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鸡胚来源的外泌体不同提取方法比较 被引量：1
1
作者 李莹 瞿浩 +5 位作者 何静怡 刘天飞 王劼 王艳 舒鼎铭 罗成龙 《广东农业科学》 CAS 2020年第5期93-101,共9页
【目的】鸡胚蛋可用于改善机体免疫功能,研究不同提取方法对鸡胚组织中外泌体的分离效果,有利于深入解析鸡胚蛋生理功能。【方法】收集13胚龄惠阳胡须鸡胚蛋12枚(3组,4枚/组),通过酶消化、差速离心及过滤等前处理后将所获样品分为4份,... 【目的】鸡胚蛋可用于改善机体免疫功能,研究不同提取方法对鸡胚组织中外泌体的分离效果,有利于深入解析鸡胚蛋生理功能。【方法】收集13胚龄惠阳胡须鸡胚蛋12枚(3组,4枚/组),通过酶消化、差速离心及过滤等前处理后将所获样品分为4份,通过超速离心法(UC)、蔗糖垫超速离心法(SDUC)、膜亲和法(exoEasy)以及聚乙二醇沉淀法(ExoQuick)4种方法分离提取外泌体,分别标记A^D。比较BCA蛋白浓度测定、透射电镜、纳米流式和标志蛋白流式检测等4种方法获得的外泌体蛋白浓度、形态、大小及其标志性蛋白表达情况。【结果】4种方法均能获得符合外泌体直径分布(40~200 nm)、具有外泌体典型微囊结构特征的囊泡物质,外泌体蛋白浓度和颗粒浓度由高到低依次为D>C>A>B,但D样品中含有其他聚团杂质蛋白;表面标志蛋白CD63、CD81阳性率变化趋势为B>D>C>A。【结论】综合考量外泌体的纯度、形态、大小及其标志性蛋白表达情况,根据供试组织样品来源、试验条件和目的可优选蔗糖垫超速离心法或膜亲和法,如需高纯度外泌体可首选蔗糖垫超速离心法,样品稀有或不具备超速离心设备则选用膜亲和法。 展开更多
关键词 外泌体 超速离心 蔗糖密度 商业化试剂盒 鸡胚 分离方法
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从鼠粪中分离纯化微小隐孢子虫卵囊方法的研究 被引量：17
2
作者 陈甫 黄克和 《中国寄生虫学与寄生虫病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第3期219-222,共4页
目的探索一种实用、纯度和回收率高且卵囊活力强的分离纯化微小隐孢子虫卵囊的方法。方法分别采用经典的不连续蔗糖密度梯度离心法、改良饱和盐水漂浮法、氯化铯(CsCl)密度梯度离心法和Percoll密度梯度离心法分离纯化C57BL/6小鼠粪中隐... 目的探索一种实用、纯度和回收率高且卵囊活力强的分离纯化微小隐孢子虫卵囊的方法。方法分别采用经典的不连续蔗糖密度梯度离心法、改良饱和盐水漂浮法、氯化铯(CsCl)密度梯度离心法和Percoll密度梯度离心法分离纯化C57BL/6小鼠粪中隐孢子虫卵囊。并将4种方法分离纯化获得的卵囊各105体外感染牛输卵管上皮细胞(BFTE),48h和72h后油镜下观察各分离法卵囊的发育情况,以比较卵囊的纯度和活性。结果经典的不连续蔗糖密度梯度离心法分离获得的卵囊数[(2.86±0.08)×107]与改良饱和盐水漂浮法[(2.88±0.15)×107]无明显差异(P>0.05),但高于Percoll密度梯度离心法[(1.52±0.08)×107](P<0.01)和CsCl密度梯度离心法[(2.46±0.13)×107](P<0.05)。4种方法分离纯化的卵囊体外感染BFTE48h和72h后隐孢子虫数无明显差异(P>0.05)。但CsCl密度梯度离心法纯化的隐孢子虫卵囊纯度明显高于不连续蔗糖密度梯度离心法。结论改良饱和盐水漂浮法较经典的不连续蔗糖密度梯度离心法操作简单、快速;CsCl密度梯度离心法分离的隐孢子虫卵囊纯度较高。 展开更多
关键词 微小隐孢子虫 卵囊 改良饱和盐水漂浮法 Percoll密度梯度离心法 不连续蔗糖密度梯度离心法 氯化铯密度梯度离JD法 牛输卵管上皮细胞
