变形链球菌葡聚糖结合蛋白B基因的克隆和序列分析 被引量：7

1

作者 卫克文 肖明振 +1 位作者 吴补领 苏凌云 《牙体牙髓牙周病学杂志》 CAS 2003年第4期177-179,共3页

目的 :克隆变形链球菌葡聚糖结合蛋白B(glucanbindingproteinB ,GbpB)的编码区基因片段。方法 :提取变形链球菌基因组DNA ,采用PCR方法 ,以特异性引物扩增GbpB编码区基因片段 ,并克隆到pBluescriptKS载体 ,筛选阳性克隆进行序列测定。 ... 目的 :克隆变形链球菌葡聚糖结合蛋白B(glucanbindingproteinB ,GbpB)的编码区基因片段。方法 :提取变形链球菌基因组DNA ,采用PCR方法 ,以特异性引物扩增GbpB编码区基因片段 ,并克隆到pBluescriptKS载体 ,筛选阳性克隆进行序列测定。 结果 :PCR扩增到一特异性的约 1 30 0bp的片段 ,克隆后筛选出阳性克隆进行序列分析 ,测定结果表明与国外已发表的序列完全一致。结论 :利用分子生物学技术能成功克隆目的基因 。 展开更多

关键词 变形链球菌 葡聚糖结合蛋白 基因 克隆 序列分析 龋病

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变形链球菌GbpA的GBD免疫防龋实验研究 被引量：4

2

作者 苏凌云 吴补领 +2 位作者 于立君 范继红 卫克文 《上海口腔医学》 CAS CSCD 2005年第3期298-300,共3页

目的:观察变形链球菌GbpA的GBD融合蛋白免疫SD大鼠的防龋效果。方法:用纯化的变形链球菌GbpA的GBD融合蛋白皮下免疫SD大鼠,喂Keyes改良的高糖Diet2000,第1次免疫20d时,连续3d大鼠口腔中接种S.mutansIngbritt,在接种S.mutans后第77天处... 目的:观察变形链球菌GbpA的GBD融合蛋白免疫SD大鼠的防龋效果。方法:用纯化的变形链球菌GbpA的GBD融合蛋白皮下免疫SD大鼠,喂Keyes改良的高糖Diet2000,第1次免疫20d时,连续3d大鼠口腔中接种S.mutansIngbritt,在接种S.mutans后第77天处死大鼠,收集大鼠颌骨标本,用于龋齿记分分析,用t检验进行统计学分析。结果:GBD融合蛋白免疫大鼠,实验组龋损范围及龋坏程度均显著低于对照组,P<0.01。结论:变形链球菌GbpA的GBD融合蛋白疫苗可有效降低龋齿的发生。 展开更多

关键词 变形链球菌 葡聚糖结合蛋白 免疫 龋齿

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变形链球菌葡聚糖结合蛋白研究进展 被引量：5

3

作者 徐帅妹 魏信汉 崔力 《口腔医学》 CAS 2016年第7期662-665,共4页

葡聚糖结合蛋白是变形链球菌致龋的重要毒力因子。与变形链球菌的粘附、聚集、细胞壁生理功能、酶活性和形成生物膜并维持其结构稳定起重要作用。该文就变形链球菌4种葡聚糖结合蛋白研究现状,葡聚糖结合蛋白与生物膜、防龋疫苗的关系及... 葡聚糖结合蛋白是变形链球菌致龋的重要毒力因子。与变形链球菌的粘附、聚集、细胞壁生理功能、酶活性和形成生物膜并维持其结构稳定起重要作用。该文就变形链球菌4种葡聚糖结合蛋白研究现状,葡聚糖结合蛋白与生物膜、防龋疫苗的关系及当前存在的问题作一综述。 展开更多

关键词 葡聚糖结合蛋白 葡聚糖 生物膜 防龋疫苗

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变形链球菌GbpA的GBD融合蛋白诱导SD大鼠产生免疫应答 被引量：3

4

作者 吴补领 苏凌云 +1 位作者 范继红 陆群 《中华微生物学和免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2003年第6期450-452,共3页

