超声介导微泡靶向传输基因促血管新生的实验研究 被引量：7

1

作者 周忠江 侯玉清 +3 位作者 赖文岩 李利 吴平生 刘伊丽 《中华超声影像学杂志》 CSCD 2005年第5期381-384,共4页

目的探讨超声介导微泡靶向传输血管内皮生长因子VEGF165促心肌血管新生即心肌“分子搭桥”的新途径。方法利用分子生物学方法构建人血管内皮生长因子真核表达质粒pcDNA3.1-/VEGF165;制备载VEGF165基因脂质体微泡,分析其理化性质和功能,... 目的探讨超声介导微泡靶向传输血管内皮生长因子VEGF165促心肌血管新生即心肌“分子搭桥”的新途径。方法利用分子生物学方法构建人血管内皮生长因子真核表达质粒pcDNA3.1-/VEGF165;制备载VEGF165基因脂质体微泡,分析其理化性质和功能,在超声场利用超声辐射向大鼠梗死心肌靶向传输VEGF165;2周后取材,逆转录聚合酶链式反应(RT PCR)评价大鼠心肌中人源VEGF165mRNA表达,蛋白印迹杂交(WesternBlot)观察大鼠心肌VEGF165的蛋白表达,CD34免疫组化微血管密度(MVD)计数半定量法评价超声介导微泡靶向传输VEGF165促梗死心肌血管新生效果。结果①成功构建、克隆血管内皮生长基因VEGF165重组真核表达质粒pcDNA3.1-/VEGF165,测序分析、酶切鉴定准确无误;②研制的脂质体微泡超微结构显示可粘附或包载DNA,粒度分析显示平均粒径<5μm;③在超声介导下该脂质体载基因微泡可靶向传输VEGF165至大鼠梗死心肌,超声介导靶向传输组VEGF165的mRNA、蛋白表达及促血管新生作用(MVD表示)仅次于VEGF165基因心肌注射组。结论超声介导微泡可向大鼠心肌靶向传输VEGF165基因并产生促血管新生效应。 展开更多

关键词 促血管新生 超声介导 靶向传输基因 微泡 VEGF165基因 实验研究 逆转录-聚合酶链式反应 微血管密度(MVD) 人血管内皮生长因子 心肌血管新生 pcDNA3 真核表达质粒 分子生物学方法 “分子搭桥” 大鼠心肌 mRNA表达 蛋白印迹杂交

原文传递

Bcl-XL反义寡核苷酸转染对食管癌细胞增殖及裸鼠体内人食管癌移植瘤生长的抑制作用 被引量：9

2

作者 张蕾 温洪涛 +2 位作者 张岚 陈奎生 张云汉 《中华病理学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第7期402-406,共5页

目的探讨Bcl-XL反义寡核苷酸转染后,对食管癌细胞增殖及裸鼠体内人食管癌移植瘤生长的影响。方法采用阳离子脂质体介导的反义寡核苷酸转染、逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)、Western蛋白印迹杂交、四甲基偶氮唑盐光吸收法(MTT法)、流式细... 目的探讨Bcl-XL反义寡核苷酸转染后,对食管癌细胞增殖及裸鼠体内人食管癌移植瘤生长的影响。方法采用阳离子脂质体介导的反义寡核苷酸转染、逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)、Western蛋白印迹杂交、四甲基偶氮唑盐光吸收法(MTT法)、流式细胞术及凋亡的原位末端标记(TUNEL)检测等方法观察了Bcl-XL反义寡核苷酸转染对食管癌细胞增殖、凋亡的影响及裸鼠体内人食管癌移植瘤生长的影响。结果MTT法检测显示,Bcl-XL反义寡核苷酸可显著抑制食管癌细胞的增殖(P<0.05);对Bcl-XLmRNA表达抑制率为57.3%,可显著下调Bcl-XL的蛋白表达;应用流式细胞术和TUNEL检测技术,反义寡核苷酸组的凋亡率分别为(31.1±5.8)%和35.0%,与相关对照组比较差异有统计学意义(P<0.01)。反义寡核苷酸组裸鼠体内人食管癌移植瘤的生长受到显著抑制(P<0.05)。Bcl-XLmRNA及蛋白表达亦受到明显抑制,并且移植瘤组织中凋亡细胞明显增加。结论Bcl-XL反义寡核苷酸可有效抑制食管癌细胞增殖及裸鼠体内人食管癌移植瘤的生长。通过反义寡核苷酸下调Bcl-XL的表达,达到治疗食管癌的目的,为食管癌的基因治疗提供实验依据。 展开更多

