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电穿孔介导马尔尼菲青霉转化体系的建立和优化 被引量:4
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作者 陈阳霞 顾桉菁 +2 位作者 梁宇恒 马团 席丽艳 《中国真菌学杂志》 CSCD 2014年第1期12-15,共4页
目的建立和优化马尔尼菲青霉电穿孔转化体系,为其基因功能研究提供良好平台。方法直接使用马尔尼菲青霉缺陷株SPM4(pyrG-,niaD-)萌发孢子进行电穿孔转化,并通过改变孢子龄、孢子萌发时间、质粒浓度、电场强度等影响因素对体系进行优化... 目的建立和优化马尔尼菲青霉电穿孔转化体系,为其基因功能研究提供良好平台。方法直接使用马尔尼菲青霉缺陷株SPM4(pyrG-,niaD-)萌发孢子进行电穿孔转化,并通过改变孢子龄、孢子萌发时间、质粒浓度、电场强度等影响因素对体系进行优化。结果适合SPM4电穿孔转化条件为:孢子龄为6 d,孢子萌发时间为4 h,电场强度为5 kV/cm。上述条件下分别使用1μg环状或线性化质粒DNA转化SPM4,平均可得到21个和13个转化子。结论马尔尼菲青霉电穿孔转化效率高,重复性好,针对SPM4萌发孢子,环状质粒较线性化质粒电穿孔转化效率高。 展开更多
关键词 马尔尼菲青霉 萌发孢子 电穿孔
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黑曲霉电转化条件的研究 被引量:4
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作者 李松 王正祥 《微生物学杂志》 CAS CSCD 2010年第1期11-15,共5页
研究避免了繁琐的原生体制备过程,直接使用萌发的黑曲霉孢子进行电转化,以潮霉素B作为筛选标记,从孢子萌发时间、电场强度及质粒浓度等方面考察了电转化效率的影响因素。研究表明,针对A.nigerMGG029-ΔaamA,其理想的电转化条件:孢子龄为... 研究避免了繁琐的原生体制备过程,直接使用萌发的黑曲霉孢子进行电转化,以潮霉素B作为筛选标记,从孢子萌发时间、电场强度及质粒浓度等方面考察了电转化效率的影响因素。研究表明,针对A.nigerMGG029-ΔaamA,其理想的电转化条件:孢子龄为4d,孢子萌发时间为2h,电场强度为5kV/cm。在上述条件下分别使用1μg环状或线状pBC-Hygro质粒DNA进行转化,平均可以得到34个和51个转化子,而在同样条件下使用质粒pRS303H平均可以获得163个和258个转化子。 展开更多
关键词 黑曲霉 萌发孢子 电转化
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潮霉素B抗性为选择标记的整合型表达载体的构建及在米根霉中的遗传转化 被引量:4
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作者 张旻 姜绍通 +4 位作者 郑娟 郑志 李兴江 潘丽军 罗水忠 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第8期1203-1218,共16页
为了建立适合米根霉的遗传转化体系,应用重叠延伸PCR的方法构建了以潮霉素B抗性为选择标记的单交换整合型表达载体p BS-hygro-ldh A;分别采用PEG/Ca Cl2介导的原生质体转化、原生质体电转化及萌发孢子电转化的方法将表达载体p BS-hygro-... 为了建立适合米根霉的遗传转化体系,应用重叠延伸PCR的方法构建了以潮霉素B抗性为选择标记的单交换整合型表达载体p BS-hygro-ldh A;分别采用PEG/Ca Cl2介导的原生质体转化、原生质体电转化及萌发孢子电转化的方法将表达载体p BS-hygro-ldh A转化入米根霉AS 3.819菌株中,并研究了菌丝酶解时间、孢子萌发时间以及电转化电场强度对于转化效率的影响;通过荧光定量PCR(q PCR)对米根霉转化子基因组中质粒整合拷贝数进行了检测,并研究了其对米根霉转化子抗性稳定性的影响。实验结果表明成功获得整合了表达载体p BS-hygro-ldh A的米根霉转化子。菌丝酶解140 min产生的原生质体其再生率和转化率最高,原生质体电转化最佳电场强度为13 k V/cm,孢子萌发2.5 h转化率最高,萌发孢子电转化最佳电场强度为14 k V/cm。萌发孢子电转化方法转化率要高于原生质体转化的方法。荧光定量PCR检测结果表明,在一定范围内,高质粒整合拷贝数的米根霉转化子比较稳定。研究建立了用于工业米根霉菌株的遗传转化体系,为米根霉代谢调控研究以及菌种改造工作提供了基础与支持。 展开更多
关键词 米根霉 整合载体 原生质体 萌发孢子 同源重组 重叠延伸PCR 电穿孔