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根肿(Plasmodiophora brassicae)休眠孢子的纯化和超声波破碎方法研究 被引量：14
3
作者 邓洁 程龙 +5 位作者 刘谊 白林含 于昕 鲍锦库 曹毅 乔代蓉 《应用与环境生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第2期269-272,共4页
根肿(Plasmodiophora brassicae Woronin)是严重危害十字花科植物的世界性病害.采用蔗糖密度梯度离心和超声波处理方法从油菜染病根部组织分离和提纯根肿休眠孢子.众多因素可以影响提纯休眠孢子的纯度,为了得到更高纯度和均匀度的休眠... 根肿(Plasmodiophora brassicae Woronin)是严重危害十字花科植物的世界性病害.采用蔗糖密度梯度离心和超声波处理方法从油菜染病根部组织分离和提纯根肿休眠孢子.众多因素可以影响提纯休眠孢子的纯度,为了得到更高纯度和均匀度的休眠孢子的优化方法,我们对一系列影响因素如超声波破碎功率、pH、孢子破碎浓度、处理时间和不同的水溶物质等进行了研究.在pH值5.5左右、添加0.5%的二甲基亚砜、孢子浓度约为7×108、345W功率下超声波处理10min条件下获得了最优数量和均匀度的孢子,杂菌数量减少了51%以上,杂菌种类减少超过75%.超声波处理50min后,孢子破碎率稳定地达到90%以上,除菌率达99%以上.用此方法能在较短时间内获得高纯度和高均匀度的休眠孢子,为休眠孢子的深入研究提供了资料. 展开更多
关键词 根肿 休眠孢子 蔗糖密度梯度离心 超声波破碎
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从感染小鼠获得微小隐孢子虫卵囊方法的改进 被引量：14
4
作者 黄克和 杨世广 唐建霞 《中国寄生虫学与寄生虫病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2001年第6期360-362,共3页
目的　建立从感染C5 7BL/ 6N小鼠获得大量微小隐孢子虫卵囊的方法。方法　在饮水中添加不同浓度的地塞米松对人工感染小鼠进行免疫抑制 ,探讨获得最多卵囊数的药物添加量 ;比较不同纯化方法得到的卵囊回收率和纯度 ;探讨来自不同动物、... 目的　建立从感染C5 7BL/ 6N小鼠获得大量微小隐孢子虫卵囊的方法。方法　在饮水中添加不同浓度的地塞米松对人工感染小鼠进行免疫抑制 ,探讨获得最多卵囊数的药物添加量 ;比较不同纯化方法得到的卵囊回收率和纯度 ;探讨来自不同动物、不同纯化方法的卵囊在牛输卵管上皮细胞培养系统的感染情况。结果　地塞米松加入量为 2 0 μg/ml的第 3组获得的卵囊量高达 4 .16× 10 9/ 30个小鼠 ;用饱和盐水漂浮法与用蔗糖密度梯度离心法纯化得到的卵囊具有相同的回收率和纯度 ;从感染小鼠与犊牛中获得的卵囊在感染性上差异不显著。结论　成功地建立了从感染小鼠获得大量微小隐孢子虫卵囊的方法 ,具有简单、方便、快速等优点 ,并且不影响活力。 展开更多
关键词 微小隐孢子虫卵囊 饱和盐水漂浮法 蔗糖密度梯度离心法 细胞培养 隐孢子虫病
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用蔗糖密度梯度离心法纯化小球隐孢子虫卵囊试验 被引量：10
5
作者 李建华 张西臣 +1 位作者 陈建宝 田宗成 《中国兽医科技》 CSCD 北大核心 2001年第4期22-23,共2页
用蔗糖密度梯度离心法从接种犊牛粪便中纯化小球隐孢子虫卵囊 ,该方法操作简便、快速、经济、获得的卵囊纯度高 ,回收率达 92 .0 % ,适合于国内普通实验室使用。
关键词 卵囊 纯化 小球隐孢子虫 蔗糖密度梯度离心法
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两种方法纯化流感病毒的比较 被引量：10
