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枸杞组织培养中过氧化物酶和可溶性蛋白质的变化 被引量:40
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作者 王亚馥 王仑山 +2 位作者 陆卫 逯斌 安黎哲 《实验生物学报》 CSCD 1989年第1期1-7,共7页
枸杞(Lycium barbarum L.)叶组织切块接种在附加6-BA 0.5毫克/升和NAA 0.5毫克/升的MS固体培养基上可大量诱导产生愈伤组??织,培养至30天分化出芽,到50天长成小苗。过氧化物酶活性和可溶性蛋白质的含量分别在大量分生细胞团形成和芽形... 枸杞(Lycium barbarum L.)叶组织切块接种在附加6-BA 0.5毫克/升和NAA 0.5毫克/升的MS固体培养基上可大量诱导产生愈伤组??织,培养至30天分化出芽,到50天长成小苗。过氧化物酶活性和可溶性蛋白质的含量分别在大量分生细胞团形成和芽形成时出现两个峰值,酸性蛋白质的种类也在这两个时期迅速增加。过氧化物酶同工酶阳极端出现的四条酶带中,A_2、A_3较稳定,A_1、A_4则在不同发育时期呈现规律性的变化。 展开更多
关键词 枸杞 组织培养 蛋白培养 蛋白
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Ⅰ、Ⅱ型胶原蛋白对人软骨细胞生物学特性的影响 被引量:17
2
作者 蒋萍 蔚芃 +2 位作者 赵明才 陈琼 王梓 《中国组织工程研究》 CAS CSCD 2014年第30期4845-4850,共6页
背景:实验证明胶原蛋白底物具有刺激成软骨的作用,但关于不同类型胶原蛋白刺激成软骨作用的能力仍存在争议。目的:观察Ⅰ、Ⅱ型胶原蛋白对体外培养人软骨细胞生物学特性的影响。方法:将P3代人软骨细胞分别加入普通培养板、Ⅰ型胶原蛋白... 背景:实验证明胶原蛋白底物具有刺激成软骨的作用,但关于不同类型胶原蛋白刺激成软骨作用的能力仍存在争议。目的:观察Ⅰ、Ⅱ型胶原蛋白对体外培养人软骨细胞生物学特性的影响。方法:将P3代人软骨细胞分别加入普通培养板、Ⅰ型胶原蛋白包被培养板、Ⅱ型胶原蛋白包被培养板继续培养。培养10 d内,MTT法绘制细胞生长曲线;培养28 d后,采用ELISA法、聚合酶链反应、二甲基亚甲基蓝比色等方法检测3种培养板中软骨细胞分泌Ⅰ胶原蛋白、Ⅱ型胶原蛋白及糖胺多糖的量。结果与结论:Ⅱ型胶原蛋白包被培养板中软骨细胞数量最多,增殖速度为Ⅰ型胶原蛋白包被培养板的2倍、普通培养板的5倍。Ⅱ型胶原蛋白包被培养板中软骨细胞分泌Ⅰ型胶原蛋白最少,与普通培养板板检测结果差异有显著性意义(P<0.01),与Ⅰ型胶原蛋白包被培养板检测结果差异无显著性意义;Ⅱ型胶原蛋白包被培养板中软骨细胞分泌Ⅱ型胶原蛋白、糖胺多糖最多,与其他两种培养板检测结果差异有显著性意义(P<0.01)。表明胶原蛋白包被培养板培养软骨细胞优于普通培养板,其中Ⅱ型胶原蛋白包被培养板在培养软骨细胞时更能维持细胞形态,延长去分化现象出现的时间,更利于细胞再分化。 展开更多
关键词 生物材料 软骨生物材料 Ⅰ型胶原蛋白培养 Ⅱ型胶原蛋白培养 人软骨细胞 体外培养
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表达单克隆抗体的CHO细胞无蛋白培养基的优化 被引量:10
3
作者 刘国庆 陈飞 +2 位作者 赵亮 范里 谭文松 《高校化学工程学报》 EI CAS CSCD 北大核心 2013年第1期96-101,共6页
在自主研发无蛋白培养基的基础上,考察了氨基酸、维生素和葡萄糖对CHO细胞生长、代谢与抗体合成的影响。结果表明,对培养过程中消耗较多的氨基酸进行补充,虽然不能促进细胞生长,但有利于培养后期细胞活性维持与抗体合成;B族维生素的添... 在自主研发无蛋白培养基的基础上,考察了氨基酸、维生素和葡萄糖对CHO细胞生长、代谢与抗体合成的影响。结果表明,对培养过程中消耗较多的氨基酸进行补充,虽然不能促进细胞生长,但有利于培养后期细胞活性维持与抗体合成;B族维生素的添加能促进细胞生长并延长培养时间;作为重要的碳源和能源,葡萄糖浓度较高时会抑制细胞生长,而浓度较低时不能有效支持细胞生长与抗体合成,维持其在适当浓度有利于细胞生长并能延长培养时间,从而有利于提高抗体产量。通过合理调整各营养物的浓度配比形成了优化的无蛋白培养基,CHO细胞在该培养基中的最高密度达到52.6×105cells mL 1,抗体产量达到274 mg L 1,与初始培养基相比分别提高了33%和63%。总之,在细胞培养过程中应维持充足且平衡的营养物成分,以有效供应细胞生长与抗体合成的需求。 展开更多