目的　研究变形链球菌葡聚糖结合蛋白A(glucanbindingprotein A ,GbpA)的GBD融合蛋白免疫SD大鼠时 ,其所诱导的血清和唾液特异性免疫反应。方法　用纯化的变形链球菌GbpA的GBD融合蛋白皮下免疫SD大鼠 ,免疫后间隔一定的时间收集大鼠的... 目的　研究变形链球菌葡聚糖结合蛋白A(glucanbindingprotein A ,GbpA)的GBD融合蛋白免疫SD大鼠时 ,其所诱导的血清和唾液特异性免疫反应。方法　用纯化的变形链球菌GbpA的GBD融合蛋白皮下免疫SD大鼠 ,免疫后间隔一定的时间收集大鼠的血清及唾液 ,间接ELISA检测血清及唾液中特异性抗GBD抗体。结果　GBD融合蛋白免疫大鼠 ,可引起血清中IgG及唾液中IgA的显著提高。另外 ,GBD融合蛋白免疫大鼠 ,38d采血 ,血清中抗GBD抗体效价最高 ,后逐渐降低。结论变形链球菌GbpA的GBD融合蛋白具有免疫原性 ,可供研制防龋疫苗参考。 展开更多

关键词 变形链球菌 葡聚糖结合蛋白A GBD融合蛋白 免疫应答 龋病

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葡聚糖结合蛋白的生物学特性 被引量：4

5

作者 黄定明 齐雪 周学东 《牙体牙髓牙周病学杂志》 CAS 1999年第4期326-328,共3页

关键词 葡聚糖结合蛋白 生物学性能 龋病

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纳米基因防龋疫苗的构建及其免疫大鼠的实验研究 被引量：1

6

作者 卫克文 樊明文 吴补领 《武汉大学学报（医学版）》 CAS 2005年第3期351-354,共4页

目的:制备pcDNA3.1(+)gbpB壳聚糖纳米基因防龋疫苗,并检测其经鼻免疫大鼠的效果。方法:制备两种pcDNA3.1(+)gbpB壳聚糖纳米颗粒载体系统,经鼻粘膜免疫SD大鼠,用ELISA法检测血清中针对葡聚糖结合蛋白B的特异IgG抗体滴度及唾液中针对葡聚... 目的:制备pcDNA3.1(+)gbpB壳聚糖纳米基因防龋疫苗,并检测其经鼻免疫大鼠的效果。方法:制备两种pcDNA3.1(+)gbpB壳聚糖纳米颗粒载体系统,经鼻粘膜免疫SD大鼠,用ELISA法检测血清中针对葡聚糖结合蛋白B的特异IgG抗体滴度及唾液中针对葡聚糖结合蛋白B的特异SIgA抗体滴度。与阳性对照组霍乱毒素pcDNA3.1(+)gbpB及未免疫组、空白壳聚糖纳米颗粒组作比较。结果:该载体系统经鼻免疫SD大鼠所产生的血清及唾液中针对GbpB的IgG和SIgA抗体滴度远大于未免疫组和空白壳聚糖纳米颗粒组,而与阳性对照组霍乱毒素pcDNA3.1(+)gbpB组抗体滴度相当。且维持的抗体滴度更稳定和持久。结论:成功构建了以葡聚糖结合蛋白B基因为免疫原的纳米基因防龋疫苗,并获得较好的免疫效果。 展开更多

关键词 变形链球菌 葡聚糖结合蛋白 基因疫苗 纳米壳聚糖颗粒

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变形链球菌葡聚糖结合蛋自的研究进展 被引量：3

7

作者 孙汉堂 《国外医学（口腔医学分册）》 2000年第2期91-94,共4页

本文介绍了一类对牙菌斑的发育、结构和致龋力具有重要意义的变形链球菌表面蛋白-葡聚糖结合蛋白,阐述了其作用、种类及分子结构等。

关键词 变形链球菌 葡聚糖结合蛋白 粘附 聚集 牙菌斑

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变异链球菌葡聚糖结合蛋白D基因失活菌株的构建和鉴定 被引量：3

