虎纹捕鸟蛛毒素-I(HWTX-I)对豚鼠回肠的作用机制研究 被引量：14

1

作者 陈湘定 彭宽 梁宋平 《生命科学研究》 CAS CSCD 1998年第4期273-277,共5页

虎纹捕鸟蛛毒素ＨＷＴＸ－Ｉ（５ｍｇ／Ｌ）对电刺激豚鼠回肠引起的一过性收缩有非常明显的抑制作用．ＨＷＴＸ－Ｉ的抑制作用发生后，乙酰胆碱（ＡＣｈ）诱发的回肠收缩幅度与使用ＨＷＴＸ－Ｉ前无明显差异．在使用酚妥拉明后，ＨＷＴ... 虎纹捕鸟蛛毒素ＨＷＴＸ－Ｉ（５ｍｇ／Ｌ）对电刺激豚鼠回肠引起的一过性收缩有非常明显的抑制作用．ＨＷＴＸ－Ｉ的抑制作用发生后，乙酰胆碱（ＡＣｈ）诱发的回肠收缩幅度与使用ＨＷＴＸ－Ｉ前无明显差异．在使用酚妥拉明后，ＨＷＴＸ－Ｉ仍能抑制豚鼠回肠的一过性收缩． 展开更多

关键词 虎纹捕鸟蛛毒素 递质释放 神经毒素 回肠

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虎纹捕鸟蛛毒素-Ⅰ-(HWTX-Ⅰ)28肽类似物的化学合成与活性鉴定 被引量：12

2

作者 廖黔宁 罗静初 +2 位作者 周培爱 顾孝诚 梁宋平 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 1999年第5期756-761,共6页

虎纹捕鸟蛛毒素-(huwentoxin-,HWTX-)是从我国虎纹捕鸟蛛毒素中分离纯化得到的一种多肽类神经毒素.该多肽分子由33个氨基酸残基组成,含三对二硫键.其一级结构和三级结构均已测定.弄清该毒素的活性部位,是研究其结构功能关系的基础.用固... 虎纹捕鸟蛛毒素-(huwentoxin-,HWTX-)是从我国虎纹捕鸟蛛毒素中分离纯化得到的一种多肽类神经毒素.该多肽分子由33个氨基酸残基组成,含三对二硫键.其一级结构和三级结构均已测定.弄清该毒素的活性部位,是研究其结构功能关系的基础.用固相Fmoc化学合成的方法,合成了虎纹捕鸟蛛-的28肽类似物.该突变体去掉了天然毒素分子N端的Alal和C端的Lys30-Trp31-Lys32-Leu33共5个残基.用氧化还原型谷胱甘肽法完成二硫键配对,并用HPLC进行纯化,所得突变体与天然HWTX-的紫外光谱相似.质谱鉴定确认合成产物正确,分子量为3124,浓度为1×10-5g/ml的突变体能可逆阻断小白鼠膈神经-膈肌的接头传递,阻断时间为60～70min.与天然毒素比较,活性有所下降.结果说明HWTX-的N端、C端残基对其生物活性有一定影响,但不是位于活性中心的重要残基.由结果推测。 展开更多

关键词 虎纹捕鸟蛛毒素 固相多肽 合成 活性 蜘蛛毒素

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虎纹捕鸟蛛毒素-Ⅰ突变体K3A-HWTX-Ⅰ的化学合成与生理活性分析 被引量：11

3

作者 王贤纯 梁宋平 罗泽民 《生命科学研究》 CAS CSCD 1998年第2期87-92,102,共7页

采用固相Ｆｍｏｃ法在自制自动蛋白质化学工作站上合成了其第３位赖氨酸（Ｋ３）被丙氨酸（Ａ）取代的虎纹捕鸟蛛毒素－Ⅰ的突变体Ｋ３Ａ－ＨＷＴＸ－Ⅰ．合成的突变体用Ｅｄｍａｎ降解和电喷雾质谱进行鉴定．Ｋ３Ａ－ＨＷＴＸ－Ⅰ经谷... 采用固相Ｆｍｏｃ法在自制自动蛋白质化学工作站上合成了其第３位赖氨酸（Ｋ３）被丙氨酸（Ａ）取代的虎纹捕鸟蛛毒素－Ⅰ的突变体Ｋ３Ａ－ＨＷＴＸ－Ⅰ．合成的突变体用Ｅｄｍａｎ降解和电喷雾质谱进行鉴定．Ｋ３Ａ－ＨＷＴＸ－Ⅰ经谷胱甘肽系统进行氧化复性后通过离子交换和反相ＨＰＬＣ纯化．活性分析结果表明，Ｋ３被Ａ取代后ＨＷＴＸ－Ⅰ的生物活性下降了８０％。 展开更多