关键词 CHO细胞 单克隆抗体 蛋白培养 优化
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通过高表达Igf1/Bcl-2或Bcl-2/Cyclin E基因组合使CHO细胞适于在无蛋白培养基中抗凋亡培养 被引量:4
4
作者 来大志 翁少洁 +4 位作者 齐连权 于长明 付玲 于婷 陈薇 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第1期66-72,共7页
哺乳动物细胞表达系统是生产重组蛋白药物最常用的表达系统。但在无蛋白培养基中 ,哺乳动物细胞生长活力差 ,且容易发生细胞凋亡 ,因而难以大规模培养。为解决此问题 ,应用双顺反子表达载体在CHO dhfr- 细胞中同时表达Igf 1 Bcl 2或Bcl ... 哺乳动物细胞表达系统是生产重组蛋白药物最常用的表达系统。但在无蛋白培养基中 ,哺乳动物细胞生长活力差 ,且容易发生细胞凋亡 ,因而难以大规模培养。为解决此问题 ,应用双顺反子表达载体在CHO dhfr- 细胞中同时表达Igf 1 Bcl 2或Bcl 2 CyclinE基因组合 ,通过Bcl 2使细胞获得抗凋亡能力 ;通过Igf 1或CyclinE促进细胞生长分裂 ,使细胞获得在无蛋白培养基中生长的能力。以上述基因组合转染CHO dhfr- 细胞 ,应用Westernblot从G4 18抗性克隆中分别筛选到Bcl 2高表达克隆若干个 ,对其中表达Bcl 2最高的CHO IB3和CHO BC1做进一步Westernblot和流式细胞分析 ,确认此两个细胞株分别高表达Igf 1 Bcl 2和Bcl 2 CyclinE基因组合。分别通过撤去血清和加入放线菌素D诱导细胞凋亡 ,并以流式细胞术和DNALadder法检测细胞凋亡 ,证明CHO IB3和CHO BC1均具有较强的抗细胞凋亡能力。MTT法证明两个细胞株在不含血清的IMDM培养基中的增殖活力显著高于CHO dhfr- 对照细胞。在细胞培养瓶中的连续培养实验表明 ,CHO IB3和CHO BC1在本实验室设计的IMEM无蛋白培养基中的生长速度和活细胞数显著高于CHO dhfr- 对照细胞。提示此两个细胞系能够在无血清培养基中抗凋亡高活力生长 ,适于作为生物工程宿主细胞。 展开更多
关键词 哺乳动物细胞表达系统 细胞培养 细胞凋亡 细胞周期 蛋白培养
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Plackett-Burman与响应面法相结合优化化学成分明确的MDCK细胞无血清无蛋白培养基 被引量:4
5
作者 黄锭 黎文明 +6 位作者 赵亮 范里 叶朝阳 刘旭平 谭文松 罗剑 陈则 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2014年第6期835-842,共8页
目的采用Plackett-Burman与响应面法相结合优化化学成分明确的MDCK细胞无血清无蛋白培养基。方法在自主研发的含蛋白无血清培养基的基础上,通过Plackett-Burman试验和响应面试验设计考察23组营养物质对MDCK细胞生长的影响,以细胞比生长... 目的采用Plackett-Burman与响应面法相结合优化化学成分明确的MDCK细胞无血清无蛋白培养基。方法在自主研发的含蛋白无血清培养基的基础上,通过Plackett-Burman试验和响应面试验设计考察23组营养物质对MDCK细胞生长的影响,以细胞比生长速率、维持时间及最大活细胞密度作为响应值进行筛选和定量优化。以最优化的因子浓度配制化学成分明确的无血清无蛋白培养基,分别于细胞培养板和搅拌瓶中培养MDCK细胞,考察细胞比生长速率、维持时间和最大活细胞密度3个响应值的大小。