8

作者 赵红萍 吴补领 +3 位作者 苏凌云 王秦芳 刘艳丽 方会清 《中华微生物学和免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第5期409-413,共5页

目的利用基因打靶技术构建变异链球菌葡聚糖结合蛋白D基因(gbpD)失活株,用于葡聚糖结合蛋白D基因功能的研究。方法体外培养变异链球菌UA159菌株并以其基因组为模板,对gbpD基因内部序列进行PCR扩增,连接自杀载体pVA8912,分别用酶切及PCR... 目的利用基因打靶技术构建变异链球菌葡聚糖结合蛋白D基因(gbpD)失活株,用于葡聚糖结合蛋白D基因功能的研究。方法体外培养变异链球菌UA159菌株并以其基因组为模板,对gbpD基因内部序列进行PCR扩增,连接自杀载体pVA8912,分别用酶切及PCR鉴定;转化变异链球菌UA159株,用PCR及Westernblot鉴定。结果经鉴定PCR产物及插入片段大小与预期值相符,且为所需目的基因片段,成功构建了自杀质粒pVA8912-gbpD;经PCR鉴定及Westernblot鉴定,gb-pD基因失活株基因组中gbpD基因内部成功插入目的片段,且该菌株不表达GbpD蛋白。结论成功构建了用于变异链球菌gbpD基因打靶的自杀质粒和gbpD基因失活株,为该基因功能的研究奠定了基础。 展开更多

关键词 基因打靶 变异链球菌 葡聚糖结合蛋白

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变异链球菌葡聚糖结合蛋白A葡聚糖结合区真核表达质粒的构建及其在哺乳动物细胞中的表达 被引量：3

9

作者 韩琪 刘建国 +4 位作者 柴巧学 曲云鹏 管晓燕 白国辉 杨德琴 《牙体牙髓牙周病学杂志》 CAS 北大核心 2010年第6期310-313,340,共5页

目的:构建变异链球菌葡聚糖结合蛋白A葡聚糖结合区的真核表达质粒pVAX1-GbpA/GBD,并观察其在哺乳动物细胞COS-7中的表达。方法:利用基因重组技术构建真核表达质粒pVAX1-Gb-pA/GBD,经酶切分析和测序分析鉴定后,通过脂质体转染法,将其转染... 目的:构建变异链球菌葡聚糖结合蛋白A葡聚糖结合区的真核表达质粒pVAX1-GbpA/GBD,并观察其在哺乳动物细胞COS-7中的表达。方法:利用基因重组技术构建真核表达质粒pVAX1-Gb-pA/GBD,经酶切分析和测序分析鉴定后,通过脂质体转染法,将其转染至COS-7细胞中,免疫组化SABC法检测其在细胞中的表达。结果:重组质粒pVAX1-GbpA/GBD经EcoR I和BamH I酶切证实携带1.2kb目的基因片段,经测序分析,目的基因正确插入到预先设计的载体位点处。pVAX1-gbpA/GBD转染的细胞胞质呈褐色染色,pVAX1空载体质粒转染的细胞胞质中无着色。结论:成功构建防龋基因疫苗真核表达质粒pVAX1-GbpA/GBD,所携带的基因序列正确,能够在真核细胞COS-7中正确表达目的蛋白。 展开更多

关键词 变异链球菌 葡聚糖结合蛋白A 哺乳动物细胞 真核表达 pVAXl

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变形链球菌葡聚糖结合蛋白D基因的分子克隆及其原核表达和初步纯化 被引量：1

