猪源肠毒素性大肠杆菌菌毛基因多重PCR检测方法的建立 被引量：11

1

作者 华荣虹 张书霞 何孔旺 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第2期162-164,共3页

为了对猪源产肠毒素性大肠杆菌(ETEC)的4种主要菌毛(K 88、K 99、F 41和987p)进行快速检测和分型,建立了检测4种菌毛的多重PCR方法。首先设计合成4对4种菌毛特异性的引物,然后用4种菌毛参考ETEC菌株优化了多重PCR方法。该方法对K 88、K... 为了对猪源产肠毒素性大肠杆菌(ETEC)的4种主要菌毛(K 88、K 99、F 41和987p)进行快速检测和分型,建立了检测4种菌毛的多重PCR方法。首先设计合成4对4种菌毛特异性的引物,然后用4种菌毛参考ETEC菌株优化了多重PCR方法。该方法对K 88、K 99、F 41和987p 4种菌毛的扩增产物分别为201,314,380和459 bp。对4种扩增产物分别进行酶切鉴定,结果均得到与预期一致的2个片段。对各个参考菌株不同组合的检测结果为100%符合。结果表明,该多重PCR方法具有很好的特异性和敏感性,可用于ETEC性腹泻的辅助诊断及ETEC菌毛抗原分型检测。 展开更多

关键词 肠毒素性大肠杆菌(ETEC) 菌毛基因 多重PCR

下载PDF 职称材料

3株致病性鸡大肠杆菌P型菌毛结构基因的克隆、序列测定及同源性分析 被引量：1

2

作者 苗玉和 王文成 张贵刚 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第3期250-252,共3页

用鸡致病性大肠杆菌分离株O1、O2和O78的基因组DNA做为模板,PCR分别扩增出了0.55kb的P型菌毛结构基因(papA)。将扩增得到的3个papA基因片段分别克隆进pGEM-T○R载体中,转化至受体菌JM109中,用Amp/IPTG/X-gal琼脂平板蓝白菌落筛选法,得... 用鸡致病性大肠杆菌分离株O1、O2和O78的基因组DNA做为模板,PCR分别扩增出了0.55kb的P型菌毛结构基因(papA)。将扩增得到的3个papA基因片段分别克隆进pGEM-T○R载体中,转化至受体菌JM109中,用Amp/IPTG/X-gal琼脂平板蓝白菌落筛选法,得到含阳性重组子的菌株,提取质粒后用BamH和Sal双酶切进行鉴定。所得阳性重组子进行DNA序列测定,测序结果经DNAStar核酸分析软件包分析比较,结果表明,所构建的克隆质粒中均含有相应完整papA基因,其开放式阅读框架大小为549bp,编码182个氨基酸。此3株菌的P型菌毛结构基因的同源性为98.9%～100%,其中O1株和O78株的P型菌毛基因的ORF序列100%相同,O2株有2个碱基与前两者不同。 展开更多

关键词 结构基因 P型菌毛 鸡大肠杆菌 同源性分析 克隆 鸡致病性大肠杆菌 DNA序列测定 基因组DNA 分析软件包 基因片段 琼脂平板 IPTG 分析比较 Star 菌毛基因 重组子 分离株 PCR 受体菌 筛选法 Amp Sal 双酶切 开放式 氨基酸