结果通过Plackett-Burman试验筛选出4种对MDCK细胞生长具有显著性促进作用的因子:半胱氨酸、苏氨酸、亮氨酸和葡萄糖,苏氨酸和亮氨酸有助于提高细胞比生长速率,半胱氨酸和葡萄糖有利于提高最大活细胞密度;该化学成分明确的无血清无蛋白培养基能很好地支持MDCK细胞悬浮生长,单细胞悬浮培养MDCK细胞时,细胞比生长速率可达0.058/h,最大活细胞密度可达32.65×105个/ml,分别比基础培养基提高了2.15和3.09倍。结论采用Plackett-Burman与响应面法相结合优化了化学成分明确的MDCK细胞无血清无蛋白培养基,为采用MDCK细胞大规模工业化生产流感疫苗奠定了基础。 展开更多
关键词 MDCK细胞 蛋白培养 Plackett-Burman试验设计 响应面分析
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动物细胞培养及单克隆抗体
6
《生物技术通报》 CAS CSCD 1996年第1期64-72,共9页
980150 单克隆抗体的开发和生产[德]/Baron, D. ∥Pharm. Ztg. -1995,140(5).-9~16[译自DBA,1995,14(6),95-03301] 生产单克隆抗体(MAb)的起始步骤包括免疫接种小鼠以产生适宜水平的抗原特异性淋巴细胞。根据抗原的需求、应用途径、佐剂。
关键词 单克隆抗体 动物细胞培养 杂交瘤细胞 蛋白培养 谷氨酸胺 无血清培养 细胞系 批式培养 小鼠 葡萄糖
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无蛋白培养中杂交瘤细胞的生长与单克隆抗体分泌 被引量:1
7
作者 马刚 余兴龙 +2 位作者 李作生 张茂林 涂长春 《免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2002年第5期389-392,396,共5页
目的 建立应用无蛋白培养基大量制备单克隆抗体 (McAb)的生产方法。方法 本实验以 3株猪瘟病毒特异单抗杂交瘤细胞为研究对象 ,通过与常规的有血清培养法比较 ,研究了无蛋白培养基中杂交瘤细胞的生长特性、抗体分泌效率、活性与纯度... 目的 建立应用无蛋白培养基大量制备单克隆抗体 (McAb)的生产方法。方法 本实验以 3株猪瘟病毒特异单抗杂交瘤细胞为研究对象 ,通过与常规的有血清培养法比较 ,研究了无蛋白培养基中杂交瘤细胞的生长特性、抗体分泌效率、活性与纯度。结果 无蛋白培养基中单抗的产量与效价比有血清培养的单抗高 2~ 4倍 ,而且单抗的纯度显著提高。结论 无蛋白培养基可完全取代常规的有血清培养基 ,用于生产高滴度、高纯度单克隆抗体。 展开更多
关键词 蛋白培养 杂交瘤细胞 单克隆抗体
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病理学
8
《国外科技资料目录(医药卫生)》 1999年第8期30-31,共2页
9927825 无蛋白培养基培养细胞的细胞周期控制因子的异常[日]/土桥洋∥日病理会志.-1997,86(1).-169 冀医情9927826 大鼠细胞周期蛋白 D1基因启动领域的甲基化、脱甲基化引起的基因表达调节机制[日]/北泽庄平∥日病理会志.-1997,86(1).-169
关键词 细胞周期蛋白 治疗学 蛋白培养 调节机制 病理学 基因表达 培养细胞 控制因子 脱甲基化 糖基化
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动物细胞培养及单克隆抗体
9
《生物技术通报》 CAS CSCD 1996年第6期52-56,共5页
962115 对CD3-专性单克隆抗体进行PCR克隆和定序[英]/Thirion, S.…//Immunogenetics. -1995, 43(3).-167~168[译自DBA,1996,15(7),96-03879] 使被免疫小鼠的脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合,获得了CD3-专性单克隆抗体。从总RNA开始,从产... 962115 对CD3-专性单克隆抗体进行PCR克隆和定序[英]/Thirion, S.…//Immunogenetics. -1995, 43(3).-167~168[译自DBA,1996,15(7),96-03879] 使被免疫小鼠的脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合,获得了CD3-专性单克隆抗体。从总RNA开始,从产抗CD3抗体的杂交瘤中制备cDNA。 展开更多