10

作者 赵红萍 吴补领 +4 位作者 苏凌云 孙叶芳 王秦芳 刘艳丽 逄键梁 《临床口腔医学杂志》 2005年第10期604-607,共4页

目的:克隆变形链球菌葡聚糖结合蛋白D(gbpD)基因,在大肠杆菌中表达并对重组蛋白进行初步纯化,为进一步的蛋白功能研究奠定基础。方法:体外培养变形链球菌UA159菌株并以其基因组为模板,对gbpD基因编码区进行PCR扩增,连接pMD-18T载体并测... 目的:克隆变形链球菌葡聚糖结合蛋白D(gbpD)基因,在大肠杆菌中表达并对重组蛋白进行初步纯化,为进一步的蛋白功能研究奠定基础。方法:体外培养变形链球菌UA159菌株并以其基因组为模板,对gbpD基因编码区进行PCR扩增,连接pMD-18T载体并测序。随后将该片段克隆入原核表达载体pPROEX HTb中,构建表达质粒pPROEX/gbpD,转化大肠杆菌DH5α并用IPTG诱导表达。表达产物经镍-次氮基三乙酸(Ni-NTA)柱进行亲和层析纯化。结果:成功克隆变形链球菌gbpD基因并在大肠杆菌中得到可溶性表达,经Ni-NTA柱纯化后获得纯度大于95%、相对分子量(Mr)为76×103的变链菌GbpD蛋白。结论:获得Mr为76×103的变形链球菌GbpD蛋白。对进一步确定GbpD的葡聚糖结合能力,探讨其在变链菌致龋过程中的作用,以及在龋病预防领域的应用前景都具有重要的意义。 展开更多

关键词 变形链球菌 葡聚糖结合蛋白D 蛋白表达

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变形链球菌葡聚糖结合蛋白D(gbpD)基因失活菌株体外黏附能力的实验研究 被引量：2

11

作者 赵红萍 吴补领 +1 位作者 苏凌云 潘景光 《临床口腔医学杂志》 2012年第6期323-325,共3页

目的:体外观察gbpD基因失活菌株在羟基磷灰石表面的黏附能力,为明确GbpD在变形链球菌黏附过程中的作用提供实验依据。方法:荧光标记gbpD失活菌和野生菌,与唾液包被的羟基磷灰石粉末共同孵育后,测定羟基磷灰石沉淀的荧光值,比较粘附率的... 目的:体外观察gbpD基因失活菌株在羟基磷灰石表面的黏附能力,为明确GbpD在变形链球菌黏附过程中的作用提供实验依据。方法:荧光标记gbpD失活菌和野生菌,与唾液包被的羟基磷灰石粉末共同孵育后,测定羟基磷灰石沉淀的荧光值,比较粘附率的差异。结果:发现gbpD失活菌的黏附率(19.7%±0.91)低于野生菌(29.5%±2.9),差异有显著性(P<0.05);当加入抗GbpD抗体后,变形链球菌UA159的黏附率低于未加抗体组(P<0.05)。结论:GbpD的缺失严重影响了变形链球菌与唾液包被羟基磷灰石的粘附,抗GbpD抗体对这种粘附有一定的抑制作用,表明GbpD与变形链球菌的粘附能力有关。 展开更多

关键词 变形链球菌 葡聚糖结合蛋白D 粘附

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防龋基因疫苗pVAX1-GbpA/GBD缓释温敏型水凝胶不同途径免疫兔的效果研究 被引量：1

12

作者 李虎 管晓燕 +5 位作者 李敏 董竞男 肖茜文 白国辉 王铭蔚 刘建国 《口腔医学研究》 CAS CSCD 北大核心 2022年第7期640-646,共7页