下载PDF 职称材料

大理地区某规模化乳牛场致犊牛腹泻的病原分析 被引量：4

3

作者 周玉照 张小苗 +1 位作者 杨晓伟 张以芳 《福建畜牧兽医》 2022年第5期38-43,共6页

为弄清导致大理地区某规模化乳牛场犊牛严重腹泻的病因,对采集的样品进行细菌分离培养、生化试验、动物致病性试验、菌毛基因和毒力基因检测、药敏试验、PCR检测(牛轮状病毒、牛冠状病毒、牛病毒性腹泻病毒)及核苷酸序列分析。结果显示... 为弄清导致大理地区某规模化乳牛场犊牛严重腹泻的病因,对采集的样品进行细菌分离培养、生化试验、动物致病性试验、菌毛基因和毒力基因检测、药敏试验、PCR检测(牛轮状病毒、牛冠状病毒、牛病毒性腹泻病毒)及核苷酸序列分析。结果显示,在犊牛直肠棉拭子、分离后粪样、垫料中大肠杆菌检出率均为100%,均具有很强的致病性;而成年牛直肠棉拭子大肠杆菌检出率为92.86%,无致病性;氧化塘粪样大肠杆菌检出率为0%;在犊牛直肠分离到的致病性大肠杆菌对青霉素耐药,对阿莫西林克拉维酸、头孢噻吩、头孢氨苄、头孢曲松、卡那霉素、庆大霉素、诺氟沙星、磺胺嘧啶、氟苯尼考都敏感;在粪样和垫料中分离到的致病性大肠杆菌对10种药物都敏感;在成年牛血样中PCR扩增获得大小约298 bp的DL BVDV目的条带,而犊牛血样均为阴性,通过比对分析后确定DL BVDV序列属于BVDV-1b亚型。导致大理地区某规模化乳牛场犊牛严重腹泻的主要病原为致病性大肠杆菌K99。 展开更多

关键词 犊牛腹泻 菌毛基因 毒力基因 致病性大肠杆菌 BVDV

下载PDF 职称材料

不同培养条件对禽源沙门菌菌毛基因表达的影响 被引量：5

4

作者 龚建森 王鑫 +4 位作者 韩先干 朱春红 俞燕 刘学贤 徐步 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第1期116-122,共7页

旨在研究不同血清型禽源沙门菌菌毛基因分布特征及不同培养条件下菌毛基因的表达差异。通过PCR方法对鸡白痢沙门菌、鸡伤寒沙门菌、鼠伤寒沙门菌和肠炎沙门菌的17种沙门菌菌毛操纵子基因进行检测。同时,应用RT-PCR方法对肉汤静置、肉汤... 旨在研究不同血清型禽源沙门菌菌毛基因分布特征及不同培养条件下菌毛基因的表达差异。通过PCR方法对鸡白痢沙门菌、鸡伤寒沙门菌、鼠伤寒沙门菌和肠炎沙门菌的17种沙门菌菌毛操纵子基因进行检测。同时,应用RT-PCR方法对肉汤静置、肉汤震荡与平板静置3种培养条件下菌毛基因的表达情况进行检测。研究结果显示,被检测的4种血清型禽源沙门菌菌株的菌毛基因型各不相同,其中10种菌毛基因为保守基因,而其它7种存在差异性分布。RT-PCR检测发现,不同血清型菌株在3种培养条件下菌毛基因的表达存在一定差异,其中鸡白痢沙门菌和肠炎沙门菌在肉汤静置培养条件下表达的菌毛基因数量显著高于其它2种培养条件(P<0.05),而鸡伤寒沙门菌和鼠伤寒沙门菌在3种培养条件下表达的菌毛基因数量差异较小(P>0.05)。结果提示:4种血清型禽源沙门菌菌株具有不同的菌毛基因类型,鸡白痢沙门菌与肠炎沙门菌的菌毛基因表达数量与其培养方式存在相关性。 展开更多

关键词 禽源沙门菌 菌毛基因 血清型 细菌培养

下载PDF 职称材料

检测987p^+肠毒素性大肠埃希氏菌PCR方法的建立 被引量：3

5

作者 华荣虹 张书霞 +2 位作者 何孔旺 倪艳秀 杨宗照 《中国兽医科技》 CSCD 北大核心 2002年第1期3-5,共3页

以 98 7p菌毛结构基因保守序列为靶序列 ,设计合成了 1对可扩增 45 9bp目的片段的引物 ,建立了检测肠毒素性大肠埃希氏菌 987p菌毛基因的PCR方法。该方法对K 88+ (+为菌毛阳性 )、K 99+ 、F 41+ 参考菌株和链球菌、葡萄球菌、巴氏杆菌... 以 98 7p菌毛结构基因保守序列为靶序列 ,设计合成了 1对可扩增 45 9bp目的片段的引物 ,建立了检测肠毒素性大肠埃希氏菌 987p菌毛基因的PCR方法。该方法对K 88+ (+为菌毛阳性 )、K 99+ 、F 41+ 参考菌株和链球菌、葡萄球菌、巴氏杆菌的检测结果均为阴性 ;该方法的敏感度可达 10 2 CFU ,对 2 0株腹泻仔猪粪便分离物进行检测 ,有 1株为阳性 ,与血清学检测的结果一致。结果表明 ,此方法特异性和敏感性都很高 ,可用于临床 展开更多