关键词 动物细胞培养 单克隆抗体 杂交瘤细胞 蛋白培养 小鼠 免疫粘附素 细胞系 微载体 细胞密度 强稳定性
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在无血清无蛋白培养基中培养Vero细胞
10
作者 高正伦 张宪平 +1 位作者 盛军 郝淑美 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2007年第9期688-690,共3页
目的开发在无血清无蛋白培养基(PF)中培养Vero细胞的技术。方法在DMEM/F12培养基中添加酵母提取物和大豆水解物,配制成无血清无蛋白培养基。使用配制好的无血清无蛋白培养基,分别在玻璃、聚乙烯醇缩丁醛(PVB)和聚苯乙烯(PS-TC)培养面上... 目的开发在无血清无蛋白培养基(PF)中培养Vero细胞的技术。方法在DMEM/F12培养基中添加酵母提取物和大豆水解物,配制成无血清无蛋白培养基。使用配制好的无血清无蛋白培养基,分别在玻璃、聚乙烯醇缩丁醛(PVB)和聚苯乙烯(PS-TC)培养面上培养Vero细胞,观察细胞生长情况,并绘制细胞生长曲线,以含血清培养基BM为对照。结果与BM培养基比较,在玻璃培养面上,PF培养基不支持Vero细胞生长和分裂;在PVB培养面上,PF培养基支持Vero细胞生长,但不支持分裂;在PS-TC培养面上,PF培养基支持Vero细胞的生长和分裂。结论在PS-TC培养面上,PF培养基适合培养Vero细胞。 展开更多
关键词 无血清无蛋白培养 VERO细胞 生长 分裂
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三种金黄色葡萄球菌选择性分离培养基的检测效果比较 被引量:8
11
作者 顾其芳 张红芝 +5 位作者 朱颖莹 鲁珺琰 於颖 刘诚 刘玥 陈敏 《上海预防医学》 CAS 2018年第1期69-73,共5页
【目的】比较三种金黄色葡萄球菌选择性分离培养基的检测效果。【方法】分别使用BairdParker培养基(BP)、兔血浆纤维蛋白原培养基(RPF)和科玛嘉葡萄球菌显色培养基(CHROMagar^(TM) Staph aureus)对标准菌株、食品分离株以及食品样品进... 【目的】比较三种金黄色葡萄球菌选择性分离培养基的检测效果。【方法】分别使用BairdParker培养基(BP)、兔血浆纤维蛋白原培养基(RPF)和科玛嘉葡萄球菌显色培养基(CHROMagar^(TM) Staph aureus)对标准菌株、食品分离株以及食品样品进行对比检测。【结果】三种选择性培养基对金黄色葡萄球菌的回收率均达到95%以上;RPF和CHROMagar^(TM) Staph aureus培养基的检测效率明显高于BP培养基;且两种培养基敏感性、特异性均优于传统的BP培养基。【结论】应用RPF和CHROMagar^(TM) Staph aureus培养基检测食品中金黄色葡萄球菌,较传统的BP培养基具有更好的检测效果,建议将RPF和CHROMagar^(TM) Staph aureus培养基作为可靠的分离检测培养基应用于食品中金黄色葡萄球菌的分离检测。 展开更多
关键词 金黄色葡萄球菌 Baird-Parker培养 兔血浆纤维蛋白培养基(RPF) 科玛嘉葡萄球菌显色培养 检测效果
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水中细菌总数的测定 被引量:7
12
作者 赵跃萍 《太原师范学院学报(自然科学版)》 2010年第4期139-142,共4页
水中细菌总数可说明被有机物污染的程度,细菌数越多,有机物质含量越大,通过对水中细菌总数的测定实验,大致了解被测水源水的污染程度,大力推广污水处理再利用技术,加强水资源的保护.