关键词 反义寡核苷酸转染 癌细胞增殖 移植瘤生长 人食管癌 BCL-XL反义寡核苷酸 体内 裸鼠 抑制作用 逆转录聚合酶链反应 阳离子脂质体介导 Western 四甲基偶氮唑盐 流式细胞术 蛋白印迹杂交 原位末端标记 MTT法检测 mRNA表达

原文传递

基于细胞热漂移测定(CETSA)技术鉴定活细胞内药物靶标的标准操作流程

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作者 王莉 刘景芳 +4 位作者 李维林 李二伟 孙树涛 李娟 罗元明 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第6期2488-2501,共14页

【目的】细胞热漂移测定(cell thermal shift assay, CETSA)技术是一种检测细胞内药物(配体)和蛋白质(靶标)相互作用的技术,原理是当蛋白质结合药物后,其热稳定性会发生变化,通过测定这种变化去鉴定药物和蛋白之间的相互作用。本研究以... 【目的】细胞热漂移测定(cell thermal shift assay, CETSA)技术是一种检测细胞内药物(配体)和蛋白质(靶标)相互作用的技术,原理是当蛋白质结合药物后,其热稳定性会发生变化,通过测定这种变化去鉴定药物和蛋白之间的相互作用。本研究以治疗多发性骨髓瘤的靶向药帕比司他(panobinostat)为例,建立基于蛋白印迹杂交(Western blotting)和CETSA技术的药物靶蛋白鉴定的标准操作流程。【方法】首先用药物panobinostat处理培养的K562细胞,然后加热处理细胞、裂解细胞及提取可溶性蛋白,以及用抗靶蛋白的抗体经Western blotting定量可溶性蛋白。【结果】经Western blotting定量及曲线拟合,成功得到3个蛋白——组蛋白去乙酰化酶(histone deacetylase,HDAC1)、人突触蛋白(humansyntaxin-4,STX4)以及四三肽重复结构域(tetratricopeptiderepeat domain38,TTC38)随温度变化的热熔解曲线和恒定温度条件下的药物剂量反应曲线。【结论】HDAC1、STX4及TTC38为药物panobinostat在K562细胞中的靶蛋白。本研究建立了基于CETSA和Western blotting技术,鉴定活细胞中药物靶标蛋白的标准操作流程。实验可在2–3 d内完成。 展开更多

关键词 细胞热漂移测定 活细胞 蛋白印迹杂交 药物靶标鉴定

原文传递

福辛普利、卡托普利和缬沙坦对人血单核细胞中核因子κB的影响 被引量：3

4

作者 周华 张代富 单江 《中国动脉硬化杂志》 CAS CSCD 2004年第6期673-676,共4页

为探讨福辛普利、卡托普利和缬沙坦对人血单核细胞受细菌脂多糖刺激时核转录因子c Rel p6 5活化的影响。从健康产妇脐带血分离出单核细胞 ,与脂多糖及脂多糖加不同药物培养 ,按不同时间点收集细胞 ,抽提蛋白。用WesternBiotting技术检测... 为探讨福辛普利、卡托普利和缬沙坦对人血单核细胞受细菌脂多糖刺激时核转录因子c Rel p6 5活化的影响。从健康产妇脐带血分离出单核细胞 ,与脂多糖及脂多糖加不同药物培养 ,按不同时间点收集细胞 ,抽提蛋白。用WesternBiotting技术检测p5 0和p6 5在胞质和胞核中的变化。结果发现 ,福辛普利、卡托普利和缬沙坦可减弱IκBα的降解 ,抑制p6 5由胞浆转至核内。结果提示 ,部分血管紧张素转化酶抑制剂及血管紧张素受体拮抗剂对在受脂多糖刺激时人血单核细胞转录因子的活化可产生抑制作用。 展开更多

