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蛋白4.1R对肝细胞HL-7702增殖、凋亡以及糖酵解的影响
1
作者 郑孟冬 刘妍 +2 位作者 刘娇娇 康巧珍 王婷 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第7期1355-1360,共6页
目的探究蛋白4.1R对肝细胞增殖、凋亡以及糖酵解的影响,并初步阐明其分子机制。方法以肝细胞株HL-7702为材料,利用CRISPR/Cas9技术构建4.1R^(-/-)HL-7702细胞株。设置对照组为正常培养的4.1R+/+HL-7702细胞,实验组为4.1R^(-/-)HL-7702... 目的探究蛋白4.1R对肝细胞增殖、凋亡以及糖酵解的影响,并初步阐明其分子机制。方法以肝细胞株HL-7702为材料,利用CRISPR/Cas9技术构建4.1R^(-/-)HL-7702细胞株。设置对照组为正常培养的4.1R+/+HL-7702细胞,实验组为4.1R^(-/-)HL-7702细胞。细胞在培养24、48以及72 h时,分别用CCK-8及EdU-488染色,然后利用酶标仪以及流式细胞术检测细胞的增殖能力。细胞经Annexin V-FITC/PI染色后,流式细胞术检测HL-7702细胞在培养24、48以及72 h时的凋亡水平。利用生化试剂盒分别检测HL-7702细胞葡萄糖摄取量、乳酸分泌量以及ATP生成的变化。pH计检测培养48 h HL-7702细胞上清培养基的pH值。qRT-PCR检测HL-7702细胞糖酵解过程关键调节酶HK2、PFKL、PKM2以及LDHA的mRNA表达量。Western blotting检测AMPK、p-AMPK、Raptor以及p-Raptor的蛋白表达量。结果Western blotting以及基因测序结果表明4.1R^(-/-)HL-7702细胞株构建成功。与对照组相比,4.1R^(-/-)组的CCK-8和EdU-488实验结果均显示HL-7702细胞的增殖能力降低;细胞凋亡实验结果表明,4.1R^(-/-)HL-7702细胞凋亡水平升高。蛋白4.1R的缺失导致HL-7702细胞葡萄糖摄取量(P<0.05)、乳酸分泌量(P<0.001)、ATP生成(P<0.001)下降,细胞上清培养基pH值(P<0.01)升高。qRT-PCR实验结果表明糖酵解过程关键调节酶的mRNA表达量均下降(P<0.001)。相较于HL-7702细胞,4.1R^(-/-)HL-7702细胞的AMPK和Raptor蛋白表达量下降,p-AMPK和p-Raptor蛋白表达量升高。结论蛋白4.1R的缺失导致HL-7702细胞增殖能力降低、凋亡水平增加,糖酵解过程被抑制,其调控机制与下游AMPK-mTORC1信号通路的激活密切相关。 展开更多
关键词 蛋白4.1r 肝细胞 增殖与凋亡 糖酵解
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蛋白4.1R基因敲除小鼠的引种及繁殖 被引量：1
2
作者 周晴晴 闫红霞 +7 位作者 孙蕾 刘喜龙 李黎 汲翔 高艳锋 汲振余 祁元明 康巧珍 《郑州大学学报（医学版）》 CAS 北大核心 2011年第2期179-182,共4页
目的:引种、繁殖4.1R基因敲除小鼠,用于蛋白4.1R功能的研究。方法:按照国家进出境动物检验检疫的具体要求,对引种自美国的3对4.1R基因敲除小鼠进行隔离、检疫。引进的种鼠按照SPF动物饲养标准操作规程在IVC屏障系统中进行1雄1雌长期同... 目的:引种、繁殖4.1R基因敲除小鼠,用于蛋白4.1R功能的研究。方法:按照国家进出境动物检验检疫的具体要求,对引种自美国的3对4.1R基因敲除小鼠进行隔离、检疫。引进的种鼠按照SPF动物饲养标准操作规程在IVC屏障系统中进行1雄1雌长期同居方式繁殖,C57BL/6J对照组小鼠采用同样方式饲养繁殖。定期观察记录种鼠的繁殖率、仔鼠出生率及成活率。比较基因敲除小鼠与野生型小鼠体质量变化。提取仔鼠尾组织基因组DNA,用PCR法进行基因型鉴定。结果:经隔离检疫,3对4.1R敲除小鼠符合我国SPF小鼠的微生物控制级别。23只繁殖仔鼠基因型PCR鉴定结果为基因敲除纯合子,雌鼠产仔率100%,平均胎产仔5.8只,仔鼠成活率74%。基因敲除小鼠平均体质量与野生型小鼠比较差异无统计学意义(F组间=4.035,P=0.056;F时间=543.723,P<0.001;F交互=4.358,P=0.004)。结论:在国内成功引种和繁殖C57BL/6J-4.1R-/-小鼠。 展开更多
关键词 基因敲除小鼠 蛋白4.1r
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宿主细胞膜骨架蛋白在病毒感染复制中作用的研究进展
3
作者 苏珊 刘鑫 +1 位作者 康巧珍 郑永唐 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第5期1227-1233,共7页