关键词 水中细菌总数 牛肉膏蛋白胨琼脂培养 水资源保护
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植物蛋白胨培养基在23价肺炎球菌多糖疫苗生产中的应用 被引量:4
13
作者 罗勇 于荣清 +2 位作者 兰芳 田继钊 张锐 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2016年第12期1271-1273,1279,共4页
目的对植物蛋白胨培养基应用于23价肺炎球菌多糖疫苗规模化生产的效果进行初步评价。方法采用植物蛋白胨培养基,按生产规模进行肺炎球菌发酵培养和分离纯化多糖,检测大罐培养浓度、培养液多糖含量及精制多糖各项质量指标,并与现有23价... 目的对植物蛋白胨培养基应用于23价肺炎球菌多糖疫苗规模化生产的效果进行初步评价。方法采用植物蛋白胨培养基,按生产规模进行肺炎球菌发酵培养和分离纯化多糖,检测大罐培养浓度、培养液多糖含量及精制多糖各项质量指标,并与现有23价肺炎球菌多糖疫苗生产用动物蛋白胨培养基相比较。结果与动物蛋白胨培养基相比较,使用植物蛋白胨培养基可提高肺炎球菌大罐培养浓度以及培养液多糖含量;精制多糖收率明显提高,各项质量指标均符合企业注册标准要求。结论在生产规模下,使用植物蛋白胨培养基生产的肺炎球菌精制多糖质量符合企业注册标准,且可较大幅度地提高精制多糖收率,为植物蛋白胨培养基应用于23价肺炎球菌多糖疫苗规模化生产奠定了基础。 展开更多
关键词 植物蛋白培养 23价肺炎球菌多糖疫苗
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大豆酪蛋白琼脂培养基(TSA)质量控制程序 被引量:3
14
作者 秦霄雯 李凤霞 胡方峥 《医疗装备》 2015年第17期33-34,共2页
浮游菌和沉降菌是医院洁净手术部和临床实验室的空气质量控制指标之一。为了细化浮游菌和沉降菌的测试方法,加强对微生物培养基的质量控制,避免误操作引起的生物污染,保障检测过程中的人员健康,本文给出了大豆酪蛋白琼脂培养基的质量控... 浮游菌和沉降菌是医院洁净手术部和临床实验室的空气质量控制指标之一。为了细化浮游菌和沉降菌的测试方法,加强对微生物培养基的质量控制,避免误操作引起的生物污染,保障检测过程中的人员健康,本文给出了大豆酪蛋白琼脂培养基的质量控制程序,希望有助于微生物检测工作的同行们更好的开展工作。 展开更多
关键词 大豆酪蛋白琼脂培养 检测 质量控制
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无菌检查用真菌培养基与大豆-酪蛋白消化物培养基的比较试验 被引量:3
15
作者 许华玉 刘鹏 苏德模 《中国药品标准》 CAS 2005年第1期47-49,共3页
目的:验证美国药典用大豆-酪蛋白消化物培养基能否替代中国药典无菌检查用的真菌培养基。方法:参照灵敏度试验,比较试验菌在两种培养基中的生长情况。结果:试验菌在真菌培养基生长优于大豆-酪蛋白消化物培养基。结论:大豆-酪蛋白消化物... 目的:验证美国药典用大豆-酪蛋白消化物培养基能否替代中国药典无菌检查用的真菌培养基。方法:参照灵敏度试验,比较试验菌在两种培养基中的生长情况。结果:试验菌在真菌培养基生长优于大豆-酪蛋白消化物培养基。结论:大豆-酪蛋白消化物培养基不能替代中国药典无菌检查用的真菌培养基,真菌培养基也不完全具备适合细菌生长的特性。 展开更多
关键词 无菌检查 真菌培养 大豆-酪蛋白消化物培养 比较试验
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用MM培养基生产羊大肠杆菌病灭活疫苗的试验 被引量:2
16
作者 黄炯 张读朴 +3 位作者 朱刚 刘昕 乌斯满江 徐亚萍 《中国兽药杂志》 2003年第2期42-43,共2页
