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人血红素氧化酶-1基因pShuttle-CMV穿梭载体在Caco-2细胞株的表达及意义 被引量：2
1
作者 刘玉林 陈广响 +3 位作者 武继红 郭晓波 崔彬 张黎 《中华实验外科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第11期2318-2320,共3页
目的 构建血红素氧化酶-1（HO-1）基因的真核过表达载体,观察转染人结肠癌细胞株Caco-2细胞后对其生长的影响和细胞定位.方法 构建人pShuttle-CMV-HO1载体,经测序、酶切鉴定正确后,采用脂质体转染法将载体转入Caco-2细胞中,经G418筛选... 目的 构建血红素氧化酶-1（HO-1）基因的真核过表达载体,观察转染人结肠癌细胞株Caco-2细胞后对其生长的影响和细胞定位.方法 构建人pShuttle-CMV-HO1载体,经测序、酶切鉴定正确后,采用脂质体转染法将载体转入Caco-2细胞中,经G418筛选并建立稳定过表达Caco-2细胞HO-1基因的细胞株.实验分为2组,分别为实验组（Caco-2-pS/HO-1）、对照组（Caco-2-pS）,每组设3个复孔,应用荧光定量聚合酶链反应（FQ-PCR）法和Western blot法分别检测HO-1 mRNA和蛋白的表达水平；通过免疫荧光法观察HO-1分子在细胞内的分布；采用细胞计数试剂盒（CCK-8）法检测HO-1基因过表达后对Caco-2细胞的增殖影响.结果 酶切及测序显示pShuttle-CMV-HO1载体构建符合预期.与Caco-2-pS组比较,Caco-2-pS/HO-1组细胞HO-1基因mRNA表达明显增加（63.55±0.86比3.66±0.36,P＜0.05）,HO-1蛋白表达呈现相同趋势；对转染目的载体的细胞应用m-CY3标记的抗体进行免疫荧光实验,激光共聚焦显微镜观察到HO-1分子主要分布于细胞质与细胞膜；Caco-2-pS/HO-1组较Caco-2-pS组细胞增殖数量明显增加[（5.43±0.24）个比（3.25±0.25）个,P＜0.05].结论 成功构建HO-1基因真核过表达载体,HO-1蛋白主要表达于细胞膜及细胞质中,HO-1蛋白异常表达可以促进Caco-2细胞增殖,从而对体外肠黏膜屏障模型起到保护作用. 展开更多
关键词 血红素氧化酶-1基因 CACO-2细胞 过表达载体 肠黏膜屏障
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转染血红素氧化酶-1基因大鼠肝细胞系BRL体外抗凋亡作用
2
作者 陈国勇 曲青山 +1 位作者 孙建军 钱建民 《郑州大学学报（医学版）》 CAS 北大核心 2006年第4期713-715,共3页
目的:探讨血红素氧化酶1(hemeoxygenase,HO1)基因转染对大鼠肝细胞系BRL的抗凋亡作用。方法:体外培养的BRL细胞转染HO1基因后(对照组采用转染空载体pcDNA3的BRL细胞),应用RTPCR检测肝细胞系BRL中HO1基因的表达。用肿瘤坏死因子α(TNFα... 目的:探讨血红素氧化酶1(hemeoxygenase,HO1)基因转染对大鼠肝细胞系BRL的抗凋亡作用。方法:体外培养的BRL细胞转染HO1基因后(对照组采用转染空载体pcDNA3的BRL细胞),应用RTPCR检测肝细胞系BRL中HO1基因的表达。用肿瘤坏死因子α(TNFα)刺激细胞,采用流式细胞仪(FACS)进行细胞计数,TUNEL染色等方法检测细胞的凋亡情况。结果:转染的肝细胞系BRL中均有HO1mRNA表达。转染HO1的BRL细胞经TNFα诱导凋亡后,细胞凋亡率(55.42%±3.12%)明显低于同等刺激下转染pcDNA3的BRL细胞(81.29%±3.08%)(P<0.05)。结论:BRL肝细胞系中HO1表现出较强的抗凋亡能力,为以细胞凋亡为主要病理表现的肝脏缺血再灌注损伤的临床治疗提供了新思路。 展开更多
关键词 血红素氧化酶-1基因 凋亡 肿瘤坏死因子 转染 大鼠
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HO-1基因的亚克隆及策略
3
作者 肖茂磊 蔡文琴 李成仁 《华夏医学》 2001年第1期4-6,共3页
目的 :为了获得血红素氧化酶 - 1基因的 c DNA片段表达载体。方法 :从正常鼠脾细胞提总 RNA进行 RT- PCR、分子克隆 ,并进行自动测序。结果 :分离并鉴定了该 c DNA重组子 ,成功的将血红素氧化酶 - 1基因亚克隆到 pc DNA3.1真核表达载体... 目的 :为了获得血红素氧化酶 - 1基因的 c DNA片段表达载体。方法 :从正常鼠脾细胞提总 RNA进行 RT- PCR、分子克隆 ,并进行自动测序。结果 :分离并鉴定了该 c DNA重组子 ,成功的将血红素氧化酶 - 1基因亚克隆到 pc DNA3.1真核表达载体上。结论 :建立了一个编码血红素氧化酶 - 1基因 c DNA重组子 (76 2 bp)的真核表达载体。 展开更多
关键词 血红素氧化酶-1基因 RT-PCR 分子克隆
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