关键词 蜘蛛 虎纹捕鸟蛛毒素 突变体 固相多肽合成

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虎纹捕鸟蛛毒素对脑缺血模型大鼠海马肿瘤坏死因子凋亡通路的影响 被引量：7

4

作者 王一蓉 毛海峰 陈嘉勤 《中国组织工程研究》 CAS CSCD 2014年第36期5813-5818,共6页

背景:虎纹捕鸟蛛毒素经离子通道分析技术证明是一种作用于突触前膜的N型钙离子通道阻断剂。目的:观察新型钙通道拮抗剂虎纹捕鸟蛛毒素对全脑缺血再灌注损伤模型大鼠海马组织肿瘤坏死因子凋亡通路中肿瘤坏死因子α、肿瘤坏死因子受体Ⅰ... 背景:虎纹捕鸟蛛毒素经离子通道分析技术证明是一种作用于突触前膜的N型钙离子通道阻断剂。目的:观察新型钙通道拮抗剂虎纹捕鸟蛛毒素对全脑缺血再灌注损伤模型大鼠海马组织肿瘤坏死因子凋亡通路中肿瘤坏死因子α、肿瘤坏死因子受体Ⅰ、肿瘤坏死因子受体相关死亡结构域、Fas相关死亡结构域蛋白、Caspase 8表达的影响。方法:采用Pulsinelli"四血管阻断法"构建全脑缺血结合蛛网膜下腔置管大鼠模型,通过留置的PE10管注入虎纹捕鸟蛛毒素或生理盐水。应用电镜、RT-PCR实验技术检测全脑缺血再灌注损伤大鼠海马CA1区锥体细胞超微结构和胞内线粒体形态变化及对海马组织中肿瘤坏死因子α、肿瘤坏死因子受体Ⅰ、肿瘤坏死因子受体相关死亡结构域、Fas相关死亡结构域蛋白、Caspase 8等肿瘤坏死因子凋亡通路相关因子基因表达。结果与结论:虎纹捕鸟蛛毒素能维持全脑缺血再灌注脑损伤大鼠线粒体基本形态且能不同程度降低肿瘤坏死因子凋亡通路中促凋亡因子肿瘤坏死因子α、肿瘤坏死因子受体Ⅰ、肿瘤坏死因子受体相关死亡结构域、Fas相关死亡结构域蛋白、Caspase 8 mRNA表达。提示天然活性多肽虎纹捕鸟蛛毒素作为一种新型N-型电压依赖性钙通道阻断剂,能有效阻断胞外Ca2+的大量内流,使细胞内游离钙降低,减少由于细胞内钙超载而引起的一系列病理损害,从而保护神经细胞,减轻缺血缺氧海马神经细胞的损伤。 展开更多

关键词 实验动物 组织构建 虎纹捕鸟蛛毒素 全脑缺血再灌注 脑缺血模型大鼠 肿瘤坏死因子α 肿瘤坏死因子受体Ⅰ 肿瘤坏死因子受体相关死亡结构域 FAS相关死亡结构域蛋白 Caspase 8 国家自然科学基金

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虎纹捕鸟蛛毒素的抗菌活性探讨 被引量：2

5

作者 徐辉明 梁宋平 +2 位作者 李敏 黄沙礼 赵宗先 《生物技术》 CAS CSCD 2001年第2期9-11,共3页

从虎纹捕鸟蛛粗毒中分离得到 2种多肽毒素 ,huwentoxin -Ⅰ和huwentoxin -Ⅱ。抗菌实验结果表明 ,这 2种多肽毒素能抑制革兰氏阴性菌、革兰氏阳性菌及啤酒酵母菌的生长 。