关键词 肠毒素性大肠埃希氏菌 菌毛基因 PCR 检测方法 粘附性菌毛 腹泻 仔猪

下载PDF 职称材料

大肠杆菌菌毛基因多重PCR检测方法的建立与初步应用 被引量：4

6

作者 孙思萌 侯美佳 +3 位作者 冯启峥 石博 刘嘉利 师东方 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第1期46-51,共6页

为建立一种可以同时扩增大肠杆菌(E.coli)F4、F5、F6、F41和F18菌毛基因保守序列的多重PCR检测方法,本研究设计合成5对分别针对F4、F5、F6、F41和F18菌毛基因的特异性引物,以具有相应菌毛基因的E.coli参考菌株DNA为模板,通过对多重PCR... 为建立一种可以同时扩增大肠杆菌(E.coli)F4、F5、F6、F41和F18菌毛基因保守序列的多重PCR检测方法,本研究设计合成5对分别针对F4、F5、F6、F41和F18菌毛基因的特异性引物,以具有相应菌毛基因的E.coli参考菌株DNA为模板,通过对多重PCR反应条件的优化,建立了检测F4、F5、F6、F41和F18菌毛基因的多重PCR方法。所建立的多重PCR方法能够特异性扩增F4、F5、F6、F41、F18菌毛基因的目的片段,大小分别为770 bp、533 bp、422 bp、643 bp和1140 bp,该方法对沙门氏菌、猪丹毒杆菌、巴氏杆菌以及无菌毛基因的E.coli等参考菌株均无特异性扩增片段,检出F4、F5、F6、F41和F18菌毛基因的最低活菌浓度分别为5.3×10^5cfu/mL、3.7×10^6cfu/mL、3.1×10^5cfu/mL、3.7×10^7cfu/mL、6.9×10^5cfu/mL。用不同批次的引物和试剂进行3次多重PCR检测均能扩增出目的条带,表明建立的多重PCR方法有很好的批内和批间重复性。对90株大肠杆菌临床分离菌株菌毛基因进行检测,F4阳性率为3.33%,F5阳性率为2.22%,未检测到F6、F41和F18阳性菌株,其检测结果与常规单一PCR的检测结果一致。研究表明:建立的E.coli菌毛基因多重PCR分型方法具有很好的特异性、敏感性和重复性,可用于E.coli分离菌株菌毛基因型的快速鉴定,同时提高了检测效率。 展开更多

关键词 大肠杆菌 菌毛基因 多重PCR 检测

下载PDF 职称材料

大肠杆菌新型菌毛(F1987)基因文库的构建 被引量：3

7

作者 于凤鸣 房海 +3 位作者 陈翠珍 张晓君 巩元芳 马建军 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第2期147-149,共3页

用碱裂解法从表达新型菌毛 (F1987)的 E.coli DH5 α阳性转化子中提取相应质粒 DNA,用 Bam H 对相应质粒和载体质粒 (p U C19)分别进行酶切 ,酶切产物经过纯化并按一定比例混合后 ,加入 T4 DNA连接酶进行连接 ,连接产物用热激法转化受体... 用碱裂解法从表达新型菌毛 (F1987)的 E.coli DH5 α阳性转化子中提取相应质粒 DNA,用 Bam H 对相应质粒和载体质粒 (p U C19)分别进行酶切 ,酶切产物经过纯化并按一定比例混合后 ,加入 T4 DNA连接酶进行连接 ,连接产物用热激法转化受体菌 E.coli DH5 α,构建了相应的基因文库。 展开更多