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中华缩叶藓孢子萌发与原丝体发育特征研究 被引量:17
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作者 李敏 赵建成 +1 位作者 黄士良 张元明 《西北植物学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第8期1521-1525,共5页
通过室内人工培养中华缩叶藓的孢子,在光学显微镜下详细观察了其孢子萌发、原丝体发育及配子体发生的全过程.结果表明:中华缩叶藓的孢子在壁内萌发,随后分裂产生块状原丝体;块状原丝体上可产生两种丝状体,一种是具疣的棒状原丝体,另一... 通过室内人工培养中华缩叶藓的孢子,在光学显微镜下详细观察了其孢子萌发、原丝体发育及配子体发生的全过程.结果表明:中华缩叶藓的孢子在壁内萌发,随后分裂产生块状原丝体;块状原丝体上可产生两种丝状体,一种是具疣的棒状原丝体,另一种是由长圆柱状细胞组成的轴丝体;配子体原始细胞只产生于块状原丝体上.根据中华缩叶藓的孢子萌发和原丝体发育特征,并参照Nishida对藓类植物孢子萌发类型的划分,确定中华缩叶藓的萌发孢子型应属于缩叶藓型(Ptychomitrium-type). 展开更多
关键词 中华缩叶藓 原丝体发育 萌发孢子
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北方美姿藓(Timmia bavarica)原丝体发育特征研究 被引量:4
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作者 于淑玲 《西北农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第5期350-353,共4页
在人工培养北方美姿藓(Timmia bavarica)孢子的基础上,对其孢子萌发、原丝体发育及配子体发生的全过程进行了观察和照相。结果表明,该种孢子萌发后直接产生块状原丝体;块状原丝体上产生短圆柱形细胞组成的绿丝体、长细胞组成的绿丝体、... 在人工培养北方美姿藓(Timmia bavarica)孢子的基础上,对其孢子萌发、原丝体发育及配子体发生的全过程进行了观察和照相。结果表明,该种孢子萌发后直接产生块状原丝体;块状原丝体上产生短圆柱形细胞组成的绿丝体、长细胞组成的绿丝体、轴丝体、次生块状原丝体、棒状的叶状原丝体和假根。同时,还对北方美姿藓原丝体发育的特征进行了分析和讨论,初步确定北方美姿藓孢子萌发类型为黑藓型(Andreaeatype)。 展开更多
关键词 北方美姿藓 原丝体发育 萌发孢子
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人工生产僵蚕菌种质量检验 被引量:1
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作者 孙佩 叶霄 +2 位作者 童文 龙燕梅 况再银 《农学学报》 2022年第5期47-53,76,共8页
本研究旨在保障人工养殖僵蚕成功,建立人工生产僵蚕菌种(球孢白僵菌孢子粉)的检验方法和质量评价指标。以不同来源僵蚕菌种为试材,用血球计数板对萌发后的孢子计数,用平板菌落计数法测定杂菌和球孢白僵菌落数。液固双相发酵制备的僵蚕菌... 本研究旨在保障人工养殖僵蚕成功,建立人工生产僵蚕菌种(球孢白僵菌孢子粉)的检验方法和质量评价指标。以不同来源僵蚕菌种为试材,用血球计数板对萌发后的孢子计数,用平板菌落计数法测定杂菌和球孢白僵菌落数。液固双相发酵制备的僵蚕菌种,萌发活孢数和平板活孢数均>10^(10)孢子/g,真菌杂菌数<10^(5) CFU/g,细菌杂菌数小于<10^(4) CFU/g;自然僵蚕菌种萌发活孢数和平板活孢数均<10^(10)孢子/g,真菌杂菌数>10^(5) CFU/g,细菌杂菌数>10^(8) CFU/g。建立的僵蚕菌种检验方法可行,液固双相发酵法制备的僵蚕菌种各项指标均优于自然僵蚕菌种,可在人工僵蚕基地推广应用。 展开更多
关键词 僵蚕 液固双相发酵法 球孢白僵菌孢子 萌发孢子 杂菌数
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MB染色检测PKA调节亚基对烟曲霉萌发孢子活性的影响
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作者 张姗姗 吴翠娇 +4 位作者 赵巍 邵建业 王伟伟 牛倩倩 王斌 《青岛大学学报(自然科学版)》 CAS 2017年第2期49-52,共4页