6
作者 杜丽娟 王世光 +3 位作者 张立 陈尔佳 杨喆 包永明 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2007年第3期216-218,共3页
目的比较两种方法纯化流感病毒的效果。方法取病毒原液,经超滤浓缩后,分别用Sepharose 4FF凝胶层析和蔗糖密度梯度离心法进行纯化,并对纯化产物进行检定。结果层析法的纯度、卵清蛋白及杂蛋白去除率略高于蔗糖密度梯度离心法,而蔗糖密... 目的比较两种方法纯化流感病毒的效果。方法取病毒原液,经超滤浓缩后,分别用Sepharose 4FF凝胶层析和蔗糖密度梯度离心法进行纯化,并对纯化产物进行检定。结果层析法的纯度、卵清蛋白及杂蛋白去除率略高于蔗糖密度梯度离心法,而蔗糖密度梯度离心法的病毒回收率优于层析法。结论两种方法均可用于流感病毒的纯化。 展开更多
关键词 流感病毒 凝胶层析 蔗糖密度梯度离心
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大鼠不饱和脂肪酸的代谢变化与衰老的关系 被引量：5
7
作者 刘惠敏 骆子生 +1 位作者 李兴发 姜玲玲 《中国老年学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2002年第1期42-43,共2页
目的　探讨衰老与细胞内不饱和脂肪酸代谢变化的关系。方法　采用蔗糖密度梯度离心法分离大鼠肝脏线粒体和微粒体 ,用毛细管气相色谱法测定了青年和老年大鼠肝组织、肝线粒体和微粒体中的 1 4种脂肪酸 ,获取有统计意义的数据。结果　 6... 目的　探讨衰老与细胞内不饱和脂肪酸代谢变化的关系。方法　采用蔗糖密度梯度离心法分离大鼠肝脏线粒体和微粒体 ,用毛细管气相色谱法测定了青年和老年大鼠肝组织、肝线粒体和微粒体中的 1 4种脂肪酸 ,获取有统计意义的数据。结果　 6种不饱和脂肪酸的总量占所测 1 4种脂肪酸总量的比例 ,老年组均小于青年组 (P<0 .0 5)。结论　随着增龄 ,自由基介导的脂质过氧化程度不断加强 。 展开更多
关键词 生物膜 毛细管气相色谱法 衰老 脂质过氧化 不饱和脂肪酸 蔗糖密度梯度离心法
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用蔗糖密度梯度离心法提纯禽脑脊髓炎病毒 被引量：5
8
作者 韦莉 刘爵 +3 位作者 张杰 张方亮 姚炜光 周蛟 《北京农业科学》 1999年第6期35-36,共2页
用蔗糖密度梯度离心法进行了禽脑脊髓炎病毒的纯化。将禽脑脊髓炎病毒（ ＡＥＶ）Ｌ２Ｚ 株、Ｖａｎ Ｒｏｅｋｅｌ 株和１１４３ 株分别经卵黄囊接种６ 日龄ＳＰＦ 鸡胚，接毒后１３ 天，收集脑、消化道及胰腺，用玻璃匀浆器制成１０ ％... 用蔗糖密度梯度离心法进行了禽脑脊髓炎病毒的纯化。将禽脑脊髓炎病毒（ ＡＥＶ）Ｌ２Ｚ 株、Ｖａｎ Ｒｏｅｋｅｌ 株和１１４３ 株分别经卵黄囊接种６ 日龄ＳＰＦ 鸡胚，接毒后１３ 天，收集脑、消化道及胰腺，用玻璃匀浆器制成１０ ％ 的组织悬液。组织悬液经３ 次反复冻融后，以４５００ｒ／ｍｉｎ 离心１５ ｍｉｎ ，取上清液。而后用氯仿处理，取水相，经冷冻真空浓缩，进行不连续蔗糖密度梯度离心。取出含ＡＥＶ 的组分，用ＰＢＳ 稀释后超速离心除去蔗糖，得到提纯的病毒。病毒样品经２ ％ 磷钨酸负染，于电镜下观察可见典型的病毒粒子，大小为２４ ～２８ｎ ｍ 。 展开更多
关键词 禽脑脊髓炎病毒 蔗糖密度梯度 提纯
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抗牛安氏隐孢子虫单克隆抗体的研制与初步鉴定 被引量：5
9
作者 菅复春 张龙现 +2 位作者 苏敬良 宁长申 梁楠 《寄生虫与医学昆虫学报》 CAS 2005年第3期134-138,共5页