目的:比较不同免疫途径下防龋疫苗pVAX1-GbpA/GBD聚乳酸乙醇酸-聚乙二醇-聚乳酸乙醇酸(PLGA-PEG-PLGA)水凝胶免疫兔后的免疫效应。方法:将重组质粒pVAX1-GbpA/GBD与空载体质粒pVAX1分别与PLGA-PEG-PLGA水凝胶震荡混匀。28只兔子随机分为... 目的:比较不同免疫途径下防龋疫苗pVAX1-GbpA/GBD聚乳酸乙醇酸-聚乙二醇-聚乳酸乙醇酸(PLGA-PEG-PLGA)水凝胶免疫兔后的免疫效应。方法:将重组质粒pVAX1-GbpA/GBD与空载体质粒pVAX1分别与PLGA-PEG-PLGA水凝胶震荡混匀。28只兔子随机分为7组:股四头肌注射疫苗组、口服疫苗组、鼻腔滴注疫苗组和颌下腺区皮下注射疫苗组、阴性对照组1股四头肌注射空载质粒pVAX1的水凝胶组、阴性对照组2口服空载质粒pVAX1的水凝胶组、空白对照组股四头肌注射生理盐水组。相同剂量进行3次免疫,第1次免疫1周后进行第2次免疫,2周后第3次免疫。采用酶联免疫吸附试验检测免疫前后唾液中和血清中的特异性IgA和IgG型抗GTF抗体水平。免疫组织化学法观察注射部位pVAX1-GbpA/GBD蛋白的阳性表达。结果:(1)防龋基因疫苗pVAX1-GbpA/GBD水凝胶经不同途径免疫兔后,免疫后2周4组防龋基因疫苗组的唾液中特异性IgA抗体和IgG抗体水平显著升高(P<0.05);IgA型抗GTF抗体水平在第6周达到最高,口服组在第4周IgA型抗GTF抗体水平高于其它6组;颌下腺注射组在第6、10周IgA型抗GTF抗体水平高于其它6组;口服组与颌下腺注射组在第8、12周IgA型抗GTF抗体水平高于其它组(P<0.05),但两者之间比较差异无统计学意义(P>0.05)。(2)免疫后2周4组防龋基因疫苗组的血清中特异性IgA抗体和IgG抗体水平显著升高(P<0.05);IgG型抗GTF抗体水平在第8周达到最高,口服组在第3、6、10周IgG型抗GTF抗体水平高于其它6组(P<0.05);颌下腺注射组在第4、8周IgG型抗GTF抗体水平高于其它6组(P<0.05)。(3)免疫组织化学染色结果显示4组防龋基因疫苗组的免疫部位可见pVAX1-GbpA/GBD目的蛋白的阳性表达,口服疫苗组的小肠黏膜部位的上皮细胞胞浆和颌下腺注射组的导管区域的细胞胞浆内中pVAX1-GbpA/GBD蛋白染色明显,表达强烈。结论:防龋基因疫苗pVAX1-GbpA/GBD水凝胶经4种途径 展开更多

关键词 葡聚糖结合蛋白 基因疫苗 水凝胶 龋病 免疫

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嵌合体真核表达质粒pVAX1-SPG的构建及表达研究 被引量：1

13

作者 王怡丹 孙天瞳 +6 位作者 刘建国 柴巧学 曲云鹏 于晓光 白国辉 田源 韩琪 《牙体牙髓牙周病学杂志》 CAS 2015年第11期645-650,共6页

目的:构建含变异链球菌表面蛋白Spa P的P区编码基因spap-P和葡聚糖结合蛋白Gbp A的葡聚糖结合区编码基因gbd的嵌合体真核表达质粒p VAX1-SPG,并观察其在哺乳动物细胞293T中的表达。方法:通过基因工程技术构建嵌合体真核表达质粒p VAX1-S... 目的:构建含变异链球菌表面蛋白Spa P的P区编码基因spap-P和葡聚糖结合蛋白Gbp A的葡聚糖结合区编码基因gbd的嵌合体真核表达质粒p VAX1-SPG,并观察其在哺乳动物细胞293T中的表达。方法:通过基因工程技术构建嵌合体真核表达质粒p VAX1-SPG,并采用脂质体转染法将其转染至293T细胞中;然后分别采用免疫组化SABC法和Western-blot检测嵌合蛋白Spa P/P-GBD在真核细胞中的表达。结果:重组真核表达质粒p VAX1-SPG经酶切、测序鉴定证实,其所携带的外源基因片段为2.4 kb的目的基因片段,序列同源性为99%;免疫组化染色结果显示,经p VAX1-SPG转染的293T细胞胞质呈棕褐色染色;Western-blot检测结果显示,分子量为72 k Da的嵌合蛋白Spa P/P-GBD能够被正确表达。结论:构建成功的嵌合体真核表达质粒p VAX1-SPG能在真核细胞293T中正确表达目的蛋白。 展开更多

