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一种提高基因芯片检测中杂交信号强度的简单方法 被引量：1
1
作者 夏庆杰 张思仲 +4 位作者 杨元 王军 王修杰 马用信 孙岩 《中华医学遗传学杂志》 EI CAS CSCD 2002年第4期347-349,共3页
目的　改进 PCR产物与固定探针杂交效率 ,提高信噪比 ,以提高基因芯片检测的灵敏度。方法　以淋球菌隐蔽型质粒 p JD1的基因芯片检测为例 ,在荧光素标记引物的 PCR产物中加入不同浓度的Taq酶抑制剂 EDTA及位于固定探针所在位点的两翼的... 目的　改进 PCR产物与固定探针杂交效率 ,提高信噪比 ,以提高基因芯片检测的灵敏度。方法　以淋球菌隐蔽型质粒 p JD1的基因芯片检测为例 ,在荧光素标记引物的 PCR产物中加入不同浓度的Taq酶抑制剂 EDTA及位于固定探针所在位点的两翼的荧光素标记探针 ,一起变性后再进行常规杂交、冲洗。结果　加入 EDTA和荧光素标记探针使基因芯片检测的荧光强度能提高 6倍以上。 展开更多
关键词 基因芯片 杂交信号 荧光定量 检测 灵敏度 荧光素标记探针
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相思豆毒素的内化作用
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作者 钟玉绪 应翔宇 +4 位作者 李丽琴 陈乐贵 杨廷松 郭胜清 林福生 《中国药理学与毒理学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2003年第4期311-311,共1页
目的　研究相思豆毒素 (ABR)的内化入胞作用并探讨内化入胞的可能作用机制。方法　葡聚糖凝胶层析制备ABR的异硫氰酸荧光素 (FITC)标记探针 (FITC ABR) ;MTT比色法测定FITC ABR对体外培养人胚胎肾细胞 (HEK)增殖的抑制作用 ;激光共聚焦... 目的　研究相思豆毒素 (ABR)的内化入胞作用并探讨内化入胞的可能作用机制。方法　葡聚糖凝胶层析制备ABR的异硫氰酸荧光素 (FITC)标记探针 (FITC ABR) ;MTT比色法测定FITC ABR对体外培养人胚胎肾细胞 (HEK)增殖的抑制作用 ;激光共聚焦显微镜示踪FITC ABR的内化过程。结果FITC ABR在凝胶层析图谱中先于FITC洗脱 ,两者能较好的分离 ,所制备的FITC ABR浓度为 10 .0g·L- 1,FITC ABR与ABR在 10 0 0～ 0 .0 1μg·L- 1浓度范围内 ,以相同浓度作用于HEK细胞 ,对细胞增殖的抑制作用相似 ,两者的pIC50 均约为 16pmol·L- 1;分子荧光探针FM4 6 41.5 μmol·L- 1对体外培养HEK细胞连续标记 12h ,能特异性标记细胞膜及膜性细胞器如胞内体、溶酶体、高尔基体等 ,细胞膜及胞内分别可见连续以及散在的红色荧光 ;FITC ABR 10mg·L- 1单独标记细胞 15 ,30min ,即可见到胞内有绿色荧光 ,FITC ABR与FM4 6 4联合标记细胞 ,在胞内的某些红色荧光部位同时具有FITC ABR的绿色荧光 ,两种颜色的荧光叠加后产生棕褐色荧光 ;以0 .1mol·L- 1乳糖封闭细胞膜的ABR结合位点后 ,再以FITC ABR标记细胞 30min ,可见细胞膜的绿色荧光明显减弱 ,胞内几乎无绿色荧光。升高胞内体pH的药物NH4 Cl 1mmol·L- 1能明显增强FITC ABR对胞内各膜? 展开更多
关键词 相思豆毒素 内化入胞作用 细胞增殖 异硫氰酸荧光素标记探针 人胚胎肾细胞
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