通过流行病学调查分离到奶牛隐孢子虫虫株,经实验室鉴定为牛安氏隐孢子虫(Cryptosporidium andersoni),经蔗糖漂浮法收集和蔗糖密度梯度离心、滤器滤过、多次低速离心提纯后,通过冻融和超声波处理的全卵囊抗原免疫Balb/c小鼠4次,取阳性... 通过流行病学调查分离到奶牛隐孢子虫虫株,经实验室鉴定为牛安氏隐孢子虫(Cryptosporidium andersoni),经蔗糖漂浮法收集和蔗糖密度梯度离心、滤器滤过、多次低速离心提纯后,通过冻融和超声波处理的全卵囊抗原免疫Balb/c小鼠4次,取阳性小鼠脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合.经间接ELISA方法筛选,有限稀释法3～4次克隆,获得5株分泌抗牛安氏隐孢子虫(C.andersoni)单克隆抗体的杂交瘤细胞株(1A3,3B10,3F4,4B3,4F11).5株单抗的染色体数目平均在96～98条之间,上清效价分别在1:100和1:12 800之间,腹水效价分别在1:12 800和1:204 800之间.采用免疫荧光法对各株的单抗腹水进行初步鉴定,发现其中4株为抗卵囊壁单抗,1株为抗子孢子单抗.对其中3株单抗的腹水提纯后进行SDS-PAGE电泳分析,其重链分子量约为52.7kDa,轻链分子量约为24kDa. 展开更多
关键词 牛安氏隐孢子虫 单克隆抗体 ELISA 免疫荧光 单克隆抗体 实验室鉴定 隐孢子虫 奶牛 蔗糖密度梯度离心 BALB/C小鼠 间接ELISA方法 SDS-PAGE 流行病学调查
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应用区带离心法纯化地鼠肾细胞乙型脑炎灭活疫苗 被引量：5
10
作者 张文璇 石慧颖 +1 位作者 张晋 丁志芬 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2004年第3期177-178,共2页
目的应用区带离心法纯化原代地鼠肾细胞乙型脑炎灭活疫苗。方法浓缩的原代地鼠肾细胞乙脑灭活疫苗,经36％和60％不连续蔗糖密度、23 000r/min离心4h后,收取纯化的乙脑抗原组分,制成纯化乙脑疫苗。结果浓缩疫苗经一步区带离心纯化后,抗... 目的应用区带离心法纯化原代地鼠肾细胞乙型脑炎灭活疫苗。方法浓缩的原代地鼠肾细胞乙脑灭活疫苗,经36％和60％不连续蔗糖密度、23 000r/min离心4h后,收取纯化的乙脑抗原组分,制成纯化乙脑疫苗。结果浓缩疫苗经一步区带离心纯化后,抗原效价提高3倍以上,蛋白去除99.5%以上。经稀释制成的半成品疫苗与未经浓缩的原疫苗相比,抗原效价提高4倍以上,蛋白去除99％以上。结论区带离心法可用于纯化地鼠肾细胞乙脑疫苗。 展开更多
关键词 区带离心 蔗糖密度梯度 乙型脑炎灭活疫苗 纯化 地鼠肾细胞 抗原效价
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结合态PC645组分的分离纯化和性质
11
作者 王宇涵 任靖文 陈敏 《烟台大学学报（自然科学与工程版）》 CAS 2024年第3期281-292,共12页
采用蔗糖密度梯度离心方法从蓝隐藻(Chroomonas placoidea)中分离得到了含有结合态藻蓝蛋白PC645的Chl-蛋白条带BandⅢ;硫酸铵分级沉淀显示,50%硫酸铵可最有效去除其中大部分Chl-蛋白且有效避免PC645的损失。光谱和多肽分析表明,含量最... 采用蔗糖密度梯度离心方法从蓝隐藻(Chroomonas placoidea)中分离得到了含有结合态藻蓝蛋白PC645的Chl-蛋白条带BandⅢ;硫酸铵分级沉淀显示,50%硫酸铵可最有效去除其中大部分Chl-蛋白且有效避免PC645的损失。光谱和多肽分析表明,含量最丰富的BandⅠ的亚基主要为1型,说明PC645占主导的α1α2β1β2异二聚体形式主要以游离态存在于类囊体腔中;而BandⅢ中富含的2型亚基参与形成的异二聚体很可能为α1α2β1β2,其疏水性更强,更易于被盐析沉淀。硫酸铵分级沉淀后的BandⅢ经疏水层析得到的疏水程度较低的组分1同时含有PC645和Chl a-蛋白;疏水程度最高的组分4,为基本不含叶绿素的、充分纯化的PC645,且很可能是BandⅢ中与Chl-蛋白处于结合态的PC645组分。结果为今后隐藻两套捕光系统结构和相互作用机制研究奠定了基础。 展开更多