关键词 变异链球菌 表面蛋白抗原 葡聚糖结合蛋白 哺乳动物细胞 真核表达

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葡聚糖结合蛋白A-壳聚糖纳米颗粒经鼻免疫小鼠的实验研究

14

作者 江川 吴补领 苏凌云 《牙体牙髓牙周病学杂志》 CAS 2004年第1期23-25,共3页

目的 :检测葡聚糖结合蛋白A[Glucanbindingprotein·A(GBPA) ]-壳聚糖纳米颗粒载体系统经鼻黏膜免疫小鼠的效果。证明壳聚糖可作为经鼻用蛋白防龋疫苗的载体系统。方法 :用该载体系统经鼻免疫小鼠 ,间接ELISA方法检测血清中针对葡... 目的 :检测葡聚糖结合蛋白A[Glucanbindingprotein·A(GBPA) ]-壳聚糖纳米颗粒载体系统经鼻黏膜免疫小鼠的效果。证明壳聚糖可作为经鼻用蛋白防龋疫苗的载体系统。方法 :用该载体系统经鼻免疫小鼠 ,间接ELISA方法检测血清中针对葡聚糖结合蛋白A的特异的IgG以及唾液中针对葡聚糖结合蛋白A的特异的IgA。与霍乱毒素 - (GbpA)、未免疫组、空白壳聚糖纳米颗粒组作比较。 结果 :产生的血清和唾液中针对GbpA的特异的IgG、IgA抗体滴度远大于未免疫组、空白壳聚糖纳米颗粒组 ,与霍乱毒素 - (GbpA)组抗体滴度相当。结论 :证明壳聚糖纳米颗粒系统可作为经鼻运输葡聚糖结合蛋白A的载体系统。 展开更多

关键词 葡聚糖结合蛋白A 壳聚糖纳米颗粒 ELISA

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变形链球菌葡聚糖结合蛋白A真核表达质粒pcDNA3.1/GBD在哺乳动物细胞中的表达 被引量：1

15

作者 苏凌云 吴补领 +1 位作者 李福洋 陆群 《华西口腔医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第1期10-12,共3页

目的　观察变形链球菌葡聚糖结合蛋白A(GbpA)的葡聚糖结合区 (GBD)真核表达质粒pcDNA3 1 GBD在哺乳动物细胞COS_7的表达情况。方法　通过基因重组技术构建真核表达质粒pcDNA3 1 GBD ,通过脂质体转染法将其转染至COS_7细胞 ,通过免疫组化... 目的　观察变形链球菌葡聚糖结合蛋白A(GbpA)的葡聚糖结合区 (GBD)真核表达质粒pcDNA3 1 GBD在哺乳动物细胞COS_7的表达情况。方法　通过基因重组技术构建真核表达质粒pcDNA3 1 GBD ,通过脂质体转染法将其转染至COS_7细胞 ,通过免疫组化SABC法检测其在COS_7细胞的表达。结果　pcDAN3 1 GBD质粒转染的细胞质呈棕黄色染色 ,胞核无着色 ,pcDAN3 1空载体转染的细胞质及胞核无着色 ,空白对照组也无着色。结论　质粒pcDAN3 1 GBD转染COS_7后能够在细胞内翻译、表达 ,表达的蛋白质位于细胞质中 ,可与抗GbpA抗体特异性结合 ,具有抗原性 。 展开更多