关键词 药理学 血管紧张素转换酶抑制剂对单核细胞的作用 蛋白印迹杂交 福辛普利 卡托普利 缬沙坦 核因子ΚB 脂多糖

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蛇毒神经毒素类似物的免疫学分析

5

作者 钱友存 胡太山 +4 位作者 范春阳 杨运桂 杨胜利 龚毅 srcb.ac.cn 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 2000年第3期340-345,共6页

选取眼镜蛇蛇毒和银环蛇蛇毒中 1 0个差异较大的神经毒素类似物 ,通过麦芽糖融合表达系统使它们在大肠杆菌中得到高效可溶性表达 .通过 Amylose- Sepharose6B亲和树脂纯化这些融合蛋白 .分别制备这 1 0种融合蛋白多克隆抗体 .同时将这 ... 选取眼镜蛇蛇毒和银环蛇蛇毒中 1 0个差异较大的神经毒素类似物 ,通过麦芽糖融合表达系统使它们在大肠杆菌中得到高效可溶性表达 .通过 Amylose- Sepharose6B亲和树脂纯化这些融合蛋白 .分别制备这 1 0种融合蛋白多克隆抗体 .同时将这 1 0种神经毒素类似物进行硫氧还蛋白融合表达 ,表达产物基本上都是包涵体 .以硫氧还蛋白融合表达产物为抗原和上述 1 0种神经毒素类似物抗血清进行 Western blotting.结果显示 ,大多数神经毒素类似物之间没有免疫交叉反应 ,表明这些神经毒素类似物的抗原性差别较大 。 展开更多

关键词 神经毒素类似物 蛋白印迹杂交 免疫学分析

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退变腰椎间盘组织中p-JNK的表达变化及意义

6

作者 李洪涛 陈红芳 《山东医药》 CAS 2013年第19期75-77,共3页

目的观察退变腰椎间盘组织中p-c-Jun氨基末端激酶(JNK)的表达变化,并探讨其意义。方法选择手术切除的腰椎间盘突出症退变腰椎间盘组织(观察组,50例份)及腰椎爆裂骨折、椎间盘突出症正常腰椎间盘组织(对照组,20例),光学显微镜下观察两组... 目的观察退变腰椎间盘组织中p-c-Jun氨基末端激酶(JNK)的表达变化,并探讨其意义。方法选择手术切除的腰椎间盘突出症退变腰椎间盘组织(观察组,50例份)及腰椎爆裂骨折、椎间盘突出症正常腰椎间盘组织(对照组,20例),光学显微镜下观察两组腰椎间盘组织病理变化,免疫荧光法检测p-JNK的定位,Western blot法检测p-JNK蛋白。结果光镜下,观察组细胞增殖明显,细胞核呈圆形或卵圆形,髓核细胞细胞质成空泡状,基质增多,纤维网错乱,纤维排列紊乱;对照组可见纤维环和髓核结构,腰椎间盘髓核的软骨细胞表现为不规则的软骨陷窝,细胞核呈卵圆形,蓝染,细胞质粉染,基质较均匀,可见排列整齐的纤维网。免疫荧光示,观察组细胞质和细胞核内均有p-JNK表达,对照组细胞质及细胞核内仅少量表达。Western blot法示,与对照组比较,观察组p-JNK蛋白水平升高(P<0.05)。结论 p-JNK在退变椎间盘组织中的表达明显高于正常椎间盘,提示p-JNK可能与椎间盘退变有关。 展开更多