关键词 蓝隐藻 PC645-Chl-蛋白复合物 蔗糖密度梯度离心 硫酸铵分级沉淀 疏水层析
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蔗糖密度梯度离心法纯化流感病毒工艺的优化 被引量：6
12
作者 顾建阳 刘旭光 +9 位作者 郭占龙 孙志伟 杜金东 徐文 孙宇 曹海丹 刘燕 曾亮 王思燕 王亚军 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2015年第8期848-851,855,共5页
目的优化蔗糖密度梯度离心法纯化流感病毒的工艺参数。方法在不同进样量（600、700和800 ml）时,检测经蔗糖密度梯度离心纯化后各紫外检测峰的糖浓度、血凝滴度及卵清蛋白含量,并对血凝滴度大于1∶480的检测峰样品进行蛋白质含量和血凝... 目的优化蔗糖密度梯度离心法纯化流感病毒的工艺参数。方法在不同进样量（600、700和800 ml）时,检测经蔗糖密度梯度离心纯化后各紫外检测峰的糖浓度、血凝滴度及卵清蛋白含量,并对血凝滴度大于1∶480的检测峰样品进行蛋白质含量和血凝素含量检测,确定最佳收峰位置、糖度范围及病毒浓缩液进样量;在不同比例的30%和50%的蔗糖溶液、不同离心时间（2、3和4 h）条件下对流感病毒浓缩液进行蔗糖密度梯度离心纯化,检测纯化后的病毒纯化液蛋白质、血凝素及卵清蛋白含量,计算蛋白质含量与血凝素含量比值及血凝素回收率,确定最佳离心时间。结果确定最佳收峰位置为第三峰,糖度范围为30%~50%之间;当病毒浓缩液进样量为600~700 ml时,30%蔗糖溶液进液量为450~550 ml,55%蔗糖溶液进液量为400~500 ml,转速为90 639×g离心3 h后,可获得最佳纯化效果。结论确定了蔗糖密度梯度离心法纯化流感病毒的最佳工艺参数,为进一步提高流感病毒的纯化效果提供了参考。 展开更多
关键词 流感病毒 蔗糖密度梯度离心 纯化
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蔗糖密度梯度离心技术纯化山羊痘病毒的研究 被引量：5
13
作者 高顺平 吴国华 +2 位作者 颜新敏 赵志荀 张强 《黑龙江畜牧兽医》 CAS 北大核心 2018年第11期52-54,253,共4页
为了提纯细胞培养物中的山羊痘病毒（Goat pox virus,GTPV）,试验采用低速离心法去除大部分细胞碎片,之后加入聚乙二醇6000（PEG6000）沉淀病毒,用蔗糖密度梯度离心技术进行纯化,然后用双抗体夹心ELISA和电镜观察法对纯化的病毒进行检... 为了提纯细胞培养物中的山羊痘病毒（Goat pox virus,GTPV）,试验采用低速离心法去除大部分细胞碎片,之后加入聚乙二醇6000（PEG6000）沉淀病毒,用蔗糖密度梯度离心技术进行纯化,然后用双抗体夹心ELISA和电镜观察法对纯化的病毒进行检测。结果表明：病毒得到有效富集,电镜观察可见完整病毒颗粒且背景清晰。说明蔗糖密度梯度离心技术可以有效纯化细胞培养物中的GTPV,且能保留其免疫原性。 展开更多
关键词 山羊痘病毒 蔗糖密度梯度离心 病毒纯化 聚乙二醇6000 电镜
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海洋管藻目绿藻刺松藻光系统Ⅰ复合物的分离 被引量：1
14