关键词 大肠杆菌 菌毛基因 基因文库 载体质粒

下载PDF 职称材料

广西地区仔猪致病性大肠杆菌的菌毛基因多重PCR检测及质粒DNA指纹图谱分析

8

作者 谢永平 彭昊 +1 位作者 陈泽祥 杨威 《现代农业科技》 2010年第7期349-351,共3页

对广西地区56株仔猪致病性大肠杆菌进行菌毛基因的多重PCR检测及质粒DNA指纹图谱分析。多重PCR检测结果证实该方法可用于各大肠杆菌野生菌株的检测,且适用于仔猪大肠杆菌性腹泻病的快速诊断和流行病学调查。质粒DNA指纹图谱分析发现这5... 对广西地区56株仔猪致病性大肠杆菌进行菌毛基因的多重PCR检测及质粒DNA指纹图谱分析。多重PCR检测结果证实该方法可用于各大肠杆菌野生菌株的检测,且适用于仔猪大肠杆菌性腹泻病的快速诊断和流行病学调查。质粒DNA指纹图谱分析发现这56个菌株质粒的获得率为100%,来源相同的菌株具有相同或相似的质粒图谱,来源不同的菌株的质粒图谱一般不同。所有菌株都含有1条大小相同的质粒带,表明广西流行的猪大肠杆菌性腹泻病主要是由携带相同质粒的大肠杆菌引起。试验结果表明,质粒DNA指纹图谱法可作为大肠埃希氏菌分型的分子生物学方法。 展开更多

关键词 仔猪大肠杆菌 菌毛基因 多重PCR 质粒指纹图谱 广西壮族自治区

下载PDF 职称材料

检测K88^+肠毒素性大肠杆菌PCR方法的建立 被引量：10

9

作者 陆桂平 华荣虹 +1 位作者 张书霞 何孔旺 《畜牧与兽医》 北大核心 2002年第12期7-9,共3页

以K8 8菌毛结构基因保守序列为靶序列 ,设计合成了一对可扩增长 2 0 1bp的目的片段的引物 ,成功地建立了检测肠毒素性大肠杆菌(ETEC)K88菌毛基因的PCR方法。进行了PCR方法的特异性试验和敏感性试验。对K99+ ,F41 + ,987p+ 参考菌株和鼠... 以K8 8菌毛结构基因保守序列为靶序列 ,设计合成了一对可扩增长 2 0 1bp的目的片段的引物 ,成功地建立了检测肠毒素性大肠杆菌(ETEC)K88菌毛基因的PCR方法。进行了PCR方法的特异性试验和敏感性试验。对K99+ ,F41 + ,987p+ 参考菌株和鼠伤寒沙门氏杆菌 ,链球菌 ,金黄色葡萄球菌和猪肺疫巴氏杆菌的检测结果均为阴性 ;该检测方法的敏感度可达 1 0个细菌。用此方法对 1 0株腹泻仔猪粪便分离物进行检测 ,结果有 2株阳性 ;与血清学检测的结果一致。结果表明此方法特异性和敏感性都很高 ,可用于临床K88+ 展开更多

