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草苷膦抗性新基因的克隆、序列分析及其蛋白高级结构预测
被引量:
6
1
作者
刘光全
刘柱
+6 位作者
陆伟
徐玉泉
梁爱敏
平淑珍
张维
陈明
林敏
《中国生物化学与分子生物学报》
CAS
CSCD
北大核心
2006年第3期197-203,共7页
利用错误倾向PCR(error-prone PCR)突变技术,以可变盐单胞菌(Halomonas variabilis)HTG7的5-烯醇丙酮莽草酸-3-磷酸(EPSP)合酶基因为模板进行随机PCR扩增,得到目的基因片段(约1·35kb).将该基因片段与pACYC184载体连接后转化EPSP合...
利用错误倾向PCR(error-prone PCR)突变技术,以可变盐单胞菌(Halomonas variabilis)HTG7的5-烯醇丙酮莽草酸-3-磷酸(EPSP)合酶基因为模板进行随机PCR扩增,得到目的基因片段(约1·35kb).将该基因片段与pACYC184载体连接后转化EPSP合酶缺陷型菌株大肠杆菌ER2799.利用功能互补筛选法得到了2株不具有草苷膦抗性的EPSP合酶阳性克隆突变株,记为Pmu1和Pmu2.序列分析表明,突变体Pum1的EPSP合酶编码区与突变前基因相比,核苷酸有2处发生突变,导致氨基酸残基1处发生了改变;突变体Pmu2的EPSP合酶编码区与突变前基因相比,核苷酸有5处发生突变,导致氨基酸残基2处发生了改变.对突变前后EPSP合酶进行比较预测发现,其三级结构及蛋白中心骨架是大致相同的,但突变前后氨基酸位点肽平面和Cα相连的N键之间形成的扭转角度存在一定的差别.这些结果表明,酶的功能主要由蛋白的构象决定,二肽链形成后肽平面和N键之间角度的变化,造成高级结构构象细微的差别,致使草苷膦抗性功能丢失.
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关键词
EPSP合酶新基因
错误倾向PCR
草苷膦抗性
蛋白
高级
结构
预测
扭转角
蛋白
中心骨架
比较
预测
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职称材料
题名
草苷膦抗性新基因的克隆、序列分析及其蛋白高级结构预测
被引量:
6
1
作者
刘光全
刘柱
陆伟
徐玉泉
梁爱敏
平淑珍
张维
陈明
林敏
机构
中国农业科学院生物技术研究所
出处
《中国生物化学与分子生物学报》
CAS
CSCD
北大核心
2006年第3期197-203,共7页
基金
国家高技术研究发展计划(863计划)资助项目(No.2001AA214231)~~
文摘
利用错误倾向PCR(error-prone PCR)突变技术,以可变盐单胞菌(Halomonas variabilis)HTG7的5-烯醇丙酮莽草酸-3-磷酸(EPSP)合酶基因为模板进行随机PCR扩增,得到目的基因片段(约1·35kb).将该基因片段与pACYC184载体连接后转化EPSP合酶缺陷型菌株大肠杆菌ER2799.利用功能互补筛选法得到了2株不具有草苷膦抗性的EPSP合酶阳性克隆突变株,记为Pmu1和Pmu2.序列分析表明,突变体Pum1的EPSP合酶编码区与突变前基因相比,核苷酸有2处发生突变,导致氨基酸残基1处发生了改变;突变体Pmu2的EPSP合酶编码区与突变前基因相比,核苷酸有5处发生突变,导致氨基酸残基2处发生了改变.对突变前后EPSP合酶进行比较预测发现,其三级结构及蛋白中心骨架是大致相同的,但突变前后氨基酸位点肽平面和Cα相连的N键之间形成的扭转角度存在一定的差别.这些结果表明,酶的功能主要由蛋白的构象决定,二肽链形成后肽平面和N键之间角度的变化,造成高级结构构象细微的差别,致使草苷膦抗性功能丢失.
关键词
EPSP合酶新基因
错误倾向PCR
草苷膦抗性
蛋白
高级
结构
预测
扭转角
蛋白
中心骨架
比较
预测
Keywords
5-enolpyruvyl-shikimate-3-phosphate ( EPSP ) synthase encoding gene
error-prone PCR
glyphosate- tolerance
torsion angle
protein tertiary structure
align backbone mode
分类号
Q78 [生物学—分子生物学]
Q5
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题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
草苷膦抗性新基因的克隆、序列分析及其蛋白高级结构预测
刘光全
刘柱
陆伟
徐玉泉
梁爱敏
平淑珍
张维
陈明
林敏
《中国生物化学与分子生物学报》
CAS
CSCD
北大核心
2006
6
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