作者 陈敏 李爱芬 周百成 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2001年第6期858-861,共4页
采用TritonX 10 0蔗糖密度梯度离心法 ,从管藻目绿藻刺松藻中分离到三种不同形式的光系统Ⅰ (PSⅠ )复合物 .区带Ⅲ富含PSⅠ核心复合物 (CCⅠ ) ,叶绿素 (Chl)a/b >2 0 ,在温和的聚丙烯酰胺凝胶电泳 (PAGE)中只显示一条PSⅠ中心复合... 采用TritonX 10 0蔗糖密度梯度离心法 ,从管藻目绿藻刺松藻中分离到三种不同形式的光系统Ⅰ (PSⅠ )复合物 .区带Ⅲ富含PSⅠ核心复合物 (CCⅠ ) ,叶绿素 (Chl)a/b >2 0 ,在温和的聚丙烯酰胺凝胶电泳 (PAGE)中只显示一条PSⅠ中心复合物CPⅠ条带 .区带Ⅳ和Ⅴ在 436和 6 74nm、 46 7和 6 5 0nm以及 5 40nm的吸收表明 ,含有Chla、b及管藻黄素和管藻素 ,Chla/b比值分别为 3 2 3和 2 4.经PAGE检测 ,有CPⅠ和CPⅠa两种PSⅠ色素蛋白复合物带 ,因此区带Ⅳ和Ⅴ是由CCⅠ和含量不等的捕光复合物LHCⅠ构成的PSⅠ颗粒 .区带Ⅲ只有 6 6和 5 6ku两种核心多肽 ;区带Ⅳ和Ⅴ除了 6 6、 5 6ku多肽以外 ,还有 4种分子质量为 2 5 ,2 6 ,2 6 2和2 7 5ku的LHCⅠ多肽 .室温荧光光谱显示 ,分离物中的各种光合色素之间保持着良好的能量传递关系 ,由Chlb及管藻黄素和管藻素吸收的能量都可以传递给Chla. 展开更多
关键词 光系统Ⅰ复合物 蔗糖密度梯度离心 多肽 刺松藻 绿藻 分离
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Ⅰ型鸭肝炎病毒间接ELISA方法的建立 被引量：4
15
作者 孙凤萍 高骏 +2 位作者 胡建华 王胜昌 高诚 《上海农业学报》 CSCD 北大核心 2011年第4期70-73,共4页
采用Ⅰ型鸭肝炎病毒通过SPF鸡胚进行病毒培养和增殖,反复冻融后离心-0.22μm滤膜过滤-差速离心-蔗糖密度梯度离心法纯化后作为ELISA包被抗原,建立了鸭病毒性肝炎-Ⅰ型病毒全病毒间接ELISA诊断方法。试验表明:此方法具有敏感性高、特异... 采用Ⅰ型鸭肝炎病毒通过SPF鸡胚进行病毒培养和增殖,反复冻融后离心-0.22μm滤膜过滤-差速离心-蔗糖密度梯度离心法纯化后作为ELISA包被抗原,建立了鸭病毒性肝炎-Ⅰ型病毒全病毒间接ELISA诊断方法。试验表明:此方法具有敏感性高、特异性好的优点,为快速诊断鸭病毒性肝炎-Ⅰ型病毒感染提供了一条方便的途径。 展开更多
关键词 鸭病毒性肝炎 间接ELISA 蔗糖密度梯度离心
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H9N2亚型禽流感病毒纯化及病毒HA蛋白定量方法研究 被引量：4
16
作者 彭成成 吴熠潇 +1 位作者 刘旭平 谭文松 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2019年第7期2069-2078,共10页
为实现H9N2亚型禽流感病毒(avian influenza virus,AIV)疫苗上下游过程的控制,本研究结合蔗糖密度梯度离心和SDS-PAGE灰度分析建立了H9N2亚型AIV纯化和病毒HA蛋白定量的方法。首先将收获的病毒原液经差速离心、PEG6000沉淀和蔗糖密度梯... 为实现H9N2亚型禽流感病毒(avian influenza virus,AIV)疫苗上下游过程的控制,本研究结合蔗糖密度梯度离心和SDS-PAGE灰度分析建立了H9N2亚型AIV纯化和病毒HA蛋白定量的方法。