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蚕豆萎蔫病毒2的分子鉴定及RNA1组分5′末端核苷酸序列分析 被引量:4
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作者 刘炜炜 许文博 +1 位作者 刘升学 黄家风 《石河子大学学报(自然科学版)》 CAS 2012年第6期695-699,共5页
用蚕豆病毒属(Fabavirus)的兼并引物Fab5′R1F和Fab5R′1R对自然感病的4株加工番茄、1株辣椒和2株一串红病株进行RT-PCR,将扩增到的长约400bp的片段进行克隆和测序。结果发现:来自7个病株的9个病毒分离物均为蚕豆萎蔫病毒2(BBWV-2)基因... 用蚕豆病毒属(Fabavirus)的兼并引物Fab5′R1F和Fab5R′1R对自然感病的4株加工番茄、1株辣椒和2株一串红病株进行RT-PCR,将扩增到的长约400bp的片段进行克隆和测序。结果发现:来自7个病株的9个病毒分离物均为蚕豆萎蔫病毒2(BBWV-2)基因组RNA1组分5′末端的353~392个核苷酸;同源性比较表明,9个序列之间的同源性为90.4%~99.2%,与已报道的BBWV2的同源性为89.5%~95.9%。序列比对发现,BBWV2基因组RNA1组分5′末端非编码区包含了由11个碱基(AAACAGCUUUC)组成的重复序列,而分别来自加工番茄分离物XJ14-1b和一串红的分离物S12在重复序列区段内比其它所有分离物缺少了包括2个重复序列在内的36个碱基。 展开更多
关键词 蚕豆病 BBWV2 分子鉴定 5′末端 序列分析
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同时检测豇豆花叶病毒属与蚕豆病毒属病毒的通用RT-PCR检测方法 被引量:3
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作者 叶志红 廖富荣 +5 位作者 郭木金 方志鹏 陈青 陈红运 林石明 林毅 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2015年第8期1527-1537,共11页
【目的】建立一个可同时检测豇豆花叶病毒属(Comovirus)和蚕豆病毒属(Fabavirus)病毒的通用RT-PCR检测方法。【方法】通过基因组序列的多重比对分析,在其保守区域设计简并引物,用于这2个病毒属病毒的通用RT-PCR检测,并进行灵敏性、特异... 【目的】建立一个可同时检测豇豆花叶病毒属(Comovirus)和蚕豆病毒属(Fabavirus)病毒的通用RT-PCR检测方法。【方法】通过基因组序列的多重比对分析,在其保守区域设计简并引物,用于这2个病毒属病毒的通用RT-PCR检测,并进行灵敏性、特异性试验。为便于PCR产物直接测序,在简并引物中引入通用测序引物(RV-M和M13-47),并通过序列分析对病毒种类鉴定。利用该方法对来自福建柘荣的太子参病毒进行检测验证。【结果】设计一对简并引物,建立了一个用于扩增豇豆花叶病毒属和蚕豆病毒属病毒部分依赖于RNA的RNA聚合酶(Rd Rp)基因的通用RT-PCR方法。该方法成功用于检测安第斯马铃薯斑驳病毒(Ap Mo V)、蚕豆染色病毒(BBSV)、蚕豆真花叶病毒(BBTMV)、菜豆荚斑驳病毒(BPMV)、豇豆花叶病毒(CPMV)、豇豆重花叶病毒(CPSMV)、南瓜花叶病毒(Sq MV)、红三叶草斑驳病毒(RCMV)和萝卜花叶病毒(Ra MV)9种豇豆花叶病毒属病毒;蚕豆萎蔫病毒1号(BBWV1)、蚕豆萎蔫病毒2号(BBWV2)2种蚕豆病毒属病毒共计17个分离物,而不能与同亚科的线虫传多面体病毒属病毒及健康寄主植物反应,显示出良好的广谱性和特异性。在简并引物的5′端分别加入一段非互补的通用测序引物序列(RV-M和M13-47),不仅可以利用该通用测序引物进行PCR产物直接测序,而且检测灵敏度可以提高10—100倍。序列及系统发育分析表明,所扩增的序列可以把豇豆花叶病毒属和蚕豆病毒属病毒区分到种的水平。利用该方法测定了BBSV的部分Rd Rp基因序列,显示出与RCMV具有最近的亲缘关系。利用该方法在太子参中检出BBWV2。【结论】建立的通用RT-PCR方法可用于豇豆花叶病毒属和蚕豆病毒属病毒的广谱性检测,结合序列可进行病毒种类的快速鉴定,并且可能用于新病毒种类的检测鉴定。 展开更多
关键词 豇豆花叶 蚕豆病 简并引物 RT-PCR 检测鉴定
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