细胞系。通过eXact和6His标签的两次亲和纯化获得衣壳蛋白相互作用蛋白复合物,质谱检测并筛选后发现22个可能与衣壳蛋白相互作用的宿主蛋白。随后构建衣壳蛋白的相互作用网络并进行功能学分析,发现其相互作用蛋白主要参与病毒感染、RNA剪切、细胞凋亡及酶相关通路等过程。
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关键词
风疹病毒(RV)
衣壳
蛋白
(
cp
)
相互作用
蛋白
串联亲和纯化
质谱
功能分析
原文传递
题名
中国小麦花叶病毒CP和CRP蛋白的原核表达、抗血清制备及RNA2侵染性克隆构建
被引量：
3
1
作者
孔凡惠
脱建波
魏娇
唐伟
李向东
迟胜起
田延平
于金凤
机构
山东农业大学植物保护学院植物病理学系
青岛农业大学农学与植物保护学院
出处
《山东农业科学》
2015年第8期6-10,共5页
基金
国家公益性行业(农业)科研项目(201303021)
山东省现代农业产业技术体系(SDAIT-01-022-09)
文摘
中国小麦花叶病毒(Chinese wheat mosaic virus,CWMV)引起的小麦土传花叶病在山东烟台、威海等地危害严重。本研究克隆了CWMV烟台分离物的衣壳蛋白(Coat protein,CP)及富含半胱氨酸蛋白(Cysteine-rich protein,CRP)基因,并将其连接到原核表达载体p EHISTEV,转化大肠杆菌Rosetta。经IPTG诱导,表达出分子量均为19 k D的CP和CRP。将二者从凝胶中切下,乳化后免疫新西兰大耳兔4次,获得了两种蛋白的多克隆抗体。ELISA检测表明,CWMV CP和CRP抗血清的效价分别为1∶4096和1∶2048。Western blot分析证明该抗血清只与感染CWMV的小麦有特异性反应,而与健康或感染小麦黄花叶病毒的小麦无反应。利用含T3启动子的引物通过RT-PCR扩增出CWMV RNA2全长片段,经T/A克隆连接到p MD18-T,获得质粒p MD18-T-CWMV-RNA2。该质粒经XbaⅠ线性化后,利用T3 RNA聚合酶进行体外转录,转录产物摩擦接种本氏烟,15℃培养3天后,利用Western blot可从接种叶片中检测到瞬时表达的CWMV CP蛋白。
关键词
中国小麦花叶病毒
衣壳
蛋白
(
cp
)
富含半胱氨酸
蛋白
(CRP)
抗血清制备
侵染性克隆
Keywords
Chinese wheat mosaic virus（CWMV）
Coat protein（
cp
）
Cysteine-rich protein（CRP）
Antiserum preparation
Infectious clone
分类号
S188 [农业科学—农业基础科学]
S435.121.4
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职称材料
题名
风疹病毒衣壳蛋白与宿主细胞相互作用蛋白的初步筛选及分析
2
作者
韩月雯
吴瑞
马超锋
李园园
机构
西安市疾病预防控制中心病毒病检验科
联勤保障部队大连康复疗养中心
出处
《病毒学报》
CAS
CSCD
北大核心
2021年第5期1074-1078,共5页
基金
陕西省自然科学基础研究计划面上项目(项目号:2017JM8101),题目:风疹病毒蛋白与宿主蛋白相互作用关系及功能学研究。
文摘
风疹病毒(Rubella virus,RV)的衣壳蛋白(Capsid protein,CP)不仅是病毒颗粒的重要组成部分,而且还可以通过与宿主蛋白之间的相互作用来调控病毒的转录和复制。为了系统研究衣壳蛋白与宿主蛋白之间的相互作用关系,我们从RV基因组中克隆获得衣壳蛋白基因序列,将该序列导入含有eXact⁃6His串联亲和纯化标签的慢病毒表达载体中,并构建了稳定表达eXact⁃6His⁃Capsid融合蛋白的293T细胞系。通过eXact和6His标签的两次亲和纯化获得衣壳蛋白相互作用蛋白复合物,质谱检测并筛选后发现22个可能与衣壳蛋白相互作用的宿主蛋白。随后构建衣壳蛋白的相互作用网络并进行功能学分析,发现其相互作用蛋白主要参与病毒感染、RNA剪切、细胞凋亡及酶相关通路等过程。
关键词
风疹病毒(RV)
衣壳
蛋白
(
cp
)
相互作用
蛋白
串联亲和纯化
质谱
功能分析
Keywords
Rubella virus
Capsid protein
Interacting protein
Tandem affinity purification
Mass spectrometry
Functional analysis
分类号
R34 [医药卫生—基础医学]
原文传递
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
中国小麦花叶病毒CP和CRP蛋白的原核表达、抗血清制备及RNA2侵染性克隆构建
孔凡惠
脱建波
魏娇
唐伟
李向东
迟胜起
田延平
于金凤
《山东农业科学》
2015
3
下载PDF
职称材料
2
风疹病毒衣壳蛋白与宿主细胞相互作用蛋白的初步筛选及分析
韩月雯
吴瑞
马超锋
李园园
《病毒学报》
CAS
CSCD
北大核心
2021
0
原文传递
已选择
0
条
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参考文献
引证文献
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