关键词 变形链球菌 葡聚糖结合蛋白A GbpA 真核表达 质粒 哺乳动物 基因表达

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葡聚糖结合蛋白A-壳聚糖纳米颗粒系统的构建及其特征

16

作者 江川 吴补领 苏凌云 《牙体牙髓牙周病学杂志》 CAS 2004年第3期154-157,共4页

目的 :制备葡聚糖结合蛋白A(GbpA) -壳聚糖纳米颗粒系统 ,检测其物理性能。方法 :制备葡聚糖结合蛋白A -壳聚糖纳米颗粒系统并检测颗粒大小、形态、包装容量、包装效率、稳定性、包裹方式。结果 :葡聚糖结合蛋白A(GbpA) -壳聚糖纳米颗... 目的 :制备葡聚糖结合蛋白A(GbpA) -壳聚糖纳米颗粒系统 ,检测其物理性能。方法 :制备葡聚糖结合蛋白A -壳聚糖纳米颗粒系统并检测颗粒大小、形态、包装容量、包装效率、稳定性、包裹方式。结果 :葡聚糖结合蛋白A(GbpA) -壳聚糖纳米颗粒大小为 5 0～ 10 0nm之间 ,类似球形 ,散在分布 ,较为均匀 ,呈聚集团块状存在。包装效率为 99% ,包装容量为 4 3%。在 4℃稳定。电泳显示纳米颗粒上清中GbpA与游离GbpA在同一分子水平。CLSM图像研究证实葡聚糖结合蛋白A包裹于壳聚糖纳米颗粒内 ,不仅仅结合于其表面。结论 :葡聚糖结合蛋白A(GbpA)可以与壳聚糖结合形成纳米颗粒 ,且包装容量、包装效率、稳定性均较高。 展开更多

关键词 葡聚糖结合蛋白A 壳聚糖 纳米颗粒

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变形链球菌葡聚糖结合蛋白D基因失活菌株的致龋特性研究 被引量：1

17

作者 赵红萍 吴补领 +2 位作者 苏凌云 刘艳丽 于世宾 《总装备部医学学报》 2007年第4期187-190,184,共5页

目的观察变形链球菌葡聚糖结合蛋白D(gbpD)基因失活菌株的生长、产酸、耐酸和形成生物膜的能力,为进一步明确GbpD蛋白的功能提供重要信息。方法将gbpD基因失活菌和野生菌分别厌氧培养,观察并比较其生长曲线和产酸、耐酸能力;分别在96孔... 目的观察变形链球菌葡聚糖结合蛋白D(gbpD)基因失活菌株的生长、产酸、耐酸和形成生物膜的能力,为进一步明确GbpD蛋白的功能提供重要信息。方法将gbpD基因失活菌和野生菌分别厌氧培养,观察并比较其生长曲线和产酸、耐酸能力;分别在96孔酶标板中厌氧培养48 h后,使用结晶紫溶液染色,乙醇/丙酮混合液显色,测量OD575值,以定量反映生物膜形成量。以无菌唾液包被釉质片后分为两组,分别与gbpD基因失活菌和野生菌共同厌氧孵育48 h,扫描电镜观察釉质片表面形成的生物膜形态。结果gbpD基因失活菌株和野生菌的生长曲线及产酸、耐酸能力无显著性差异;gbpD基因失活菌株生物膜形成量OD值(0.30±0.10)显著低于野生菌(0.59±0.27);扫描电镜发现野生菌的生物膜厚而致密,菌细胞排列规则;突变菌株的生物膜结构菲薄,菌细胞排列紊乱。结论gbpD基因失活对变形链球菌的生物膜形成产生影响,推测GbpD蛋白可能与变形链球菌生物膜形成能力和生物膜结构有关。 展开更多

关键词 变形链球菌 葡聚糖结合蛋白D 致龋性

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变形链球菌葡聚糖结合蛋白C基因特异片段的分子克隆 被引量：1

18

作者 孙汉堂 吴补领 +1 位作者 杨聚才 孙叶芳 《牙体牙髓牙周病学杂志》 CAS 2000年第3期120-122,共3页

目的 :克隆变形链球菌葡聚糖结合蛋白C基因 (gbpC)编码序列的特异片段。方法 :根据文献报道的gbpC序列设计并合成一对寡核苷酸引物 ,PCR扩增位于gbpC编码序列 110 5～ 15 5 4bp间的一段特异片段 ,扩增产物经回收、酶切后 ,定向插入克隆... 目的 :克隆变形链球菌葡聚糖结合蛋白C基因 (gbpC)编码序列的特异片段。方法 :根据文献报道的gbpC序列设计并合成一对寡核苷酸引物 ,PCR扩增位于gbpC编码序列 110 5～ 15 5 4bp间的一段特异片段 ,扩增产物经回收、酶切后 ,定向插入克隆载体puc18中 ,连接产物转化感受态大肠杆菌DH5α ,挑选阳性克隆 ,鉴定后进行序列测定。结果 :测序结果与Sato等报道的序列一致。结论 :成功克隆了gbpC基因片段 ,为进一步的研究 (探针标记、杂交及表达等 ) 展开更多

