SYBR GreenⅠ染料法定量PCR用于人体疟原虫定量检测及虫种鉴别的研究 被引量：15

1

作者 汪圣强 周华云 +5 位作者 李宗 刘耀宝 傅旭峰 朱京京 曹俊 高琪 《中国血吸虫病防治杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第6期677-681,共5页

目的建立一种可用于疟原虫检测并同时鉴别虫种的荧光定量PCR方法。方法根据人体疟原虫18SrRNA基因序列特征,在疟原虫种特异性区域两侧的属特异性保守区设计引物,对4种人体疟原虫进行PCR扩增,将得到的扩增产物采用TA克隆法插入pGEMT载体... 目的建立一种可用于疟原虫检测并同时鉴别虫种的荧光定量PCR方法。方法根据人体疟原虫18SrRNA基因序列特征,在疟原虫种特异性区域两侧的属特异性保守区设计引物,对4种人体疟原虫进行PCR扩增,将得到的扩增产物采用TA克隆法插入pGEMT载体制备标准质粒,用于制备标准曲线进行定量分析,并进行熔解曲线分析,测定各虫种扩增产物的熔解温度。结果 4种人体疟原虫均能扩增得到特异性片断,荧光定量PCR方法中建立的标准曲线相关关系较好(相关系数r=-1.00),熔解曲线分析结果显示,4种人体疟原虫的熔解温度相差较大,分别为三日疟原虫71.3℃、恶性疟原虫72.8℃、卵形疟原虫74.6℃和间日疟原虫75.8℃。结论建立的SYBR GreenI染料法荧光定量PCR技术可同时进行人体疟原虫的定量检测和虫种鉴别。 展开更多

关键词 疟原虫 定量检测 虫种鉴别 荧光定量PCR

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SYBR GreenⅠ染料法定量PCR检测疟原虫感染及 被引量：11

2

作者 陈江涛 刘配芬 +9 位作者 钟德善 潘雪峰 杨辉 杨立业 陆志为 杨惠钿 林敏 Santiago-m Monte-Nguba Juan Carlos Salas Ehapo Urbano Monsuy Eyi 《分子诊断与治疗杂志》 2013年第4期227-231,共5页

目的评价一种可以快速定量检测疟原虫及虫种鉴别的荧光定量PCR法。方法将SYBR Green Ⅰ法与TaqMan探针法检测疟原虫进行比对,评价定量的准确性及方法的敏感度。以PCR-DNA测序法为金标准,评价SYBR Green Ⅰ法分型的准确性。结果两个方法... 目的评价一种可以快速定量检测疟原虫及虫种鉴别的荧光定量PCR法。方法将SYBR Green Ⅰ法与TaqMan探针法检测疟原虫进行比对,评价定量的准确性及方法的敏感度。以PCR-DNA测序法为金标准,评价SYBR Green Ⅰ法分型的准确性。结果两个方法的定量拷贝检测数无显著性差异(P>0.05)。SYBR Green Ⅰ法检测疟原虫的最低检测下限为1×102copy/mL至5×102copy/mL之间。与PCR-DNA测序法比较,SYBR Green Ⅰ法能准确的对感染的疟原虫虫种做准确的鉴定。结论 SYBR Green I染料法定量可同时进行人体疟原虫的定量检测和虫种鉴别,且成本低廉,操作简便快速,可以在疟疾的高发地区推广使用。 展开更多

关键词 疟疾 荧光定量PCR SYBR Green Ⅰ 虫种鉴别

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非洲赤道几内亚儿童疟疾感染实验室检测及临床诊治分析 被引量：7

