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金顶侧耳的营养缺陷标记 被引量:5
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作者 姚方杰 李玉 《吉林农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第6期25-26,33,共3页
以金顶侧耳(Pleurotus citrinipileatus)JND-020菌株为供试材料,通过对孢子进行紫外诱变,使其发生12种单重营养缺陷突变,获得不同基因型的营养缺陷突变菌株33株,发生1种双重营养缺陷突变,获得双重营齐缺陷突变菌株1株,总计34株。
关键词 金顶侧耳 营养缺陷标记 营养缺陷突变 紫外诱变
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热球菌目(Thermococcales)遗传操作系统研究与应用进展
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作者 付寅坤 肖湘 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第9期28-34,共7页
热球菌目(Thermococcales)是一类分离自浅海热泉或者深海热液口的超嗜热微生物,包括火球菌(Pyrococcus)、热球菌(Thermococcus)、古老球菌(Palaeococcus)。研究其生命活动的分子机制,基因的功能等必须借助遗传操作系统。由于选择标记的... 热球菌目(Thermococcales)是一类分离自浅海热泉或者深海热液口的超嗜热微生物,包括火球菌(Pyrococcus)、热球菌(Thermococcus)、古老球菌(Palaeococcus)。研究其生命活动的分子机制,基因的功能等必须借助遗传操作系统。由于选择标记的限制,Thermococcales遗传操作系统落后于其他菌株。近年来,在Thermococcales发现了内源质粒并可以将其改造用作遗传工具。如在Thermococcus kodakarensis及Pyrococcus furious等菌株内都建立了成熟的遗传系统,并用于基因敲除以及基因表达。将就Thermococcales内源质粒的发现和遗传操作系统的发展与应用加以阐述。 展开更多
关键词 Thermococcales 遗传操作系统 营养缺陷标记 抗生素标记 穿梭载体
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基于CRISPR/Cas9的蛹虫草无抗性标记转化技术的构建 被引量:1
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作者 李波 邹根 +5 位作者 周思池 尹昕 杨占山 鲍大鹏 李晓玲 汪滢 《菌物学报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第7期1044-1054,共11页
传统的真菌遗传改造方法需要抗性标记,但目前可使用的抗性标记基因非常有限,导致蛹虫草遗传改造面临着抗性基因数量不足的问题,且尚未能实现多个目的基因的连续敲入或敲除,因此在蛹虫草中建立高效的无抗性标记转化技术显得尤为重要。本... 传统的真菌遗传改造方法需要抗性标记,但目前可使用的抗性标记基因非常有限,导致蛹虫草遗传改造面临着抗性基因数量不足的问题,且尚未能实现多个目的基因的连续敲入或敲除,因此在蛹虫草中建立高效的无抗性标记转化技术显得尤为重要。本研究利用CRISPR/Cas9技术对蛹虫草的Cmura5基因进行编辑,通过内源5S-1、5S-2和U6启动子对gRNA进行转录,结果表明使用U6启动子对Cmura5基因的编辑效率达到了100%。在尿嘧啶缺陷型菌株Cmura5–中,回补野生型Cmura5基因可实现正向选择,即野生型菌株可以在基础培养基上生长。利用设计的同源臂对Cmura5基因进行回收,可以实现反向选择,即野生型在含有5-氟乳清酸培养基中生长受到抑制。以尿嘧啶缺陷型Cmura5–为出发菌株,利用无抗性标记转化技术,导入一个重组质粒效率为75%;连续导入2个重组质粒效率为80%;连续导入3个重组质粒效率为100%;连续导入4个重组质粒效率为50%,平均转化效率为75.7%,每一轮的标记回收率均在100%,实现了4个外源基因在蛹虫草中同时表达。 展开更多
关键词 CRISPR/Cas9 蛹虫草 无抗性标记 ura5 营养缺陷标记
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里氏木霉QM9414尿嘧啶缺陷型转化体系改进和β-葡萄糖苷酶的过量表达 被引量:1
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作者 钟立霞 钱远超 +1 位作者 戴美学 钟耀华 《化工学报》 EI CAS CSCD 北大核心 2016年第6期2510-2518,共9页
里氏木霉是广泛应用于纤维素酶生产的工业真菌,但高产突变株遗传操作困难,限制了菌种改良。首先利用定点整合策略敲除里氏木霉突变株QM9414的pyr4基因,成功构建尿嘧啶营养缺陷型菌株QP4,其遗传转化效率显著提高,而且产酶能力不受影响。... 里氏木霉是广泛应用于纤维素酶生产的工业真菌,但高产突变株遗传操作困难,限制了菌种改良。首先利用定点整合策略敲除里氏木霉突变株QM9414的pyr4基因,成功构建尿嘧啶营养缺陷型菌株QP4,其遗传转化效率显著提高,而且产酶能力不受影响。进一步在QP4中过量表达β-葡萄糖苷酶(BGL)基因bgl1,经大量平板显色筛选获得2株BGL活力明显增强的工程菌QPB4和QPB5,其酶活分别提高10.01倍和8.26倍。利用发酵酶液对2种不同预处理的玉米芯底物进行水解糖化实验,结果显示以酸处理玉米芯为底物时QPB4和QPB5的葡萄糖得率比QP4分别提高60.98%和52.44%,而以脱木素处理玉米芯为底物时其葡萄糖得率分别提高80.01%和86.00%。研究表明改进里氏木霉高产突变株遗传转化体系可以显著促进菌株改良,提高糖化应用效果。 展开更多
关键词 纤维素酶 里氏木霉高产突变株 遗传转化 水解糖化 尿嘧啶营养缺陷标记 构建和表达 生物技术 生物工程
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