病毒与宿主细胞之间相互关系的研究不仅具有重要的理论意义,也是重大的医学实践课题。病毒可以与宿主蛋白相互作用并改变细胞的正常功能,从而促进病毒的感染与复制。宿主细胞膜骨架蛋白在病毒的生命周期中起着重要作用,研究表明细胞膜... 病毒与宿主细胞之间相互关系的研究不仅具有重要的理论意义,也是重大的医学实践课题。病毒可以与宿主蛋白相互作用并改变细胞的正常功能,从而促进病毒的感染与复制。宿主细胞膜骨架蛋白在病毒的生命周期中起着重要作用,研究表明细胞膜骨架蛋白参与了病毒的感染及复制,尽管许多精细机制尚不清楚,但这扩展了人们对细胞膜骨架蛋白功能的理解。本文重点介绍宿主细胞膜骨架蛋白如肌动蛋白、血影蛋白在病毒进入、细胞内运输、组装和释放等病毒感染复制过程中的作用。 展开更多
关键词 病毒 膜骨架蛋白 肌动蛋白 血影蛋白 蛋白4.1r
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重症肌无力伴胸腺瘤患者胸腺组织蛋白4.1R mRNA的表达研究
4
作者 朱利伟 高峰 +3 位作者 方华 崔新征 杨鲲鹏 张清勇 《中国实用神经疾病杂志》 2010年第7期6-8,共3页
目的探讨蛋白4.1R在重症肌无力(myasthenia gravis,MG)伴胸腺瘤患者胸腺组织中的表达情况。方法运用半定量RT-PCR方法检测7例胸腺瘤MG与7例正常对照组胸腺组织中蛋白4.1R的表达。结果胸腺瘤MG组胸腺组织中蛋白4.1R mRNA的相对表达水平为... 目的探讨蛋白4.1R在重症肌无力(myasthenia gravis,MG)伴胸腺瘤患者胸腺组织中的表达情况。方法运用半定量RT-PCR方法检测7例胸腺瘤MG与7例正常对照组胸腺组织中蛋白4.1R的表达。结果胸腺瘤MG组胸腺组织中蛋白4.1R mRNA的相对表达水平为0.84±0.46,与对照组0.43±3.69相比明显增高,差异有统计学意义(P<0.05)。结论蛋白4.1R在胸腺瘤MG患者胸腺组织中mRNA水平表达异常,可能干扰胸腺细胞的信号传导,从而影响胸腺细胞的增殖和活化,参与了MG的发生。 展开更多
关键词 重症肌无力 蛋白4.1r rT-PCr 胸腺瘤
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细胞膜骨架蛋白4.1R对光动力效应的影响
5
作者 范丹丹 李懿 +8 位作者 李建辉 宁姝威 禹丽娜 张立果 范天黎 杨小静 裘一兵 康巧珍 汲振余 《中华医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2014年第48期3848-3853,共6页
目的 探讨细胞膜骨架蛋白4.1R对光动力效应的影响.方法 将4.1R基因敲除型（4.1R-/-）和野生型（4.1R＋/＋）小鼠胚胎成纤维细胞（MEF）分别以0.25、0.50、1.00、1.50、2.00mmol/L浓度的5-氨基乙酰丙酸（5-ALA）孵育,72、96、120、180、2... 目的 探讨细胞膜骨架蛋白4.1R对光动力效应的影响.方法 将4.1R基因敲除型（4.1R-/-）和野生型（4.1R＋/＋）小鼠胚胎成纤维细胞（MEF）分别以0.25、0.50、1.00、1.50、2.00mmol/L浓度的5-氨基乙酰丙酸（5-ALA）孵育,72、96、120、180、240mJ/cm2剂量的450 nm蓝光照射进行光动力处理,细胞增殖检测试剂盒（CCK-8）检测细胞存活率;经不同浓度5-ALA孵育的细胞,以荧光分光光度法检测胞内光敏剂原卟啉的荧光强度;以1.00 mmol/L的5-ALA孵育细胞后激光共聚焦显微镜观察胞内产生的原卟啉在细胞中的定位;Western印迹法检测原卟啉合成限速酶亚铁螯合酶（FECH）与胆色素原脱氨基酶（HMBS）蛋白表达水平.结果 5-ALA光动力处理均能杀伤两种细胞,其杀伤作用与5-ALA的浓度、孵育时间及光照射剂量相关,但两者PDT杀伤效果不同.当1.00mmol/L的5-ALA孵育4.0h且光照射剂量为120mJ/cm2时,4.1R-/-MEF存活率显著高于4.1R＋/＋MEF[（46.9±7.1）％比（12.5±2.1）％,P＜0.001].5-ALA孵育细胞后产生的原卟啉分布于整个胞质中,但两种细胞中原卟啉的浓度不同,在1.00 mmol/L的5-ALA孵育4.0h时,4.1R＋/＋MEF内原卟啉荧光值显著高于4.1R-/-MEF（124.2±3.5比34.6 ±3.8,P＜0.001）.Western印迹结果表明FECH与HMBS在两种细胞中的表达水平差异无统计学意义.结论 蛋白4.1R的缺失造成细胞内原卟啉合成量降低,PDT效果下降,但并未影响ALA代谢过程,推测蛋白4.1R影响了5-ALA的跨膜转运,进而影响细胞内原卟啉的合成,最终影响了PDT杀伤效应. 展开更多
关键词 膜骨架蛋白4.1r 光化学疗法 成纤维细胞 胚胎 小鼠
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