关键词 肠毒素性大肠杆菌 K88菌毛基因 PCR 检测方法 腹泻

下载PDF 职称材料

两种基因型牙龈卟啉单胞菌对上皮细胞的影响 被引量：2

10

作者 郭永华 吴亚菲 +1 位作者 刘天佳 肖晓蓉 《北京口腔医学》 CAS 2011年第5期249-251,共3页

目的比较2种fimA基因型牙龈卟啉单胞菌(Porphyromonas gingivalis,P.g)刺激下口腔上皮细胞白介素-6(Interlukin-6,IL-6)的表达。方法以未受P.g刺激的上皮细胞作为对照组,实验组用P.g ATCC 33277(I型菌毛组)和W83、47A-1(IV型菌毛组)分... 目的比较2种fimA基因型牙龈卟啉单胞菌(Porphyromonas gingivalis,P.g)刺激下口腔上皮细胞白介素-6(Interlukin-6,IL-6)的表达。方法以未受P.g刺激的上皮细胞作为对照组,实验组用P.g ATCC 33277(I型菌毛组)和W83、47A-1(IV型菌毛组)分别与口腔上皮细胞孵育24 h,于1、3、6、24 h收集细胞和培养上清液。逆转录-多聚酶联反应检测KB细胞IL-6 mRNA的表达,酶联免疫反应检测培养上清液中IL-6的变化。结果 1～24h实验组IL-6mRNA的表达均高于对照组(P<0.05),6h IV型菌毛组IL-6mRNA表达高于I型菌毛组(P<0.05),IL-6 mRNA和蛋白水平表达不一致,3～24h I型菌毛组IL-6蛋白水平高于IV型菌毛组和对照组(P<0.05),提示IL-6的表达存在转录后水平的调节。结论 P.g菌毛基因型与上皮细胞表达细胞因子的水平相关,IV型菌毛的调节作用强于I型菌毛,提示P.g致病性与其fimA基因型相关。 展开更多

关键词 牙龈卟啉单胞菌 菌毛基因型 口腔上皮细胞 白介素-6

下载PDF 职称材料

川西北牦牛源产肠毒素大肠杆菌的分子流行病学调查 被引量：2

11

作者 郝一妹 张焕容 +1 位作者 张斌 汤承 《西南民族大学学报（自然科学版）》 CAS 2014年第1期16-19,共4页

为调查川西北地区牦牛源产肠毒素大肠杆菌的流行情况,对采自川西北甘孜州和阿坝州的26份腹泻牦牛粪便样品进行大肠杆菌分离,分别以分离的大肠杆菌DNA和牦牛腹泻粪便样本提取的总DNA为模板,采用PCR方法扩增产肠毒素大肠杆菌黏附因子K99+... 为调查川西北地区牦牛源产肠毒素大肠杆菌的流行情况,对采自川西北甘孜州和阿坝州的26份腹泻牦牛粪便样品进行大肠杆菌分离,分别以分离的大肠杆菌DNA和牦牛腹泻粪便样本提取的总DNA为模板,采用PCR方法扩增产肠毒素大肠杆菌黏附因子K99+菌毛基因片段,分析产肠毒素大肠杆菌在牦牛腹泻中存在情况,同时比较两种DNA提取方法对产肠毒素大肠杆菌PCR检出率的差异;以分离自外表健康牦牛粪便的105株大肠杆菌DNA为模板,采用PCR方法扩增产肠毒素大肠杆菌黏附因子K99+菌毛基因片段,比较牦牛源产肠毒素大肠杆菌在外表健康牦牛和腹泻牦牛中的携带情况.结果:从26份牦牛腹泻粪便样本中共鉴定出84个大肠杆菌菌落携带K99菌毛基因,这些菌落分别来自所有26份牦牛腹泻样品,因此,牦牛腹泻样本100%分离并检测到携带K99+菌毛基因的产肠毒素大肠杆菌;而粪便总DNA检测结果为K99+菌毛基因阳性率84.62%(22/26),粪便中提取的总DNA模板K99+菌毛基因PCR检出率略低于分离鉴定的细菌DNA检出率;105株外表健康牦牛粪便样本分离株中检测到携带K99+菌毛基因的产肠毒素大肠杆菌34株,检出率为32.38%(34/105),产肠毒素大肠杆菌在牦牛腹泻样本中的检出率显著高于外表健康牦牛粪便的检出率(P<0.001).结果表明,产肠毒素大肠杆菌在牦牛粪便中存在广泛,是引起牦牛腹泻的一种重要病原菌;以粪便中提取的总DNA为模板,可快速检测牦牛粪便中产肠毒素大肠杆菌的存在. 展开更多