3

作者 张丽蓉 潘雪峰 +2 位作者 钟德善 何颖慧 陈江涛 《中国热带医学》 CAS 2016年第2期155-158,共4页

目的评价荧光定量PCR法和显微镜镜检法在疟疾临床检测及虫种鉴定中的应用,了解不同型别儿童疟疾病例的临床特征,指导疟疾高发地区门诊对疟疾的早期识别、快速诊断和尽早治疗。方法收集在几内亚首都马拉博医院儿科就诊的150例疑似疟疾患... 目的评价荧光定量PCR法和显微镜镜检法在疟疾临床检测及虫种鉴定中的应用,了解不同型别儿童疟疾病例的临床特征,指导疟疾高发地区门诊对疟疾的早期识别、快速诊断和尽早治疗。方法收集在几内亚首都马拉博医院儿科就诊的150例疑似疟疾患儿的末梢血样,应用荧光定量PCR和镜检法对样品进行同步检测,对两种检测方法进行分析评价,并根据不同型别疟疾病例的临床资料,分析不同型别疟疾病例的临床特征。结果荧光定量PCR法检出阳性率为84.00%,镜检法检出率为74.67%,差异有统计学意义(P<0.05);且PCR法在疟原虫密度大于(l^5)×102copy/m L时,可对感染的疟原虫虫种做准确的鉴定,鉴别出恶性疟、三日疟、卵形疟、间日疟的例数分别为93、19、12、2,与镜检法的82、17、11、2例比较,在恶性疟虫种鉴别上差异有统计学意义(P<0.05),但在其他虫种鉴别中差异无明显差异(P>0.05)。该地区儿童疟疾病例以恶性疟原虫感染为主,临床主要表现为发热、贫血、咳嗽、呕吐、腹泻、抽搐等,死亡10例,其中恶性疟9例。结论在疟疾感染检测和疟原虫型别鉴定中,荧光定量PCR法较传统的镜检法在灵敏度及特异性方面更具优势,对马拉博地区疟疾病例的快速诊断及早期治疗具有重大意义。 展开更多

关键词 荧光定量PCR 非洲儿童 疟疾 虫种鉴别

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钩虫检测技术研究进展

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作者 梁家瑞 徐斌 +1 位作者 胡薇 郑彬 《中国热带医学》 CAS 2023年第4期413-419,共7页

钩虫作为土源性线虫虫种之一,其感染宿主后引起的钩虫病广泛流行于热带、亚热带的发展中国家。钩虫对人体健康造成的危害主要包括贫血、消化道相关症状等,女性感染后还可引起停经、流产,婴幼儿感染可致生长发育迟缓。随着经济发展与大... 钩虫作为土源性线虫虫种之一,其感染宿主后引起的钩虫病广泛流行于热带、亚热带的发展中国家。钩虫对人体健康造成的危害主要包括贫血、消化道相关症状等,女性感染后还可引起停经、流产,婴幼儿感染可致生长发育迟缓。随着经济发展与大规模药物管理策略的实施,人体钩虫感染率已持续下降但仍存在大量轻度感染病例,临床症状不明显,易造成漏诊、误诊。部分钩虫虫种属人畜共患寄生虫,可造成猫犬等动物的大规模感染,加剧人体钩虫感染风险。因此探寻灵敏性高并能快速鉴别钩虫虫种的检测技术至关重要。本文将对现有的钩虫检测技术进行综述并对其应用前景进行展望,为现阶段的钩虫检测提供思路。 展开更多

关键词 钩虫 检测 虫种鉴别

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旋毛虫各隔离种对小鼠的感染性研究 被引量：3

5

作者 宋铭忻 张桂红 +1 位作者 路义鑫 师东方 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2001年第2期7-8,共2页

比较研究了黑龙江省猪、犬旋毛虫及国际标准虫种 :旋毛形线虫 (Trichinella spiralis)和本地毛形线虫 (Trichinellanativa)对小鼠的感染性异同。结果表明 ,四者对小鼠的感染力存在着显著差异 ,猪旋毛虫和旋毛形线虫在小鼠体内的繁殖力指... 比较研究了黑龙江省猪、犬旋毛虫及国际标准虫种 :旋毛形线虫 (Trichinella spiralis)和本地毛形线虫 (Trichinellanativa)对小鼠的感染性异同。结果表明 ,四者对小鼠的感染力存在着显著差异 ,猪旋毛虫和旋毛形线虫在小鼠体内的繁殖力指数 (RCI)分别为 12 1.0 1± 7.80和 149.86± 7.47;而犬旋毛虫和本地毛形线虫的 RCI分别为 6 0 .98± 5 .0 5和 5 5 .15± 4.6 9。由实验结果可认为黑龙江省的猪旋毛虫相当于旋毛形线虫 ,而犬旋毛虫相当于本地毛形线虫。 展开更多