关键词 虎纹捕鸟蛛毒素 抗菌作用 协同作用

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虎纹捕鸟蛛毒素-Ⅰ突变体A1Y-HWTX-Ⅰ的固相合成和生物学活性测定 被引量：17

6

作者 王贤纯 梁宋平 +1 位作者 罗泽民 public.cs.hn.cn 《中国生物化学与分子生物学报》 CSCD 2000年第3期357-362,共6页

用芴甲氧羰基 (Fmoc)固相多肽合成的方法在自制自动蛋白质化学工作站上合成了用酪氨酸 (Y)替代虎纹捕鸟蛛毒素 - (HWTX- )第一位丙氨酸 (A1 )的突变体 A1 Y- HWTX- .合成的突变体用 Edman降解和电喷雾质谱法进行鉴定 .活性分析结果证... 用芴甲氧羰基 (Fmoc)固相多肽合成的方法在自制自动蛋白质化学工作站上合成了用酪氨酸 (Y)替代虎纹捕鸟蛛毒素 - (HWTX- )第一位丙氨酸 (A1 )的突变体 A1 Y- HWTX- .合成的突变体用 Edman降解和电喷雾质谱法进行鉴定 .活性分析结果证明 ,合成的 A1 Y- HWTX- 在含有谷胱甘肽的缓冲体系中氧化折叠后显示出与天然 HWTX- 完全相同的生物学活性 ,提示 Y替代 HWTX- 的 A1后并不明显影响 HWTX- 的活性部位和空间构象 ;A1与 HWTX- 生物学活性无关 .此外 ,将 Y引入 HWTX- 分子有助于利用碘标记方法研究 HWTX- 展开更多

关键词 虎纹捕鸟蛛毒素-Ⅰ 突变体 固相合成 生物活性

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重组虎纹捕鸟蛛毒素-Ⅰ在巴氏毕赤酵母中的表达及纯化 被引量：11

7

作者 聂东宋 李敏 +2 位作者 徐辉明 何宁佳 梁宋平 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第2期172-177,共6页

虎纹捕鸟蛛毒素Ⅰ是从虎纹捕鸟蛛粗毒中分离纯化 ,具有镇痛活性的肽类神经毒素。对巴氏毕赤酵母生产的重组HWTX Ⅰ进行多步纯化 ,首先将分泌到培养上清的rHWTX Ⅰ进行 90 %饱和度的 (NH4) 2 SO4沉淀 ,再用截留分子量 3kD的滤膜脱盐 ,再... 虎纹捕鸟蛛毒素Ⅰ是从虎纹捕鸟蛛粗毒中分离纯化 ,具有镇痛活性的肽类神经毒素。对巴氏毕赤酵母生产的重组HWTX Ⅰ进行多步纯化 ,首先将分泌到培养上清的rHWTX Ⅰ进行 90 %饱和度的 (NH4) 2 SO4沉淀 ,再用截留分子量 3kD的滤膜脱盐 ,再用CM阳离子交换层析分离 ,最后用C1 8反相层析脱盐纯化 ,真空干燥后得到的rHWTX Ⅰ经TricineSDS PAGE ,质谱鉴定 ,氨基酸组成分析 ,N 端序列测定及活性鉴定 ,证明已获得高纯度的重组HWTX Ⅰ ,摇瓶表达量约为 80mg L ,约占总分泌量的 2 3.6 % ,并对摇瓶发酵条件进行了优化 ,为利用基因工程方法生产HWTX 展开更多

关键词 重组虎纹捕鸟蛛毒素-I rHWTX-I 分泌表达 分离纯化 巴氏毕赤酵母

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虎纹捕鸟蛛毒素-I单残基突变体R20 A-HWTX-I的化学合成与性质分析 被引量：8

8

作者 王贤纯 梁宋平 罗泽民 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2000年第4期490-494,共5页