关键词 牦牛 腹泻 产肠毒素大肠杆菌 K99+菌毛基因

下载PDF 职称材料

鸭源大肠埃希氏菌K99菌毛基因克隆表达及生物信息学分析 被引量：1

12

作者 宋志刚 邓伯雄 刘亚刚 《中国家禽》 北大核心 2016年第21期29-33,共5页

为研究不同动物源性K99菌毛基因的差异,以含K99菌毛基因的鸭源大肠埃希氏菌为研究对象,通过PCR方法扩增出不含信号肽K99菌毛基因片段,分别克隆至pMD19-T和pET-32a载体,进行基因序列测定及免疫印迹分析。结果表明,所获得2个不同的K99基... 为研究不同动物源性K99菌毛基因的差异,以含K99菌毛基因的鸭源大肠埃希氏菌为研究对象,通过PCR方法扩增出不含信号肽K99菌毛基因片段,分别克隆至pMD19-T和pET-32a载体,进行基因序列测定及免疫印迹分析。结果表明,所获得2个不同的K99基因序列,长度均为498 bp,除去酶切位点编码氨基酸159个,理论等电点为8.96,均带正电荷,脂肪系数均为58.43。编码蛋白均为稳定的亲水性蛋白,具有相同B细胞抗原位点。2个K99菌毛基因序列之间的同源性为99.6%,与GenBank的序列比对,鸭源K99菌毛基因与牛源、猪源的K99菌毛基因的同源性较高,说明不同动物源K99菌毛基因之间变异小,相对保守。所表达的重组蛋白能与兔抗K99单因子血清发生特异性反应。研究结果为检测不同动物来源的产肠毒素大肠埃希氏菌及相关生物制品开发应用奠定基础。 展开更多

关键词 鸭源大肠埃希氏菌 K99菌毛基因 克隆表达 生物信息学分析

下载PDF 职称材料

牙龈卟啉单胞菌菌毛的生物学特性及毒力 被引量：3

13

作者 王琳 张建钢 肖水清 《国际口腔医学杂志》 CAS 北大核心 2015年第5期606-610,共5页

菌毛(Fim)是牙龈卟啉单胞菌的重要致病因子之一,对宿主细胞的黏附发挥着重要作用。Fim是细胞表面的丝状突起,增强了细胞对唾液蛋白、细胞外基质和真核细胞以及同类或其他种属细菌的黏附性并参与生物膜的形成。Fim A蛋白是牙龈卟啉单胞菌... 菌毛(Fim)是牙龈卟啉单胞菌的重要致病因子之一,对宿主细胞的黏附发挥着重要作用。Fim是细胞表面的丝状突起,增强了细胞对唾液蛋白、细胞外基质和真核细胞以及同类或其他种属细菌的黏附性并参与生物膜的形成。Fim A蛋白是牙龈卟啉单胞菌Fim的主要亚单位,与该菌侵入到牙周组织的上皮细胞及结缔组织内有关,而且还对牙槽骨具有一定的破坏作用。本文主要就Fim蛋白的生物学特性及其毒力等研究进展作一综述。 展开更多

关键词 菌毛 菌毛A 菌毛A基因 免疫反应

下载PDF 职称材料

舍饲条件下藏仔猪腹泻源大肠杆菌毒力和粘附因子基因检测与耐药性分析

14

作者 李龙 谭占坤 +1 位作者 李文凤 刘锁珠 《湖北农业科学》 2024年第6期156-160,共5页

为有效预防和治疗藏仔猪腹泻,采用PCR和Kirby-Bauer纸片扩散法对西藏林芝市舍饲藏仔猪分离的102株腹泻源大肠杆菌(Escherichia coli)毒力基因、粘附因子基因和耐药性进行检测。大肠杆菌毒力基因和菌毛粘附因子基因检测结果表明,检出率... 为有效预防和治疗藏仔猪腹泻,采用PCR和Kirby-Bauer纸片扩散法对西藏林芝市舍饲藏仔猪分离的102株腹泻源大肠杆菌(Escherichia coli)毒力基因、粘附因子基因和耐药性进行检测。大肠杆菌毒力基因和菌毛粘附因子基因检测结果表明,检出率最高的菌毛粘附因子基因是F18(45.10%),其次是F4(15.69%),所有菌株均未检出F41基因;102株菌株中有37株菌株未检出菌毛粘附因子基因。毒力基因中检出率最高的是Stx2e基因(25.49%),其次为STb:EAST-1基因(21.57%)和STa:STb基因(17.65%)。大肠杆菌菌毛粘附因子基因和非菌毛粘附因子基因检测结果表明,在检出AIDA-1基因的菌株中菌毛粘附因子基因(F18、F4)的菌株占比为44.73%,在检出paa基因的菌株中菌毛粘附因子基因(F18、F4)的菌株占比为54.17%;在检出eae基因的菌株中没有检测到F4基因。大肠杆菌对氯霉素、四环素、氨苄西林和链霉素表现出高的耐药性,对3种及以上抗生素产生耐药性的大肠杆菌菌株数占总菌株数的86.27%。 展开更多