关键词 腰椎间盘退变 C-JUN氨基末端激酶 蛋白印迹杂交法

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喉癌组织中核转录因子NF-kB的定量检测 被引量：3

7

作者 孙余才 胡国华 朱江 《山东大学耳鼻喉眼学报》 CAS 2007年第2期141-143,共3页

目的:探讨核转录因子(nuclear transcription factor kappa B,NF-kB)的定量检测在喉癌组织中的意义。方法:采用蛋白质印迹杂交法(Western blot法)和凝胶电泳迁移率(EMSA)法对20例喉癌组织和10例癌旁正常组织中NF-kB的蛋白含量以及NF-kB ... 目的:探讨核转录因子(nuclear transcription factor kappa B,NF-kB)的定量检测在喉癌组织中的意义。方法:采用蛋白质印迹杂交法(Western blot法)和凝胶电泳迁移率(EMSA)法对20例喉癌组织和10例癌旁正常组织中NF-kB的蛋白含量以及NF-kB DNA结合活性进行定量检测,并进行分析比较。结果:喉癌组织中NF-kB的蛋白含量以及NF-kB DNA结合活性均明显高于癌旁正常组织,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:NF-kB在喉癌的发生发展过程中可能起一定的作用,并为喉癌的治疗能提供一个新靶点。 展开更多

关键词 喉肿瘤 核转录因子 蛋白质印迹杂交 凝胶电泳迁移率

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山羊IGFBP-2基因的克隆、序列分析及其组织表达 被引量：3

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作者 占思远 董尧 +3 位作者 李利 仲涛 王林杰 张红平 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2016年第10期1998-2007,共10页

【目的】克隆获得南江黄羊IGFBP-2(Insulin-like growth factor binding protein-2)基因的CDS区全序列,对其进行生物信息学分析,并分析IGFBP-2的mRNA和蛋白组织表达特征,为深入研究该基因在出生后山羊生长和发育过程中的作用以及表达调... 【目的】克隆获得南江黄羊IGFBP-2(Insulin-like growth factor binding protein-2)基因的CDS区全序列,对其进行生物信息学分析,并分析IGFBP-2的mRNA和蛋白组织表达特征,为深入研究该基因在出生后山羊生长和发育过程中的作用以及表达调控提供基础资料。【方法】下载NCBI的Gen Bank数据库中公布的绵羊(Ovis aries,NM_001009436)和牛(Bos taurus,NM_174555)的IGFBP-2基因的mRNA序列,经序列比对后采用保守区域序列并利用Primer Premier 6.0软件设计克隆引物,经PCR扩增后采用TA克隆技术获取含有阳性克隆子的菌液,送公司测序得到山羊IGFBP-2基因的完整编码区序列,并利用Edit Seq、DNAMAN 6.0、MEGA 6.0和Ex PASy在线平台等软件对CDS区序列和其编码的氨基酸序列进行生物信息学分析;获得山羊IGFBP-2基因CDS区序列后,利用该序列设计实时荧光定量PCR(Q-PCR)引物,采用Q-PCR和蛋白质免疫印迹杂交(Western blotting)方法检测了IGFBP-2的mRNA和蛋白在出生后南江黄羊不同组织(心脏、肝脏、肺、背最长肌、半膜肌和臂三头肌)和不同发育阶段(3、30、60、90和120 d)的表达情况。【结果】1克隆得到954bp的南江黄羊IGFBP-2基因的CDS区全序列,碱基组成为GC含量69.39%,AT含量30.61%,共编码317个氨基酸残基,预测的山羊IGFBP-2蛋白分子量大小为33.8808 kD,等电点为7.82,二级结构由无规卷曲(68.14%)、α-螺旋(18.30%)和延伸链(13.56%)三种形式组成;蛋白结构域分析发现,IGFBP-2蛋白序列包含保守的IB(IGFBP homologues)和TY(Thyroglobulin typeΙrepeats)结构域,IB结构域位于第37—125位氨基酸处,TY结构域位于第250—302位氨基酸处;2磷酸化位点预测发现,IGFBP-2蛋白中存在Ser(5)和Thr(7)共12个磷酸化位点;糖基化位点预测发现,IGFBP-2蛋白序列中存在10个N-糖基化位点和2个O-糖基化位点;3CDS区序列相似性比较发现,山羊IGFBP-2与绵羊、牛、猪、人和小鼠的相似性分别达到98.99%、97.73%、8 展开更多

关键词 山羊 IGFBP-2 基因克隆 荧光定量PCR 蛋白免疫印迹杂交

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重要转录因子FoxO3a在斑马鱼性腺中的表达分析 被引量：1