虎纹捕鸟蛛毒素 Ⅰ (Huwentoxin Ⅰ ,HWTX Ⅰ )是从虎纹捕鸟蛛 (Selenocosmiahuwena)的粗毒中分离出的一种多肽类神经毒素。为了探明该毒素分子中唯一的Arg残基与其生物学活性的关系 ,运用固相多肽合成技术和Fmoc化学直接构建了Ala取代... 虎纹捕鸟蛛毒素 Ⅰ (Huwentoxin Ⅰ ,HWTX Ⅰ )是从虎纹捕鸟蛛 (Selenocosmiahuwena)的粗毒中分离出的一种多肽类神经毒素。为了探明该毒素分子中唯一的Arg残基与其生物学活性的关系 ,运用固相多肽合成技术和Fmoc化学直接构建了Ala取代HWTX Ⅰ第 2 0位Arg(R2 0 )的突变体R2 0A HWTX Ⅰ ;将合成的突变体置于含谷胱甘肽的缓冲体系中氧化复性后用反相和特殊设计的离子交换HPLC纯化 ,并对之进行氨基酸组成、Edman降解与质谱分析。活性测定结果表明 ,HWTX Ⅰ分子中的R2 0被A取代后 ,活性下降了 92 % ,提示R2 0是与活性密切相关的重要残基。 展开更多

关键词 虎纹捕鸟蛛毒素-Ⅰ 突变体 蛋白质工程 化学合成

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HWTX-I对全脑缺血大鼠脑组织自由基及海马神经元损伤的保护作用研究 被引量：9

9

作者 毛海峰 陈嘉勤 +4 位作者 梁宋平 周鸿雁 王一蓉 刘仁义 张沙骆 《北京体育大学学报》 CSSCI 北大核心 2007年第3期351-353,共3页

目的:观察虎纹捕鸟蛛毒素(HWTX-I)对全脑缺血再灌注大鼠海马CA1区锥体细胞Nissl染色形态学变化、脑组织超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)活力、丙二醛(MDA)浓度变化的影响,探讨其改善全脑缺血再灌注损伤的机制,为颅脑损伤的临床治... 目的:观察虎纹捕鸟蛛毒素(HWTX-I)对全脑缺血再灌注大鼠海马CA1区锥体细胞Nissl染色形态学变化、脑组织超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)活力、丙二醛(MDA)浓度变化的影响,探讨其改善全脑缺血再灌注损伤的机制,为颅脑损伤的临床治疗提供新的有效治疗手段。方法:SD大鼠随机分为假手术组、生理盐水组及三组用药组,采用改良的Pulsinelli四血管阻断全脑缺血损伤模型结合蛛网膜下腔置管术,对大鼠海马锥体细胞进行Nissl染色及测定各组大鼠脑组织SOD、CAT活力及MDA浓度。结果:1)HWTX-I能明显减轻全脑缺血大鼠海马锥体细胞的损伤。2)HWTX-I能使全脑缺血再灌注大鼠脑组织SOD、CAT活力明显升高,MDA浓度明显降低。结论:HWTX-I对全脑缺血再灌注等引起的大鼠大脑神经细胞损伤有明显的保护作用。 展开更多

关键词 虎纹捕鸟蛛毒素(HWTX-Ⅰ) 全脑缺血再灌注 超氧化物歧化酶(SOD) 过氧化氢酶(CAT) 丙二醛 (MDA)

原文传递

重组虎纹捕鸟蛛毒素Ⅺ用pMAL-p2X载体的表达和纯化 被引量：4

10

作者 刘君梁 刁建波 +2 位作者 唐建洲 谢锦云 梁宋平 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第1期39-44,共6页

虎纹捕鸟蛛毒素Ⅺ基因通过PCR扩增 ,插入pMAL p2X载体 ,基因 5′端插入凝血酶切割位点 .在大肠杆菌中经IPTG诱导高效分泌表达 .表达产物N端含麦芽糖结合蛋白 ,融合蛋白被分泌到大肠杆菌的胞间质 .经冷渗透休克后 ,透析脱盐 ,用凝血酶切... 虎纹捕鸟蛛毒素Ⅺ基因通过PCR扩增 ,插入pMAL p2X载体 ,基因 5′端插入凝血酶切割位点 .在大肠杆菌中经IPTG诱导高效分泌表达 .表达产物N端含麦芽糖结合蛋白 ,融合蛋白被分泌到大肠杆菌的胞间质 .经冷渗透休克后 ,透析脱盐 ,用凝血酶切割融合蛋白 ,再经SuperdexTM75分子筛柱层析、高效液相色谱反相C18柱纯化 ,得到重组虎纹捕鸟蛛毒素Ⅺ .质谱分析表明 ,rHWTX Ⅺ系正确表达产物 ,重组HWTX Ⅺ表现出与天然HWTX Ⅺ一致的生物学活性 . 展开更多