关键词 藏仔猪 腹泻源 大肠杆菌(Escherichia coli) 毒力基因 耐药性 菌毛粘附因子基因 非菌毛粘附因子基因

下载PDF 职称材料

地高辛标记大肠杆菌1型菌毛结构基因核酸探针对鸡大肠杆菌分离株的检测 被引量：1

15

作者 戴鼎震 陆福军 +1 位作者 龚大春 杨待建 《畜牧与兽医》 北大核心 2000年第4期8-9,共2页

将PCR扩增的鸡大肠杆菌 1型菌毛蛋白结构基因 (pilA)用地高辛标记成核酸探针与分属 2 8个血清型的 50个鸡大肠杆菌分离株进行斑点杂交 ,阳性率达 84% ,用甘露糖敏感血凝试验 (MSHA)检测阳性率为 72 % ,表明核酸杂交比MSHA法更敏感。

关键词 鸡 大肠杆菌 型菌毛结基因 核酸探针 检测

下载PDF 职称材料

大肠杆菌K88ac菌毛操纵子fae全基因的克隆、表达及生物学活性初步研究 被引量：3

16

作者 朱春红 朱国强 《生物技术通讯》 CAS 2008年第2期236-239,共4页

目的:在体外克隆和表达猪肠产毒性大肠杆菌(ETEC)K88ac菌毛操纵子fae结构基因,并检测重组菌毛的相关生物学活性。方法:利用长PCR技术以猪ETECK88ac株C83902基因组DNA为模板扩增编码K88菌毛操纵子fae基因,克隆入表达质粒载体pBR322,构建... 目的:在体外克隆和表达猪肠产毒性大肠杆菌(ETEC)K88ac菌毛操纵子fae结构基因,并检测重组菌毛的相关生物学活性。方法:利用长PCR技术以猪ETECK88ac株C83902基因组DNA为模板扩增编码K88菌毛操纵子fae基因,克隆入表达质粒载体pBR322,构建和筛选重组质粒pBR322-fae,转化至不含任何菌毛的大肠杆菌EP株;电镜观察重组菌表面菌毛表达情况;用热抽提法提纯表达的重组菌毛;用纯化菌毛免疫小鼠制备高效价抗血清;用SDS-PAGE和Westernblot检测重组菌毛的抗原性,用细胞黏附和黏附抑制试验检测其生物学活性。结果和结论:在电镜下观察到重组菌表面大量表达K88ac菌毛,该重组菌与兔抗K88ac菌毛单因子阳性血清、鼠抗K88ac菌毛单克隆抗体均产生凝集反应;纯化菌毛经SDS-PAGE,结构单位菌毛呈单一的相对分子质量约26×103的蛋白条带;纯化菌毛免疫小鼠后可制备出高效价的鼠抗血清,玻板凝集试验和Westernblot结果表明体外表达的K88ac菌毛具有与K88ac野生菌毛相同的抗原性;猪小肠上皮细胞系黏附和黏附抑制实验结果表明重组EP菌和野生菌株一样具有较强的黏附猪小肠上皮细胞系的能力,而且提纯重组菌毛制备出的鼠抗血清能有效抑制上述重组菌或野生菌株对猪小肠上皮细胞系的黏附结合。 展开更多

关键词 肠产毒性大肠杆菌K88菌毛扣结构基因 克隆 表达 生物活性

下载PDF 职称材料

猪链球菌2型江苏分离株菌毛相关基因特点及菌株毒力鉴定 被引量：1

17

作者 虞凤 何孔旺 +13 位作者 肖琦 倪艳秀 周俊明 茅爱华 祝昊丹 汪伟 吕立新 俞正玉 温立斌 张雪寒 李彬 郭容利 王小敏 范红结 《江苏农业学报》 CSCD 北大核心 2012年第5期1061-1068,共8页