关键词 猪 犬 旋毛虫 感染性 隔离种 小鼠 繁殖力指数 虫种鉴别

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广西融水县并殖吸虫虫种的分子鉴别 被引量：1

6

作者 林睿 黎学铭 +3 位作者 胡文庆 吴忠道 陈守义 孟玮 《中国人兽共患病杂志》 CSCD 北大核心 2004年第7期624-626,共3页

用分子生物学方法鉴定广西融水县大小两种并殖吸虫囊蚴感染动物后所获成虫的虫种。在广西融水县采集溪蟹分离获得大小两种囊蚴 ,感染大鼠后获成虫 ,曾从形态上鉴定为斯氏狸殖吸虫和巨睾并殖吸虫。但用酚 -氯仿法抽提成虫基因组DNA ,PCR... 用分子生物学方法鉴定广西融水县大小两种并殖吸虫囊蚴感染动物后所获成虫的虫种。在广西融水县采集溪蟹分离获得大小两种囊蚴 ,感染大鼠后获成虫 ,曾从形态上鉴定为斯氏狸殖吸虫和巨睾并殖吸虫。但用酚 -氯仿法抽提成虫基因组DNA ,PCR扩增第二内转录间隔区 (ITS2 )基因后测序 ,用Blast程序与GenBank中的斯氏狸殖吸虫、巨睾并殖吸虫等的ITS2基因序列进行同源性检索 ,用PrimerPremier软件比较其基因差异 ,用Phylip软件的Neighbor程序绘制其基因进化树后 ,测得大小囊蚴感染所获成虫的ITS2基因片段分别为 4 37bp、4 33bp ,两者的基因同源性为 10 0 % ,与斯氏狸殖吸虫的基因同源性分别为 10 0 %、99% ,与巨睾并殖吸虫的基因同源性分别为 91%、92 % ;基因序列差异比较 ,大小囊蚴感染所获成虫与斯氏狸殖吸虫的基因序列差异为 0 ,而与巨睾并殖吸虫存在明显差异 ;绘制基因进化树 ,大小囊蚴感染所获成虫与斯氏狸殖吸虫在同一分支同一位置 ,与巨睾并殖吸虫亲缘关系较远。融水县大小囊蚴感染所获成虫与斯氏狸殖吸虫为同一物种 ,小囊蚴感染所获成虫并非巨睾并殖吸虫。 展开更多

关键词 并殖吸虫 RRNA ITS2 序列分析 虫种鉴别

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荧光定量PCR用于按蚊体内疟原虫子孢子检测的研究 被引量：3

7

作者 刘耀宝 周华云 +7 位作者 汪圣强 李菊林 朱韩武 朱国鼎 顾亚萍 王伟明 曹俊 高琪 《中国血吸虫病防治杂志》 CAS CSCD 2012年第4期445-449,共5页

目的建立一种用于按蚊体内疟原虫子孢子定量检测和虫种鉴别的荧光定量PCR方法。方法采用针对4种人体疟原虫18S rRNA基因属特异性保守区的1对引物,以疟原虫18S rRNA基因重组质粒与按蚊DNA的混合物为模板,进行反应体系和反应条件优化,验... 目的建立一种用于按蚊体内疟原虫子孢子定量检测和虫种鉴别的荧光定量PCR方法。方法采用针对4种人体疟原虫18S rRNA基因属特异性保守区的1对引物,以疟原虫18S rRNA基因重组质粒与按蚊DNA的混合物为模板,进行反应体系和反应条件优化,验证方法的特异性,并通过熔解曲线分析进行虫种鉴别。应用阴性按蚊DNA稀释的间日疟原虫18S rRNA基因重组质粒为模板制作标准曲线,并分别以质粒DNA和实验室子孢子感染阳性的按蚊DNA为模板分析建立的荧光定量PCR方法的敏感性。在反应体系中加入不同部位、不同用量按蚊DNA,以探讨按蚊DNA对检测效果的影响。结果该方法对按蚊、人血DNA均无扩增,对4种疟原虫DNA均有特异性扩增且扩增产物的熔解温度(Tm)易于区分,三日疟原虫、恶性疟原虫、卵形疟原虫和间日疟原虫的Tm值分别为71.0、72.7、73.9℃和75.9℃。标准曲线中循环阈值(Ct值)与模板浓度具有良好的相关性(相关系数r=-0.99)。最低可以检出含50拷贝的质粒DNA或32倍稀释的子孢子阳性按蚊DNA样本。按蚊DNA对荧光定量PCR反应具有抑制作用。荧光定量PCR的Ct值在实验内和实验间均具有良好的重现性。结论新建立的SYBR Green I染料荧光定量PCR方法具有较高的敏感性和特异性,可用于按蚊体内疟原虫子孢子的检测,并可同时对4种人体疟原虫进行鉴别。 展开更多

