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两种直接免疫荧光法检测狂犬病病毒滴度的验证
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作者 于鹏程 陶晓燕 +5 位作者 刘淑清 刘茜 张明慧 沈立萍 毕胜利 朱武洋 《中国疫苗和免疫》 CSCD 北大核心 2024年第3期288-292,共5页
目的对检测狂犬病病毒(Rabies virus,RABV)滴度的荧光灶单位(Fluorescent focus unit,FFU)法和半数荧光灶数量(50%fluorescent focus infectious dose,FFD50)法两种直接免疫荧光法进行验证。方法应用FFU法和FFD50法检测RABV不同毒株滴度... 目的对检测狂犬病病毒(Rabies virus,RABV)滴度的荧光灶单位(Fluorescent focus unit,FFU)法和半数荧光灶数量(50%fluorescent focus infectious dose,FFD50)法两种直接免疫荧光法进行验证。方法应用FFU法和FFD50法检测RABV不同毒株滴度,计算FFU值和FFD50值的变异系数(Coefficient of variation,CV),验证可靠性(精密度和稳定性);与标准的小鼠脑内滴定法测定的半数致死量(50%lethal dose,LD50)值进行比较,验证准确性和线性范围。结果日间精密度和中间精密度验证显示,FFU法和FFD50法测定的CVS-11 RABV毒株滴度FFU值和FFD50值的CV均<30%;稳定性验证显示,在改变细胞-病毒孵育时间、丙酮固定时间和染色时间后,两种方法测定的CVS-11毒株滴度FFU值和FFD50值的CV均<30%。准确性验证显示,FFU法和FFD50法测定的CVS-11、SC16、GD1、QH2 RABV毒株滴度FFU值和FFD50值与小鼠脑内滴定法测定的LD50值均接近;病毒稀释倍数在5-1至5-7范围内,FFU和FFD50与其呈线性关系,线性回归方程分别为y=-1.350x+7.391(R2=0.991)和y=-1.453x+8.285(R2=0.980)。结论FFU法和FFD50法检测RABV滴度均具有良好的可靠性和准确性,为替代小鼠脑内滴定法提供了支持。 展开更多
关键词 狂犬病病毒 直接免疫荧光法 荧光灶单位 半数荧光灶数量 可靠性 准确性
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细胞荧光转化灶单位实验体外滴定狂犬病病毒毒力方法的优化 被引量：11
2
作者 柴苗 徐葛林 +3 位作者 孙文 卢颖 毕军 陈雪婷 《中国疫苗和免疫》 CAS 2010年第3期258-260,共3页
目的用细胞荧光转化灶单位实验[Fluorescence Focus Units(FFU)Assay]替代小鼠50%致死量(50% Lethal Does,LD50)法检测狂犬病病毒毒力,优化、改进现有的检测方法 ,从而降低检测成本。方法将狂犬病病毒固定毒株3倍系列稀释后感染乳金黄... 目的用细胞荧光转化灶单位实验[Fluorescence Focus Units(FFU)Assay]替代小鼠50%致死量(50% Lethal Does,LD50)法检测狂犬病病毒毒力,优化、改进现有的检测方法 ,从而降低检测成本。方法将狂犬病病毒固定毒株3倍系列稀释后感染乳金黄地鼠肾细胞,通过荧光标记的抗狂犬病病毒核蛋白单克隆抗体染色检测病毒感染的荧光灶,同时将病毒颅内接种10～12g昆明小鼠,通过观察记录小鼠发病死亡数,计算引起半数小鼠死亡的病毒剂量即LD50。结果 FFU和LD50存在一定的数量关系,且成正相关,相关系数为0.99。lgFFU值与LD50值之间有统计学意义,重复性好。结论 FFU实验体外滴定狂犬病病毒毒力方法可取代LD50法,更有利于推广、实施。 展开更多
关键词 狂犬病病毒 细胞荧光转化灶单位实验 50%致死量
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