烟曲霉是一种机会性致病真菌,肺巨噬细胞(AM)通过活性氧物质(ROS)清除萌发的烟曲霉孢子。蛋白激酶A(PKA)参与调节多种生物体内的氧化损伤应答反应。本实验通过亚甲基蓝(MB)染色和再培养试验,检测烟曲霉野生株(WT)与PKA调节亚基(pkaR)缺... 烟曲霉是一种机会性致病真菌,肺巨噬细胞(AM)通过活性氧物质(ROS)清除萌发的烟曲霉孢子。蛋白激酶A(PKA)参与调节多种生物体内的氧化损伤应答反应。本实验通过亚甲基蓝(MB)染色和再培养试验,检测烟曲霉野生株(WT)与PKA调节亚基(pkaR)缺失株(ΔpkaR)萌发孢子的活性,分析pkaR基因对烟曲霉萌发孢子抗氧化损伤的影响。实验结果表明,ΔpkaR株的萌发孢子,对于氧化压力有更强的抵抗能力,表明pkaR基因参与调节烟曲霉对于氧化损伤的抵抗。 展开更多
关键词 烟曲霉 萌发孢子活性 PKA调节亚基 亚甲基蓝
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小麦条锈菌cDNA文库构建和表达序列标签(ESTs)分析(英文) 被引量:5
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作者 张永红 屈志鹏 +5 位作者 郑文明 王艳飞 徐亮胜 赵杰 黄丽丽 康振生 《植物病理学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第5期487-499,共13页
小麦条锈菌(Puccinia striiformisf.sp.tritici)是全世界范围内小麦生产上的重要病原真菌,但是对小麦条锈菌的基因组和基因功能却了解甚少。为了促进小麦条锈菌基因组学的发展和大规模基因发现,我们以噬菌体λTrip1Ex2为载体,采用SMART... 小麦条锈菌(Puccinia striiformisf.sp.tritici)是全世界范围内小麦生产上的重要病原真菌,但是对小麦条锈菌的基因组和基因功能却了解甚少。为了促进小麦条锈菌基因组学的发展和大规模基因发现,我们以噬菌体λTrip1Ex2为载体,采用SMART技术构建了小麦条锈菌萌发夏孢子的cDNA文库。原始文库的滴度为1.1×106pfu/mL,平均插入片段长度为750 bp。从文库中随机挑取279个cDNA克隆测序,分析发现这些ESTs的平均GC含量为45.08%。通过聚类分析,279个ESTs拼接成31个contigs和80 singletons。BLASTx分析表明,47%的ESTs与GenBank中报道的功能已知或未知蛋白具有相似性。tBLASTx分析表明12个uniseqs与EST数据库中的序列具有相似性,其中9个是来自担子菌的cDNA文库。几个EST与已知的真菌致病相关基因具有高度相似性。RT-PCR分析了几个基因在小麦条锈菌侵染过程中的表达水平。这些结果为小麦条锈菌夏孢子萌发以及侵染寄主过程中的基因表达研究奠定了很好的分子生物学基础。 展开更多
关键词 CDNA文库 表达序列标签(ESTs) 基因表达 萌发孢子 小麦条锈菌
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枯草芽孢杆菌萌发后孢子响应甲醛胁迫过程的拉曼光谱研究 被引量:5
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作者 程琴 董蓉 +2 位作者 黄大林 黄庶识 陈丽梅 《中国激光》 EI CAS CSCD 北大核心 2011年第10期230-236,共7页
为了探究枯草芽孢杆菌萌发后孢子响应甲醛胁迫过程的生理反应及其耐受甲醛机理,利用激光光镊拉曼光谱(LTRS)系统研究不同浓度甲醛胁迫萌发后孢子2 h的响应过程。结果显示,营养细胞和萌发后孢子对甲醛都具有耐受能力,但萌发后孢子对不... 为了探究枯草芽孢杆菌萌发后孢子响应甲醛胁迫过程的生理反应及其耐受甲醛机理,利用激光光镊拉曼光谱(LTRS)系统研究不同浓度甲醛胁迫萌发后孢子2 h的响应过程。结果显示,营养细胞和萌发后孢子对甲醛都具有耐受能力,但萌发后孢子对不同浓度甲醛胁迫产生的生理响应效应不同;当萌发后孢子在不含甲醛的培养基中生长时,与生物大分子相应的特征峰强度增加先经历0~0.5 h的延缓期,接着1.5~2.0 h是一个快速上升的过程;当分别用0.4,0.8和1.0 mmol/L甲醛胁迫萌发后孢子时,相应特征峰强度都有一个先上升后下降的过程,峰强下降的时间拐点分别是1.5,1.0和0.5 h。光谱分析结果表明,0.4 mmol/L甲醛的胁迫会对细胞造成轻度伤害;0.8 mmol/L甲醛胁迫会抑制孢子DNA的复制,造成膜脂碳氢链断裂;1.0 mmol/L甲醛胁迫时,细胞在0.5 h内对甲醛产生了剧烈的胁迫响应,导致生物大分子含量在0.5~2.0 h内严重下降,细胞受到严重伤害。 展开更多
关键词 光谱学 拉曼光谱 单细胞分析 枯草芽孢杆菌 萌发孢子 甲醛胁迫
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