关键词 虎纹捕鸟蛛毒素Ⅺ pMAL—p2X 凝血酶 胰蛋白酶抑制剂

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部分还原和分步序列测定法定位虎纹捕鸟蛛毒素-Ⅳ二硫键 被引量：7

11

作者 刘中华 梁宋平 《高等学校化学学报》 SCIE EI CAS CSCD 北大核心 2003年第10期1815-1819,共5页

结合部分还原和分步序列测定法确定了虎纹捕鸟蛛毒素 - 的二硫键配对方式 .在 p H=3和 40℃的条件下与还原剂三羧甲基磷酸 ( TCEP)反应 1 0 min,利用 RP-HPLC分离并分别收集含有一对和两对二硫键被还原的中间体 ,分别与 0 .5 mol/L碘乙... 结合部分还原和分步序列测定法确定了虎纹捕鸟蛛毒素 - 的二硫键配对方式 .在 p H=3和 40℃的条件下与还原剂三羧甲基磷酸 ( TCEP)反应 1 0 min,利用 RP-HPLC分离并分别收集含有一对和两对二硫键被还原的中间体 ,分别与 0 .5 mol/L碘乙酰胺溶液 ( p H=8.3 )反应 1 min,使游离巯基烷基化后 ,测定各中间体的氨基酸序列 ,从而确定虎纹捕鸟蛛毒素 - 的 3对二硫键分别为 Cys2 -Cys1 7,Cys9-Cys2 4和Cys-Cys 3 1 ( 1 -4,2 -5和 3 -6) . 展开更多

关键词 部分还原 分步序列 测定法 定位 虎纹捕鸟蛛毒素-Ⅳ 二硫键 三羧甲基磷酸 毒素多肽

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虎纹捕鸟蛛毒素-Ⅰ cDNA克隆及序列 被引量：1

12

作者 李敏 周政 梁宋平 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第1期51-55,共5页

从中国珍稀毒蛛种虎纹捕鸟蛛 (Selenocosmia huwena)毒腺中分离纯化的虎纹捕鸟蛛毒素 - (Huwentoxin ,HWTX- ) ,其一级结构、二级结构和溶液构象均已阐明 ,生理功能实验已证实 HWTX- 是一种作用于突触前膜的神经毒素和高阈值钙通道抑... 从中国珍稀毒蛛种虎纹捕鸟蛛 (Selenocosmia huwena)毒腺中分离纯化的虎纹捕鸟蛛毒素 - (Huwentoxin ,HWTX- ) ,其一级结构、二级结构和溶液构象均已阐明 ,生理功能实验已证实 HWTX- 是一种作用于突触前膜的神经毒素和高阈值钙通道抑制剂 .为深入开展对 HWTX- 的应用研究 ,根据 HWTX- 多肽氨基酸序列 ,设计其 N-端、C-端和中间段 3组简并引物 (引物 、引物 和引物 ) .从虎纹捕鸟蛛毒腺提取制备 m RNA,逆转录合成 c DNA.以引物 和引物 为引物 ,采用 PCR方法对虎纹捕鸟蛛毒腺总 c DNA进行简并引物扩增 ,得到两条相对特异性的 DNA片段 ,产物直接与 PCR克隆载体 p UC- T连接 .重组子经原引物再次 PCR扩增和同位素标记引物 进行 Southern分子杂交鉴定 .对 4个重组子测序结果表明 ,有 1个重组子所对应的氨基酸顺序与 HWTX- 一致 ,Gen Bank数据检索说明 HWTX- c DNA编码序列确实是一个从未报道的序列 .本研究结果为 HWTX- 在真核细胞表达 ,大量获取蜘蛛毒素组分奠定了基础 . 展开更多