9

作者 熊振 罗仲文 +5 位作者 蒋明贵 周勇华 文胜 刘文彬 肖亚梅 李万程 《生命科学研究》 CAS CSCD 北大核心 2012年第1期6-8,41,共4页

FoxO蛋白作为Forkhead Box家族的重要一员,在动物的生长发育、细胞分化、代谢、免疫和凋亡等方面起重要作用,研究发现FoxO蛋白是哺乳动物卵泡发育的重要调节因子.通过检测雌雄斑马鱼性腺中foxo3a基因的表达情况,初步研究FoxO在鱼类生殖... FoxO蛋白作为Forkhead Box家族的重要一员,在动物的生长发育、细胞分化、代谢、免疫和凋亡等方面起重要作用,研究发现FoxO蛋白是哺乳动物卵泡发育的重要调节因子.通过检测雌雄斑马鱼性腺中foxo3a基因的表达情况,初步研究FoxO在鱼类生殖发育中的作用.PCR和蛋白免疫杂交结果都显示foxo3a基因在斑马鱼雌性性腺中的表达量要明显高于雄性.这一结果提示,foxo3a基因在斑马鱼的卵巢发育中可能发挥重要作用. 展开更多

关键词 斑马鱼 性腺 FOXO3A 蛋白免疫印迹杂交

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东亚三角涡虫Dj14-3-3ε原核表达及鉴定

10

作者 杨武 赵博生 《山东理工大学学报（自然科学版）》 CAS 2010年第6期104-106,共3页

从东亚三角涡虫cDNA文库中挑选出克隆M455,经BLASTP确定隶属于14-3-3ε基因家族,具有14-3-3蛋白的保守结构域命名为Dj14-3-3ε基因.该基因含有完整的最大开放阅读框(ORF),编码蛋白约10.7 kDa.构建pET28b-Dj14-3-3ε原核表达载体,通过IPT... 从东亚三角涡虫cDNA文库中挑选出克隆M455,经BLASTP确定隶属于14-3-3ε基因家族,具有14-3-3蛋白的保守结构域命名为Dj14-3-3ε基因.该基因含有完整的最大开放阅读框(ORF),编码蛋白约10.7 kDa.构建pET28b-Dj14-3-3ε原核表达载体,通过IPTG诱导在大肠杆菌中表达,western blot鉴定,表明原核表达载体构建成功,并在大肠杆菌中正常表达. 展开更多

关键词 原核表达 14—3—3蛋白 蛋白免疫印迹杂交 涡虫

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HRP标记的二抗检测heme结合蛋白造成假阳性问题的探讨

11

作者 张亚男 张春晓 陈晓波 《河北科技大学学报》 CAS 2019年第3期273-278,共6页

为了验证对辣根过氧化物酶(horseradish peroxidase,HRP)作为二抗标记物在检测heme结合蛋白时产生假阳性问题的推测,以菠菜细胞色素b6f复合体(Cyt b6f)和铁氧还蛋白-NADP+氧化还原酶(FNR)为检测对象(前者含有heme结合蛋白Cyt f,后者不含... 为了验证对辣根过氧化物酶(horseradish peroxidase,HRP)作为二抗标记物在检测heme结合蛋白时产生假阳性问题的推测,以菠菜细胞色素b6f复合体(Cyt b6f)和铁氧还蛋白-NADP+氧化还原酶(FNR)为检测对象(前者含有heme结合蛋白Cyt f,后者不含heme基团),采用菠菜FNR一抗、HRP和碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)标记的二抗,设计对比实验。结果表明,在使用HRP标记的二抗体系中,Cyt f不经一抗和二抗孵育即可显色,这是明显的假阳性;而在ALP标记的二抗体系中,Cyt f条带不显色,只有FNR条带显色。在western blot实验中,如果被检测蛋白为heme结合蛋白或者混有少量heme结合蛋白,应避免采用HRP标记的二抗,建议使用ALP标记的二抗或者其他二抗产品;heme结合蛋白具有类似HRP的氧化还原酶活性,其本身可以和显色液反应,从而产生假阳性,干扰对实验结果的判断。 展开更多