首先将收获的病毒原液经差速离心、PEG6000沉淀和蔗糖密度梯度离心分别进行澄清、浓缩和分离纯化;其次,采用改装过的高效液相色谱仪系统(HPLC)准确定位和收集病毒离心区带,并对该区带进行SDS-PAGE和Western blotting分析,同时考察该收集方式的线性和重复性;然后,在此基础上优化病毒液的澄清工艺以提高病毒回收率;最后,观察还原SDS-PAGE分离的H9N2亚型AIV蛋白条带的共迁移情况并确定糖苷酶PNGase F脱糖基处理的最佳条件,采用Image J软件分析SDS-PAGE图谱中4个主要病毒蛋白条带(NP、HA1、M1和HA2)的灰度以确定流感病毒血凝素的含量。结果表明,HPLC收集的病毒离心区带的蛋白浓度与PEG6000浓缩的上清体积在8~32 mL范围内具有良好的线性关系(R^2=0.994),且该收集方式重复性好,批内和批间变异系数分别为1.29%和4.11%。病毒液经过澄清、浓缩和分离纯化后,最终的病毒回收率为79.55%。纯化的H9N2亚型AIV的蛋白浓度为1 000μg/mL时,经糖苷酶PNGase F脱糖基处理后便能得到条带清晰平整且分离良好的SDS-PAGE图谱。经灰度分析,HA含量占总病毒蛋白含量的46.18%。本研究初步建立了H9N2亚型AIV纯化和病毒HA蛋白定量的方法,为H9N2亚型AIV全病毒灭活疫苗的研发和生产提供了简单、准确的检测手段。 展开更多
关键词 H9N2亚型禽流感病毒 血凝素 蔗糖密度梯度离心 纯化 SDS-PAGE 定量
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甲型流感病毒纯化及病毒生物学特征分析 被引量：4
17
作者 刘杨 赵向绒 +2 位作者 郭春艳 胡军 余鹏博 《西安交通大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2016年第6期897-900,共4页
目的评价蔗糖密度梯度离心纯化甲型流感病毒的方法,并对纯化的病毒颗粒特征和免疫原性进行分析。方法接种鸡胚培养病毒,收获尿囊液,超速离心浓缩,蔗糖密度梯度离心纯化病毒,用血凝试验、蛋白定量、透射电镜和SDS-PAGE鉴定病毒颗粒。取... 目的评价蔗糖密度梯度离心纯化甲型流感病毒的方法,并对纯化的病毒颗粒特征和免疫原性进行分析。方法接种鸡胚培养病毒,收获尿囊液,超速离心浓缩,蔗糖密度梯度离心纯化病毒,用血凝试验、蛋白定量、透射电镜和SDS-PAGE鉴定病毒颗粒。取病毒纯化产物以0.03mg/只和0.005mg/只分组免疫小鼠,采集小鼠血清,利用血凝抑制试验测定血清血凝抑制滴度。结果成功利用蔗糖密度梯度离心法纯化出流感病毒,病毒原液经纯化后被分离成L、M、H三个病毒带,其中M病毒带的吸光度、蛋白浓度及血凝滴度最高,蛋白浓度可达1.2mg/mL,血凝滴度高达1×49。电镜观察显示,L区带为具有血凝活性的质膜和结构疏松的病毒组成,M区带病毒颗粒呈球形、丝状或棒状。同时,有大量空心病毒颗粒存在。H区带与M区带类似,但未发现空心病毒颗粒。纯化的病毒免疫小鼠后可产生具有较高血凝抑制活性的抗体。结论蔗糖密度梯度离心技术可用于流感病毒抗原的制备,且不影响病毒的免疫原性。因此,密度梯度离心法可为流感病毒的基础研究及疫苗开发提供技术支持。 展开更多
关键词 甲型流感病毒 蔗糖密度梯度超速离心 免疫原性
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裙带菜PSⅠ复合物的荧光特异性 被引量：2
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作者 刘洪艳 王广策 侯和胜 《植物学通报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第4期444-448,共5页