关键词 蜘蛛 虎纹捕鸟蛛毒素-Ⅰ CDNA序列 克隆

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虎纹捕鸟蛛毒素-Ⅵ的分离纯化与鉴定 被引量：1

13

作者 易庭芳 胡卫军 梁宋平 《Zoological Research》 CAS CSCD 北大核心 2002年第6期463-466,共4页

通过离子交换及反相HPLC ,从虎纹捕鸟蛛毒液中分离得到 1种新的哺乳类神经毒素 ,命名为虎纹捕鸟蛛毒素 -Ⅵ (Huwentoxin Ⅵ ,HWTX Ⅵ )。MALDI TOF质谱仪分析及氨基酸序列分析表明该多肽毒素分子量为 4 44 0 18kDa。序列为H2 N CIGEGVPC... 通过离子交换及反相HPLC ,从虎纹捕鸟蛛毒液中分离得到 1种新的哺乳类神经毒素 ,命名为虎纹捕鸟蛛毒素 -Ⅵ (Huwentoxin Ⅵ ,HWTX Ⅵ )。MALDI TOF质谱仪分析及氨基酸序列分析表明该多肽毒素分子量为 4 44 0 18kDa。序列为H2 N CIGEGVPCDENDPRCCSGLVVLKKTLHGIWIKSSYCYKCK COOH。其中 6个Cys形成 3对二硫键。小鼠脑内注射实验表明 ,HWTX Ⅵ对神经系统具有明显的致瘫作用 ,这种致瘫作用又具有可逆性。 展开更多

关键词 神经毒素 虎纹捕鸟蛛毒素-Ⅵ 分离纯化 鉴定

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毕赤酵母表达HWTX-Ⅰ的不均一性分析 被引量：4

14

作者 聂东宋 周延凯 +1 位作者 曹佐英 刘宇 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第2期215-219,共5页

为了寻找毕赤酵母表达虎纹捕鸟蛛毒素-Ⅰ(HWTX-Ⅰ)时产生不均一性表达产物的原因,应用阳离子交换层析、反相HPLC、Tricine SDS-PAGE电泳、质谱等技术,对基因工程菌Pichia pastorisGS115/HWTX-Ⅰ表达的不均一产物进行了分离、纯化和鉴定... 为了寻找毕赤酵母表达虎纹捕鸟蛛毒素-Ⅰ(HWTX-Ⅰ)时产生不均一性表达产物的原因,应用阳离子交换层析、反相HPLC、Tricine SDS-PAGE电泳、质谱等技术,对基因工程菌Pichia pastorisGS115/HWTX-Ⅰ表达的不均一产物进行了分离、纯化和鉴定,并对不均一产物的N端和C端进行测序,结果表明表达产物的不均一性主要体现在重组HWTX-Ⅰ的N端信号肽加工的不完全以及C末端的内部降解。生物学活性分析表明该不均一产物的活性仅为天然HWTX-Ⅰ活性的30%。同时,对如何避免不均一性表达产物的产生提出了相应的对策。 展开更多

关键词 毕赤酵母 重组虎纹捕鸟蛛毒素-Ⅰ 不均一性 基因工程

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虎纹捕鸟蛛毒素-ILys13突变对生物学活性的影响 被引量：4

15

作者 王贤纯 梁宋平 《自然科学进展》 北大核心 2004年第2期227-231,共5页

从虎纹捕鸟蛛Selenocosmia(Ornithoctonus)huwena的粗毒中分离纯化出来的虎纹捕鸟蛛毒素-Ⅰ(HWTX-Ⅰ)是一种多肽类神经毒素。为了进一步探明其结构与功能的关系,采用以固相多肽合成为核心技术的蛋白质工程方法直接构建了Ala取代Lys13的... 从虎纹捕鸟蛛Selenocosmia(Ornithoctonus)huwena的粗毒中分离纯化出来的虎纹捕鸟蛛毒素-Ⅰ(HWTX-Ⅰ)是一种多肽类神经毒素。为了进一步探明其结构与功能的关系,采用以固相多肽合成为核心技术的蛋白质工程方法直接构建了Ala取代Lys13的单残基突变体K13A-HWTX-Ⅰ,并同时合成了HWTX-Ⅰ的全序列sHWTX-Ⅰ作实验对照。合成产物经质谱和序列分析鉴定无误后在含谷胱甘肽的缓冲体系中氧化折叠并用离子交换和RP-HPLC纯化。活性测定结果表明,氧化复性后,sHWTX-Ⅰ与天然HWTX-Ⅰ的生物学活性完全相同,而K13A-HWTX-I的生物学活性下降了87％,提示Lys13是与HWTX-Ⅰ的生物学活性密切相关的重要残基。 展开更多