关键词 变形链球菌 葡聚糖结合蛋白 PCR 分子克隆 防龋

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葡聚糖结合蛋白的原核表达及检测深部真菌感染的应用

19

作者 朱李茹 黄友明 +2 位作者 章宏祥 周发友 唐晓磊 《基础医学与临床》 2022年第6期883-889,共7页

目的验证葡聚糖特异性的结合蛋白用于检测深部真菌感染(IFI)患者血清中(1,3)-β-D-葡聚糖的应用价值。方法通过构建美洲鲎葡聚糖结合蛋白(GBP)252位氨基酸至668位氨基酸活性区域表达质粒——pET30a-GBP252-668,表达并纯化获得GBP252-66... 目的验证葡聚糖特异性的结合蛋白用于检测深部真菌感染(IFI)患者血清中(1,3)-β-D-葡聚糖的应用价值。方法通过构建美洲鲎葡聚糖结合蛋白(GBP)252位氨基酸至668位氨基酸活性区域表达质粒——pET30a-GBP252-668,表达并纯化获得GBP252-668重组蛋白。随后通过棋盘法构建双GBP252-668夹心法,并以此检测IFI患者血清中(1,3)-β-D-葡聚糖。同时与G试验(G-Test)进行检测性能的比对。结果成功纯化获得分子质量约为46 ku的GBP252-668重组蛋白,并确定最佳包被浓度和检测浓度分别为8和16 g/L,以此构建了GBP252-668夹心法。对48名深部真菌感染患者和48名健康人血清进行检测,根据受试者工作特征曲线(ROC)可得其灵敏度为91.67%,特异度为89.58%。其灵敏度与G-Test相当,特异性高于同批次G-Test(79.17%)。结论本研究构建的双GBP夹心法是一种极具潜力检测侵袭性真菌的方法,其灵敏度与G-Test相当,特异性高于同批次G-Test。 展开更多

关键词 深部真菌感染 葡聚糖结合蛋白 夹心法 临床应用

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携带变形链球菌表面蛋白、葡聚糖结合蛋白及信号肽基因的真核表达质粒的构建

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作者 柴巧学 刘建国 杨德琴 《广东牙病防治》 2011年第4期181-185,共5页

目的通过构建带有变形链球菌表面蛋白SpaP的P区、葡聚糖结合蛋白A葡聚糖结合区(glucan bind-ing domain,GBD)及一段信号肽基因的嵌和体真核表达质粒pSSG,为基因疫苗的制备提供实验基础。方法通过PCR扩增,获得分别编码SpaP的P区和GBD的... 目的通过构建带有变形链球菌表面蛋白SpaP的P区、葡聚糖结合蛋白A葡聚糖结合区(glucan bind-ing domain,GBD)及一段信号肽基因的嵌和体真核表达质粒pSSG,为基因疫苗的制备提供实验基础。方法通过PCR扩增,获得分别编码SpaP的P区和GBD的两个基因片段sp和gg,以及人白介素2信号肽基因(signal)。将它们分别定向插入pMD20-T克隆载体中,转化感受态大肠杆菌DH5α,挑取阳性克隆,初步鉴定后测序。将获得的3个基因片段分别双酶切,胶回收纯化后将同样进行双酶切的pVAX1质粒在T4 DNA连接酶作用下进行连接反应,获得真核表达质粒pSSG,并转化DH5α,提取纯化pSSG,进行质粒RCR,酶切电泳鉴定并测序。结果真核表达质粒pSSG构建正确,目的基因sp、gg和signal定向插入至真核表达载体。结论真核表达质粒pSSG包含了SpaP的P区和GBD以及人白介素2信号肽的编码基因,为基因疫苗研究奠定基础。 展开更多

关键词 变形链球菌 表面蛋白抗原 葡聚糖结合蛋白 真核表达质粒 基因疫苗

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