本试验研制出一种适于生产羊大肠杆菌病灭活疫苗的培养基 (MM培养基 )。该培养基不需要牛肉 ,可替代 2 %蛋白胨肉汤培养基 ,使疫苗生产成本由原成本 0 .0 1 4元 /mL下降至0 .0 0 2 1元 /mL。活菌计数、无菌检验、安全检验和效力试验证... 本试验研制出一种适于生产羊大肠杆菌病灭活疫苗的培养基 (MM培养基 )。该培养基不需要牛肉 ,可替代 2 %蛋白胨肉汤培养基 ,使疫苗生产成本由原成本 0 .0 1 4元 /mL下降至0 .0 0 2 1元 /mL。活菌计数、无菌检验、安全检验和效力试验证明 ,用该培养基制备的疫苗 ,均达到了《中华人民共和国兽用药物制品规程》 展开更多
关键词 大肠杆菌 灭活疫苗 MM培养 替代 蛋白胨肉汤培养 效力试验
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纯化学合成缓冲蛋白胨水培养基的研制 被引量:2
17
作者 张国勇 曲萍 +2 位作者 邓自新 董培智 崔生辉 《食品工程》 2020年第2期44-50,65,共8页
拟用氨基酸、无机盐、维生素等物质替代蛋白胨,研制可质控的纯化学合成缓冲蛋白胨水培养基(BPW)。利用23种氨基酸,18种维生素,5种无机盐对BPW进行解析替代。以葡萄糖盐溶液作为基底物,在此基础上添加46种物质筛选对鼠伤寒沙门氏菌有增... 拟用氨基酸、无机盐、维生素等物质替代蛋白胨,研制可质控的纯化学合成缓冲蛋白胨水培养基(BPW)。利用23种氨基酸,18种维生素,5种无机盐对BPW进行解析替代。以葡萄糖盐溶液作为基底物,在此基础上添加46种物质筛选对鼠伤寒沙门氏菌有增菌效果的物质,制成纯化学合成缓冲蛋白胨水培养基。筛选出50 mg/L硫酸镁、95 mg/L甲硫氨酸、15 mg/L半胱氨酸、32.5 mg/L胱氨酸二盐酸盐、4 g/L维生素C、10 mg/L硫酸腺嘌呤、5 mg/L硫酸锰、20 mg/L黄嘌呤8种物质,这8种物质均可以促进鼠伤寒沙门氏菌ATCC14028生长,其中硫酸镁效果最佳,OD600值达0.35;半胱氨酸、胱氨酸二盐酸盐、硫酸腺嘌呤、硫酸锰作用次之,OD600值达0.18~0.20;甲硫氨酸、维生素C作用较弱,仅达到0.15;多次筛选试验表明低浓度硫酸镁(50 mg/L)单独作用时效果最佳,故将葡萄糖盐溶液中加入低浓度硫酸镁(50 mg/L)制成纯化学合成缓冲蛋白胨水培养基。通过研究,以期为BPW培养基的生产与检定提供参考价值。 展开更多
关键词 纯化学合成培养 缓冲蛋白胨水培养 硫酸镁 盐溶液
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金黄色葡萄球菌表面蛋白SdrE的表达、纯化及晶体生长
18
作者 张绍城 郭珍 +3 位作者 张宏鹏 苟冶然 龙小滨 汪德强 《重庆医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第4期529-533,共5页
目的:对金黄色葡萄球菌表面蛋白质(serine-aspartate repeat,SdrE)进行克隆表达纯化及晶体培养,以期解析其三维结构,进而深入分析金黄色葡萄球菌感染的分子机制,为研发新的抗菌药物提供基础。方法:利用PCR技术扩增SdrE基因,构建重组质粒... 目的:对金黄色葡萄球菌表面蛋白质(serine-aspartate repeat,SdrE)进行克隆表达纯化及晶体培养,以期解析其三维结构,进而深入分析金黄色葡萄球菌感染的分子机制,为研发新的抗菌药物提供基础。方法:利用PCR技术扩增SdrE基因,构建重组质粒pW28-SdrE,并在大肠杆菌(Escherichia coli,E.coli)B834中表达,用Ni2+-NTA亲和层析柱和DEAE阴离子交换层析柱纯化SdrE蛋白质,再用Hiload Superdex 200凝胶层析柱分析其在溶液中的聚集状态,用Hampton试剂盒初筛晶体及棋盘法优化晶体。结果:(1)构建了重组质粒pW28-SdrE,并在E.coli B834中可溶性表达。(2)获得了纯度较高(85%)的SdrE蛋白质,该蛋白质在溶液中以单体形式存在。(3)培养出晶形较好、衍射能力较强的SdrE蛋白质单晶。结论:利用经典的蛋白质纯化技术和晶体培养技术,可以获得衍射能力较强的SdrE单晶,为其三维结构的解析和基于结构的新型特异性抗菌药物的研发提供了重要的基础。 展开更多