关键词 虎纹捕鸟蛛毒素-I Lys13突变 生物学活性 固相多肽合成 蛋白质工程 多肽类神经毒素

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虎纹捕鸟蛛毒素Ⅴ的二硫键定位分析 被引量：4

16

作者 张鹏飞 肖顺勇 梁宋平 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2004年第6期550-555,共6页

虎纹捕鸟蛛毒素Ⅴ是从虎纹捕鸟蛛毒液中分离得到的一种昆虫毒素 .它含有 35个氨基酸残基 ,其中 6个半胱氨酸形成三对二硫键 .首先采用多酶将天然的肽链裂解后 ,通过MALDI TOF质谱分析酶解肽段 ,推断出 1对二硫键位于Cys9 Cys2 1,然后利... 虎纹捕鸟蛛毒素Ⅴ是从虎纹捕鸟蛛毒液中分离得到的一种昆虫毒素 .它含有 35个氨基酸残基 ,其中 6个半胱氨酸形成三对二硫键 .首先采用多酶将天然的肽链裂解后 ,通过MALDI TOF质谱分析酶解肽段 ,推断出 1对二硫键位于Cys9 Cys2 1,然后利用改进的部分还原分步测序法 ,确定虎纹捕鸟蛛毒素Ⅴ的另外 2对二硫键的配对方式为Cys2 Cys16和Cys15 Cys2 8.因此 ,虎纹捕鸟蛛毒素Ⅴ的 3对二硫键分别以Cys2 Cys16 ,Cys9 Cys2 1,Cys15 Cys2 8(即 1 4、 2 5和 3 6 )的方式配对 . 展开更多

关键词 虎纹捕鸟蛛毒素V 二硫键定位 三羧甲基磷酸(TCEP)

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重组虎纹捕鸟蛛毒素Ⅰ用pET_(31)b载体的表达和纯化 被引量：2

17

作者 刁建波 刘君梁 梁宋平 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第2期195-200,共6页

化学全合成虎纹捕鸟蛛毒素 Ⅰ (HWTX Ⅰ )基因在大肠杆菌中被表达 ,采用pET31b载体 ,表达产物N端为大肠杆菌酮基立体异构酶的融合蛋白 ,经亲和连续 6个组氨酸的亲和柱层析后 ,溴化氰切割融合蛋白 ,再经高效液相色谱反相柱纯化 ,得到了... 化学全合成虎纹捕鸟蛛毒素 Ⅰ (HWTX Ⅰ )基因在大肠杆菌中被表达 ,采用pET31b载体 ,表达产物N端为大肠杆菌酮基立体异构酶的融合蛋白 ,经亲和连续 6个组氨酸的亲和柱层析后 ,溴化氰切割融合蛋白 ,再经高效液相色谱反相柱纯化 ,得到了重组虎纹捕鸟蛛毒素Ⅰ .质谱分析及N端测序表明 ,rHWTX Ⅰ系正确表达产物 .还原复性的rHWTX Ⅰ表现出与天然HWTX 展开更多

关键词 虎纹捕鸟蛛毒素Ⅰ 基因工程 基因克隆 基因表达 融合蛋白 纯化 pET31b载体 生物学活性

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虎纹捕鸟蛛毒素XI(HWTX-XI)突变体的真核表达及活性鉴定 被引量：3

18

作者 王凡 王小娟 +1 位作者 宁蔚文 刘中华 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第2期262-268,共7页