关键词 植物生物化学 蛋白免疫印迹杂交 辣根过氧化物酶 heme结合蛋白 假阳性

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ERK1/2在三倍体湘云鲫组织及胚胎中的表达分析

12

作者 罗仲文 蒋明贵 +4 位作者 周勇华 文胜 汪妹 刘少军 肖亚梅 《生命科学研究》 CAS CSCD 北大核心 2013年第1期11-13,42,共4页

在细胞信号网络中丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase,MAPK)信号传递途径起着极为重要的作用,控制着细胞多种生理过程,如细胞生长、发育、分裂、死亡等.ERK是MAPK家族重要的成员,通过检测三倍体湘云鲫胚胎和成体组织... 在细胞信号网络中丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase,MAPK)信号传递途径起着极为重要的作用,控制着细胞多种生理过程,如细胞生长、发育、分裂、死亡等.ERK是MAPK家族重要的成员,通过检测三倍体湘云鲫胚胎和成体组织中ERK1/2的表达情况,初步研究ERK在鱼类发育中的作用.蛋白免疫杂交结果显示ERK1/2在三倍体湘云鲫的胚胎发育各个时期和组织中均有较高的表达,该结果表明ERK在鱼类发育的过程中发挥重要的作用. 展开更多

关键词 湘云鲫 细胞外调节激酶1 2(ERK1 2) 蛋白免疫印迹杂交

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山羊TNNT3基因可变剪切及其对骨骼肌细胞分化的作用

13

作者 陈媛 蔡禾 +3 位作者 李利 王林杰 仲涛 张红平 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2021年第20期4466-4477,共12页

【目的】快速骨骼肌肌钙蛋白T(fast skeletal troponin T3,TNNT3)作为肌钙蛋白(troponin,Tn)家族成员,调节横纹肌收缩、参与骨骼肌的生长发育并影响家畜肉质性状。通过获得山羊TNNT3基因的可变剪切体,分析山羊TNNT3基因可变剪切的表达... 【目的】快速骨骼肌肌钙蛋白T(fast skeletal troponin T3,TNNT3)作为肌钙蛋白(troponin,Tn)家族成员,调节横纹肌收缩、参与骨骼肌的生长发育并影响家畜肉质性状。通过获得山羊TNNT3基因的可变剪切体,分析山羊TNNT3基因可变剪切的表达模式及其在肌细胞分化中的作用,深入解析TNNT3基因在山羊骨骼肌生长发育过程中的作用机制。【方法】基于NCBI已公布山羊TNNT3基因(NM_001314210.1)和牛TNNT3基因(XM_010821200)mRNA序列,使用软件Primer Premier 6.0设计引物,以简州大耳羊胚胎期和出生后7个阶段骨骼肌为试验材料,克隆测序获得山羊TNNT3基因的CDS区可变剪切体,利用软件ORF Finder、EditSeq、DNAMAN、ClustalW和MEGA_X_10.1.8等对序列进行生物信息学分析;进一步设计实时荧光定量(real-time PCR,RT-qPCR)及半定量引物,研究TNNT3基因剪切体在7个不同组织(背最长肌(longissimus dorsi muscle,LD)、半膜肌(semimembranosus muscle,SM)、心、肝、脾、肺、肾)和7个发育阶段(胚胎期E75、E90、E105和出生后B3、B45、B150、B300)肌肉组织(背最长肌和半膜肌)中表达模式;此外,对转录本TNNT3_3进行体外编码能力检测确定其具有编码蛋白的能力,并在山羊骨骼肌卫星细胞(skeletal muscle satellite cells,MuSCs)中过表达,观察细胞形态变化以及检测标志基因的表达变化,研究其对山羊MuSCs分化的作用。【结果】①TNNT3(NM_001314210.1)CDS区全序列主要含有18个外显子,其中外显子16/17相互排斥,转录后单一表达。克隆发现山羊TNNT3基因5个新转录本(TNNT3_1—5),其外显子数分别是15、15、20、16、14。②生物信息学分析结果显示山羊TNNT3基因核苷酸序列和氨基酸序列与绵羊、牛、猪等哺乳动物具有很高的一致性,而与鱼类和爬行类动物的一致性较低,说明TNNT3基因序列在哺乳动物高度保守。③TNNT3 mRNA在背最长肌、半膜肌、心、肝、脾、肺、肾7个组织中都有表达,其� 展开更多