关键词 荧光定量PCR 按蚊 疟原虫子孢子 虫种鉴别

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信息交流平台在寄生虫病辅助诊断或虫种鉴别中的应用 被引量：2

8

作者 刘明社 孙希 +1 位作者 吕志跃 吴忠道 《热带医学杂志》 CAS 2017年第11期1567-1569,1572,共4页

目的总结"中国寄生虫学"腾讯交流平台进行寄生虫病辅助诊断或虫种鉴别的经验。方法收集整理在信息交流平台上讨论的可疑寄生虫病或虫种的信息,梳理交流记录并进行统计分析。结果内容涉及寄生虫病辅助诊断或虫种鉴别的时间占... 目的总结"中国寄生虫学"腾讯交流平台进行寄生虫病辅助诊断或虫种鉴别的经验。方法收集整理在信息交流平台上讨论的可疑寄生虫病或虫种的信息,梳理交流记录并进行统计分析。结果内容涉及寄生虫病辅助诊断或虫种鉴别的时间占总交流时间19.1%,交流信息量占总记录30.2%;交流内容涉及生物种类至少39个动物种类、3个微生物种类,还有植物或花粉等;交流内容至少涉及11类人体的检材样品。结论寄生虫病的诊断或鉴别诊断问题不容忽视,寄生虫学知识缺乏和检验样品取材不规范可致医疗人员误诊误治,网络交流平台有助于寄生虫病的辅助诊断或寄生虫的虫种鉴别。 展开更多

关键词 寄生虫病 诊断 虫种鉴别 信息交流平台

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检测动物棘球蚴的3种PCR方法的比较 被引量：1

9

作者 周正斌 朱淮民 《国际医学寄生虫病杂志》 CAS 2011年第3期148-153,共6页

目的比较多重PCR（multiplex PCR）、PCR一限制性片段长度多态性（PCR—RFLP）、半巢式PCR等3种检测棘球蚴的PCR方法，优化可区分多房棘球绦虫、细粒棘球绦虫羊株（G1型）和骆驼株（G6型）、石渠棘球绦虫和带科绦虫的方法。方法根据细... 目的比较多重PCR（multiplex PCR）、PCR一限制性片段长度多态性（PCR—RFLP）、半巢式PCR等3种检测棘球蚴的PCR方法，优化可区分多房棘球绦虫、细粒棘球绦虫羊株（G1型）和骆驼株（G6型）、石渠棘球绦虫和带科绦虫的方法。方法根据细粒棘球绦虫、多房棘球绦虫、石渠棘球绦虫、带科绦虫线粒体基因序列，用DNAStar软件设计半巢式PCR通用引物，建立半巢式PCR法，并与文献报道的多重PCR法、PCR—RFLP平行扩增3份巨颈绦虫囊尾蚴、48份多房棘球蚴、8份细粒棘球蚴样本DNA，比较3种检测方法的特异性和灵敏度，并以细粒棘球蚴组织DNA为模板测定3种方法的灵敏度。结果半巢式PCR法灵敏度最高，59份样本全部扩增出561bp条带，但需要测序才能确定虫种；多重PCR法能扩增出3份巨颈绦虫囊尾蚴（带绦虫）样本（3／3，100％），5份（5／8，62．5％）细粒棘球蚴样本，23份（23／48，47．9％）多房棘球蚴样本，其余28份样本为假阴性；PCR—RFLP扩增细粒棘球蚴、多房棘球蚴和巨颈绦虫囊尾蚴（带科绦虫）的阳性率与多重PCR相同，且PCR—RFLP不能区分细粒棘球绦虫G1型和带科绦虫。统计学分析显示半巢式PCR法的棘球蚴检出率高于PCR—RFLP法和多重PCR法。半巢式PCR法灵敏度分别是PCR—RFLP法和多重PCR法的1000倍和100倍，最低检出细粒棘球蚴DNA浓度为253pg／ul。结论根据不同研究目的，可组合选用多重PCR法、PCR—RFLP法、半巢式PCR法区分细粒棘球绦虫G1型、G6型，多房棘球绦虫，石渠棘球绦虫和带绦虫。 展开更多