虎纹捕鸟蛛毒素-XI(HWTX-XI)是从虎纹捕鸟蛛粗毒中分离的含55个氨基酸残基的蛋白质,兼有胰蛋白酶抑制活性和电压门控钾离子通道抑制活性。通过突变HWTX-XI上的钾离子通道抑制活性关键氨基酸残基设计了2个突变体(分别突变以下氨基酸残基:... 虎纹捕鸟蛛毒素-XI(HWTX-XI)是从虎纹捕鸟蛛粗毒中分离的含55个氨基酸残基的蛋白质,兼有胰蛋白酶抑制活性和电压门控钾离子通道抑制活性。通过突变HWTX-XI上的钾离子通道抑制活性关键氨基酸残基设计了2个突变体(分别突变以下氨基酸残基:R5I,R10T,R25A和R5I,R25A),利用pVT102U/α表达载体在酿酒酵母S78中成功表达并获得了高纯度的重组蛋白质;通过分光光度计比色法、膜片钳技术和小鼠脑室注射分别比较三者的胰蛋白酶和钾通道抑制活性以及动物毒性,结果显示:HWTX-XI突变体与HWTX-XI有相同胰蛋白酶抑制活性,但其钾通道活性降低约30倍;小鼠脑室注射HWTX-XI的半致死剂量为247.3μg/kg体重,而突变体在剂量达到25 mg/kg时仍未见明显毒性反应。获得了胰蛋白酶抑制活性保留,但钾通道抑制活性和动物毒性大大降低的突变体,为HWTX-XI胰蛋白酶抑制活性的应用奠定了基础。 展开更多

关键词 虎纹捕鸟蛛毒素XI 真核表达 突变体 胰蛋白酶抑制活性 钾离子通道抑制活性

原文传递

两种蜘蛛多肽毒素的电喷雾电离质谱法序列分析 被引量：2

19

作者 范春明 王贤纯 梁宋平 《质谱学报》 EI CAS CSCD 2005年第2期65-70,共6页

虎纹捕鸟蛛毒素-(HWTX-)和敬钊缨毛蛛毒素-(JZTX-)是两种蜘蛛多肽类神经毒素。它们的大部分氨基酸序列已由Edman降解法测出,但仍有部分序列由于某些原因未能确定。为了鉴定未知部分的序列,利用电喷雾电离-四极杆-飞行时间质谱(ESI-Qq-TO... 虎纹捕鸟蛛毒素-(HWTX-)和敬钊缨毛蛛毒素-(JZTX-)是两种蜘蛛多肽类神经毒素。它们的大部分氨基酸序列已由Edman降解法测出,但仍有部分序列由于某些原因未能确定。为了鉴定未知部分的序列,利用电喷雾电离-四极杆-飞行时间质谱(ESI-Qq-TOF-MS)对两种蜘蛛毒素的酶解产物进行分析,获得其酶解片段的一级(MS)和二级(MS/MS)图谱,在用软件和手工的方式对含有未知序列的肽段进行解析后,得到未知部分确切氨基酸序列。研究表明:利用质谱的从头测序(denovosequencing)方法获得HWTX-和JZTX-完整的氨基酸序列。该方法在蛋白质和多肽的结构分析和鉴定与传统方法相比具有高灵敏度和快速的优势,是对传统Edman化学降解法的一个很好的补充。 展开更多

关键词 多肽毒素 电喷雾电离-四极杆-飞行时间质谱(ESI—Qq—TOF—MS) 虎纹捕鸟蛛毒素-Ⅵ 敬钊缨毛蛛毒素-Ⅷ 从头测序

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ω-芋螺毒素MVIIA/虎纹捕鸟蛛毒素-I嵌合体HM-1227的合成及活性测定 被引量：1

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作者 汤辉 王贤纯 梁宋平 《湖南师范大学自然科学学报》 EI CAS 北大核心 2002年第3期68-71,共4页

用Fmoc固相多肽合成的方法手工合成了一种ω 芋螺毒素MVIIA和虎纹捕鸟蛛毒素 I的嵌合体HM 1 2 2 7,经过RP HPLC纯化和氧化复性 ,小鼠隔神经 隔肌标本的阻断实验显示此嵌合体能实现二硫键完全配对与稳定折叠并具有微弱的神经毒活性 .实... 用Fmoc固相多肽合成的方法手工合成了一种ω 芋螺毒素MVIIA和虎纹捕鸟蛛毒素 I的嵌合体HM 1 2 2 7,经过RP HPLC纯化和氧化复性 ,小鼠隔神经 隔肌标本的阻断实验显示此嵌合体能实现二硫键完全配对与稳定折叠并具有微弱的神经毒活性 .实验结果表明 ,ω CtxMVIIA和HWTX I的分子框架稳定 ,部分序列交换后仍能实现二硫键配对与折叠 。 展开更多

关键词 HM-1227 活性测定 ω-芋螺毒素MVIIA 虎纹捕鸟蛛毒素-I 嵌合体 固相多肽合成 多肽类神经毒素 蛋白质工程

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