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白纹伊蚊蜕皮激素拮抗剂筛选酵母模型的建立
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作者 顾金保 孙彦涛 彭鸿娟 《中国寄生虫学与寄生虫病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第5期376-380,共5页
目的在毕赤酵母体内构建白纹伊蚊蜕皮激素转录活化系统,建立高通量杀虫剂筛选模型,用于筛选蜕皮激素代谢途径拮抗药物。方法人工合成果蝇蜕皮激素响应元件(EcRE)5次重复的序列,与果蝇热激蛋白基因启动子(pHSP27)序列连接,以绿色荧光蛋白... 目的在毕赤酵母体内构建白纹伊蚊蜕皮激素转录活化系统,建立高通量杀虫剂筛选模型,用于筛选蜕皮激素代谢途径拮抗药物。方法人工合成果蝇蜕皮激素响应元件(EcRE)5次重复的序列,与果蝇热激蛋白基因启动子(pHSP27)序列连接,以绿色荧光蛋白(GFP)报告基因,将EcRE-pHSP27-GFP片段亚克隆入pPIC3.5k,整合入毕赤酵母染色体构建阴性酵母A。人工合成白纹伊蚊蜕皮激素受体(EcR)及超螺旋蛋白(USP)编码序列,两个基因以双表达盒形式亚克隆入组成型表达质粒pGAPZ,整合入酵母染色体的另一位点,使EcR与USP在酵母中组成型表达,构建模型酵母B。制备蜕皮激素拮抗剂虫酰肼悬液(浓度为0.83mg/ml),分别施加于模型酵母B与阴性酵母A,荧光显微镜下目测荧光强度,与未施加药物的对照组比较。同时提取各组RNA,半定量RT-PCR检验GFP基因的转录效率。结果模型酵母B发出绿色荧光,而阴性酵母A与空白酵母GS115未见荧光,表明在模型酵母体内表达的EcR与USP形成复合二聚体,作用于EcRE启动GFP报告基因表达荧光蛋白。施用虫酰肼,模型酵母B荧光强度明显减弱,表明GFP的表达量减少。施用虫酰肼的模型酵母B,GFP与内参灰度比值(为0.614)低于对照组(1.134),表明虫酰肼可降低模型酵母B体内GFP基因的转录水平。结论在酵母体内建立了白纹伊蚊蜕皮激素转录活化系统,该酵母模型可用于筛选作用于蜕皮激素代谢途径的药物。 展开更多
关键词 白纹伊蚊 蜕皮激素受体 超螺旋蛋白 蜕皮激素受体响应元件 虫酰肼 蜕皮激素拮抗物
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