关键词 棘球蚴 聚合酶链反应 虫种鉴别

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非洲赤道几内亚比奥科岛疟原虫感染的检测方法比较

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作者 陈江涛 刘配芬 +6 位作者 钟德善 潘雪峰 Urbano Monsuy Eyi Rocio Apicante Matesa Maximo Miko Ondo Obono Carlos Sala Ehapo 林敏 《岭南急诊医学杂志》 2017年第3期251-253,共3页

目的:比较非洲赤道几内亚比奥科岛疟原虫检测方法的差异。方法:2010年6月至2012年7月,赤道几内亚比奥科岛马拉博医院就诊的220例疟疾患者纳入研究。应用荧光定量PCR、快速免疫法和镜检法进行检测。结果:PCR法检出率显著高于镜检法(P<... 目的:比较非洲赤道几内亚比奥科岛疟原虫检测方法的差异。方法:2010年6月至2012年7月,赤道几内亚比奥科岛马拉博医院就诊的220例疟疾患者纳入研究。应用荧光定量PCR、快速免疫法和镜检法进行检测。结果:PCR法检出率显著高于镜检法(P<0.05)。三种检测方法在虫种鉴别方面无显著统计学差异(P>0.05)。结论:荧光定量PCR法可用于疟原虫感染的检测。荧光定量PCR法检出率优于镜检法。 展开更多

关键词 非洲赤道几内亚 疟原虫 疟疾 荧光定量PCR 虫种鉴别

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蛔虫卵在加藤厚涂片法检查时形态变异的观察

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作者 陈宝建 李友松 +1 位作者 张榕燕 林金祥 《海峡预防医学杂志》 CAS 2003年第2期45-46,共2页

[目的 ]了解加藤厚涂片法的玻片内蛔虫卵各种不同形态的变化与鉴别技术。 [方法 ]以透明好的加藤片逐一镜检 ,对各种蛔虫卵的形态、大小、颜色、卵壳厚薄及卵内细胞发育情况进行描述登记。 [结果 ]在蛔虫流行较为严重的邵武市与漳州市... [目的 ]了解加藤厚涂片法的玻片内蛔虫卵各种不同形态的变化与鉴别技术。 [方法 ]以透明好的加藤片逐一镜检 ,对各种蛔虫卵的形态、大小、颜色、卵壳厚薄及卵内细胞发育情况进行描述登记。 [结果 ]在蛔虫流行较为严重的邵武市与漳州市芗城区 ,在粪便标本进行加藤法检查时 ,对发现各种发育期虫卵的大小、形态与颜色的变化 ,很快地与近似虫卵相鉴别 ,并做出准确判定。 [结论 ]在加藤法中 ,各种蠕虫卵均存在形态、大小、颜色的变化 ,特别是蛔虫卵变异较大 ,应在镜检时加以注意区别。 展开更多

关键词 蛔虫卵 加藤法 虫种鉴别 形态变异

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山西省运城地区肠道寄生虫感染调查 被引量：1

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作者 席春清 杨素芬 《实用医技杂志》 1995年第4期293-293,共1页

按全国人体寄生虫分布调查方案,根据经济、文化、卫生、地理等条件,认整群分层随机抽样原则,于1987—1989年对我区抽到的一类县临猗、二类县芮城、新绛,三类县平陆共15个点的农村居民进行了调查。选点后首先抽调专业人员(流行病、检验)... 按全国人体寄生虫分布调查方案,根据经济、文化、卫生、地理等条件,认整群分层随机抽样原则,于1987—1989年对我区抽到的一类县临猗、二类县芮城、新绛,三类县平陆共15个点的农村居民进行了调查。选点后首先抽调专业人员(流行病、检验)进行现场培训。然后逐点调查,各种寄生虫的检查法和虫种鉴别均按全国方案进行。 本次共检查居民8357人,总受检率93.7%,总感染率为25.0%,临猗、芮城、新绛、平陆四县感染率为33.7%、26.8%、17.7%和16.4%;同时感染2、3、4种虫者,感染率分别为4.1%、0.4%和0.05%。 展开更多

关键词 肠道寄生虫感染 总感染率 运城地区 虫种鉴别 人体寄生虫 结肠内阿米巴 分层随机抽样 少年儿童 农村居民 肠道寄生虫病

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