关键词 金黄色葡萄球菌 表面蛋白质SdrE 蛋白质表达纯化 蛋白质晶体培养 抗菌药物
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食品中沙门氏菌缓冲蛋白胨水培养基的优化 被引量:1
19
作者 王乐 陈佳 秦丽 《食品安全导刊》 2022年第13期86-90,95,共6页
目的:优化食品中沙门氏菌缓冲蛋白胨水培养基的配比,缩短检验周期,使食品安全预警时间点前移。方法:通过吸光度法和平板计数法同时测定不同优化条件下缓冲蛋白胨水培养基中沙门氏菌的生长曲线,对结果进行处理分析,确定最优方案,并采用... 目的:优化食品中沙门氏菌缓冲蛋白胨水培养基的配比,缩短检验周期,使食品安全预警时间点前移。方法:通过吸光度法和平板计数法同时测定不同优化条件下缓冲蛋白胨水培养基中沙门氏菌的生长曲线,对结果进行处理分析,确定最优方案,并采用实时荧光PCR法进行菌种验证。结果:吸光度法和平板计数法曲线变化基本一致,随着缓冲蛋白胨水培养基中酵母添加量的增加,沙门氏菌的调整期缩短,对数期斜率和稳定期数值呈增大的趋势。当改良缓冲蛋白胨水中酵母浸膏的添加量为9 g/L时,食品中沙门氏菌的前增菌时间缩短到8~10 h。通过实时荧光PCR法的验证,确定改良缓冲蛋白胨水培养基特异性良好。结论:根据实际情况选择缓冲蛋白胨水培养基中酵母的添加量,优化后的缓冲蛋白胨水培养基检测时间短、特异性强,可用于食品中沙门氏菌的快速检测,为商品化缓冲蛋白胨水培养基的生产提供参考依据。 展开更多
关键词 食品 沙门氏菌 缓冲蛋白胨水培养 优化
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重组肺炎链球菌甘油脱氢酶活性及晶体培养的初步分析
20
作者 赵沙沙 牛司强 +2 位作者 金丽 杨伟 汪德强 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第10期952-957,共6页
甘油脱氢酶能够氧化胞内甘油为代谢活动提供能量,并参与调控宿主粘附相关细菌蛋白质的表达,是潜在的抗菌药物靶点.本文利用大肠杆菌BL21原核表达肺炎链球菌甘油脱氢酶,获得大量上清表达的目的蛋白.再用Ni-NAT-Sepharose Fast Flow亲和... 甘油脱氢酶能够氧化胞内甘油为代谢活动提供能量,并参与调控宿主粘附相关细菌蛋白质的表达,是潜在的抗菌药物靶点.本文利用大肠杆菌BL21原核表达肺炎链球菌甘油脱氢酶,获得大量上清表达的目的蛋白.再用Ni-NAT-Sepharose Fast Flow亲和层析、DEAE-Sepharose Fast Flow离子交换层析以及Superdex 200分子筛进行纯化.经数据拟合,证实该酶在溶液中以同源二聚体形式存在.光谱实验证实,该重组表达甘油脱氢酶仍具有氧化甘油生成1,3-二羟基丙酮的活性.用Hampton试剂盒初筛晶体及棋盘法优化晶体,在0.1 mol/L Bicine pH 9.6,13%PEG MME 5000,0.2 mol/L KSCN,4%Dioxone条件下,得到了晶型好且有一定衍射能力的单晶,为解析肺炎链球菌甘油脱氢酶的三维结构及研究结构与酶活之间的关系奠定了基础. 展开更多
关键词 肺炎链球菌 甘油脱氢酶 蛋白表达纯化 酶活性鉴定 蛋白质晶体培养
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