利用PCR技术对猪链球菌2型(SS2)江苏分离株的菌毛相关基因进行扩增,根据菌毛相关基因分布特点对菌株分型,并进行动物试验评估。结果 24株SS2中A型占70.8%,B型占29.2%。其中从病猪分离的13株SS2均为A型;而从健康猪扁桃体中分离的11株SS2 ... 利用PCR技术对猪链球菌2型(SS2)江苏分离株的菌毛相关基因进行扩增,根据菌毛相关基因分布特点对菌株分型,并进行动物试验评估。结果 24株SS2中A型占70.8%,B型占29.2%。其中从病猪分离的13株SS2均为A型;而从健康猪扁桃体中分离的11株SS2 A型占36.3%,B型占63.7%。动物试验结果表明A型菌株的毒力强于B型。以上结论说明猪链球菌2型江苏分离株可以根据菌毛相关基因特点进行分型,并利用分型结果来评估菌株的毒力强弱及潜在危害性。 展开更多

关键词 猪链球菌2型 菌毛相关基因 分型 毒力

下载PDF 职称材料

大肠杆菌菌毛抗原K99与耐热肠毒素STⅠ融合基因的克隆与核苷酸序列测定

18

作者 李书光 沈志强 +5 位作者 单虎 管宇 肖跃强 王金良 南松剑 刘吉山 《中国兽药杂志》 2007年第4期11-14,共4页

采用PCR技术,从大肠杆菌K99中扩增出0.54kb的K99菌毛抗原基因,然后将其克隆到pUCm-T载体上,用BglⅡ鉴定K99插入的方向并测序。选择目的基因片段插入方向正确的重组质粒经BamHⅠ和SalⅠ双酶切后,通过T4连接酶与同样经BamHⅠ和SalⅠ双酶... 采用PCR技术,从大肠杆菌K99中扩增出0.54kb的K99菌毛抗原基因,然后将其克隆到pUCm-T载体上,用BglⅡ鉴定K99插入的方向并测序。选择目的基因片段插入方向正确的重组质粒经BamHⅠ和SalⅠ双酶切后,通过T4连接酶与同样经BamHⅠ和SalⅠ双酶切合成的耐热肠毒素STⅠ核苷酸序列连接,通过PCR方法鉴定分析和核苷酸序列测序分析,证明插入的K99-STⅠ融合基因片段具有正确的核苷酸序列。 展开更多

关键词 K99菌毛抗原基因 STⅠ基因合成片断 融合基因 克隆与测序

下载PDF 职称材料

产肠毒素性大肠杆菌疫苗研究概况

19

作者 郭乐 李敏 王玉炯 《中国猪业》 2009年第1期50-53,共4页

产肠毒素性大肠杆菌(简称ETEC)是引起仔猪腹泻的主要病原之一。在家畜中,尤以初生幼畜特别易感,并引起生长发育迟缓,生产能力低下,甚至造成死亡,给畜牧业造成很大损失。ETEC肠毒素基因和菌毛蛋白(黏附素)基因对于ETEC的致病性起主要作... 产肠毒素性大肠杆菌(简称ETEC)是引起仔猪腹泻的主要病原之一。在家畜中,尤以初生幼畜特别易感,并引起生长发育迟缓,生产能力低下,甚至造成死亡,给畜牧业造成很大损失。ETEC肠毒素基因和菌毛蛋白(黏附素)基因对于ETEC的致病性起主要作用。除了灭活疫苗、减毒疫苗、结合多糖疫苗和亚单位疫苗外,新近出现的DNA疫苗、转基因植物疫苗为疫苗的研制提供了新的思路。本文概述并评价了各类产肠毒素性大肠杆菌疫苗,并简要介绍了产肠毒素性大肠杆菌疫苗最新的进展。 展开更多

关键词 产肠毒素性大肠杆菌 肠毒素 菌毛蛋白基因 DNA疫苗 转基因植物疫苗

下载PDF 职称材料