关键词 山羊 TNNT3 可变剪切体 荧光定量PCR 体外转录翻译 蛋白免疫印迹杂交 肌原分化

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蛋白免疫印迹杂交法研究葛根素对成骨细胞TGF-β1及Smad2/3蛋白表达的影响 被引量：12

14

作者 钱康琦 孙玉明 詹秀琴 《长春中医药大学学报》 2013年第1期18-20,共3页

目的:观察采用蛋白免疫印迹杂交(Western Bloting)法探讨葛根素通过TGF-β1及其信号转导蛋白Smad 2/3对于促进成骨细胞增殖分化机制的研究。方法:原代培养新生小鼠成骨细胞,分别用空白对照组(含10%DMEM)及3种不同浓度分别为1μg/mL,0.1... 目的:观察采用蛋白免疫印迹杂交(Western Bloting)法探讨葛根素通过TGF-β1及其信号转导蛋白Smad 2/3对于促进成骨细胞增殖分化机制的研究。方法:原代培养新生小鼠成骨细胞,分别用空白对照组(含10%DMEM)及3种不同浓度分别为1μg/mL,0.1μg/mL,0.01μg/mL的葛根素干预液处理成骨细胞。采用MTT实验法检测葛根素对成骨细胞生长的影响,Western Bloting法检测葛根素对成骨细胞TGF-β1及其信号转导蛋白Smad 2/3表达的影响。结果:不同浓度的葛根素有促进成骨细胞生长的作用,并可以提高TGF-β1及其信号转导蛋白Smad 2/3的表达,呈浓度依赖性,分别与空白对照组相比有统计学意义(P<0.05)。结论:葛根素可以通过TGF-β1及Smad 2/3信号转导途径促进成骨细胞增殖与分化。 展开更多

关键词 蛋白免疫印迹杂交(Western Bloting) 葛根素 TGF-β1 Smad2/3 成骨细胞

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褪黑素受体基因MTR1在绵羊生殖轴系的表达定位 被引量：4

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作者 康文利 魏亮亮 +3 位作者 赵淑琴 李佩华 戴丽君 刘存慧 《中国草食动物科学》 CAS 2020年第3期1-7,共7页

褪黑素(Melatonion,MT)通过分布于生殖系统不同部位的褪黑素受体(Melatonin receptor,MTR)来调节动物的生殖活动。研究褪黑素受体1型(MTR1)在繁殖期与非繁殖期动物生殖系统不同组织的分布和表达对于了解动物的生殖活动规律以及褪黑素对... 褪黑素(Melatonion,MT)通过分布于生殖系统不同部位的褪黑素受体(Melatonin receptor,MTR)来调节动物的生殖活动。研究褪黑素受体1型(MTR1)在繁殖期与非繁殖期动物生殖系统不同组织的分布和表达对于了解动物的生殖活动规律以及褪黑素对动物生殖活动的调节机制具有重要意义。应用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)、蛋白免疫印迹(Western Blotting,WB)和免疫组织化学(Immunohistochemistry,IHC)等方法研究了MT1在绵羊繁殖期与非繁殖期生殖轴系不同部位分布和表达情况。H&E染色结果表明,各组织都呈现了正常的细胞形态;IHC结果表明,MTR1在绵羊繁殖期与非繁殖期卵巢和睾丸组织中均有表达,其中繁殖期绵羊卵巢组织中颗粒细胞表达信号较强;qRT-PCR和WB法结果均表明,绵羊在繁殖期附睾组织中MTR1的相对表达量极显著高于其他组织(P<0.01),在非繁殖期下丘脑组织中MT1的相对表达量极显著高于其他组织(P<0.01)。综上,MT在绵羊繁殖期与非繁殖期生殖轴系不同部位均有表达并存在显著差异,为进一步探讨MTR在绵羊生殖轴系中的作用机制提供了科学的数据参考。 展开更多

关键词 褪黑素 生殖轴系 免疫组化 实时荧光定量PCR 蛋白质免疫印迹杂交

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