以褐藻裙带菜(Undaria pinnatifida)为实验材料,采用蔗糖密度梯度超速离心的方法,去污剂SDS为增溶剂(SDS:Chl=20:1,4℃增溶20 min),蔗糖密度梯度为60%、50%、40%、30%、20%、15%和10%,分离制备光系统Ⅰ(PSⅠ)复合物。结果表明, 40% 蔗... 以褐藻裙带菜(Undaria pinnatifida)为实验材料,采用蔗糖密度梯度超速离心的方法,去污剂SDS为增溶剂(SDS:Chl=20:1,4℃增溶20 min),蔗糖密度梯度为60%、50%、40%、30%、20%、15%和10%,分离制备光系统Ⅰ(PSⅠ)复合物。结果表明, 40% 蔗糖层带所含色素蛋白复合物是PSⅠ复合物。利用红藻作参照对比,光谱结果表明从裙带菜中得到的PSⅠ复合物没有730 nm的荧光峰。分析认为这是所有褐藻包括裙带菜PSⅠ复合物的荧光特异性。 展开更多
关键词 裙带菜 PSⅠ复合物 荧光特异性 蔗糖密度梯度 超速离心 褐藻门
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蓝隐藻叶绿素蛋白复合物的圆二色谱特性 被引量：3
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作者 梁源 陈敏 《烟台大学学报（自然科学与工程版）》 CAS 2014年第3期177-183,共7页
采用蔗糖密度梯度离心分离的方法,从蓝隐藻(Chroomonas placoidea)中稳定分离到了4种活性的叶绿素蛋白复合物,分别为2种捕光复合物、1种PSⅡ颗粒和1种PSⅠ颗粒.采用圆二色谱技术对分离到的复合物进行了全波段(190~750 nm)光谱测定,结果... 采用蔗糖密度梯度离心分离的方法,从蓝隐藻(Chroomonas placoidea)中稳定分离到了4种活性的叶绿素蛋白复合物,分别为2种捕光复合物、1种PSⅡ颗粒和1种PSⅠ颗粒.采用圆二色谱技术对分离到的复合物进行了全波段(190~750 nm)光谱测定,结果显示:①远紫外区:二级结构预测表明各复合物的无规卷曲比例相近,约占30%左右;PSⅠ颗粒和1种PSⅡ和捕光复合物含有更高比例的α-螺旋和β-转角,但几乎不存在β-折叠.②近紫外区:在芳香族氨基酸的三级结构信号区,各复合物均未观测到Tyr的信号峰.③可见光区:690 nm附近信号峰的有无是隐藻捕光复合物和中心复合物的一个区别.实验结果不仅给出了隐藻叶绿素蛋白复合物性质的新信息,也为今后叶绿素蛋白复合物的分析和鉴定提供了新的光谱鉴定依据. 展开更多
关键词 蓝隐藻 叶绿素蛋白复合物 蔗糖密度梯度离心 圆二色谱
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以小麦根尖分生组织细胞核及染色体制备高分子量DNA 被引量：3
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作者 郭东伟 佘茂云 +4 位作者 李连城 陈耀峰 陈明 徐兆师 马有志 《作物学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第12期1920-1923,共4页
为了克服以叶片为材提取HMW DNA的局限性,优化了一套简便、实用的提取方法。该法以细胞周期同步化处理的根尖分生组织为材料,利用机械匀浆释放细胞核或中期染色体制备悬浮液,再以蔗糖密度梯度离心和流式分选技术分别分离细胞核和染色体... 为了克服以叶片为材提取HMW DNA的局限性,优化了一套简便、实用的提取方法。该法以细胞周期同步化处理的根尖分生组织为材料,利用机械匀浆释放细胞核或中期染色体制备悬浮液,再以蔗糖密度梯度离心和流式分选技术分别分离细胞核和染色体,经去蛋白、酶切、透析,获得HMW DNA。经检测,来自200条根尖(10个胶块)的HMW DNA的浓度约为4～20ng/μL,而连接、转化后的BAC克隆平均插入片段超过100kb。证明该法适用于提取HMW DNA以构建BAC文库。 展开更多
关键词 高分子量DNA 蔗糖密度梯度离心 细胞周期同步化 染色体流式分选 BAC
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