基于分子模拟优化筛选甲磺隆特异性多肽

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作者 尚华 赵雷兴 +1 位作者 秦月 刘冰 《食品研究与开发》 CAS 北大核心 2023年第1期28-33,共6页

该研究通过分子模拟技术优化筛选甲磺隆的高特异性多肽,并应用量子点荧光淬灭免疫层析试纸条验证模拟筛选结果。运行CDOCKER程序对乙酰乳酸合成酶晶体结构与甲磺隆分子进行对接,结合蛋白中对甲磺隆的活性空腔结构和受配体相互作用的关... 该研究通过分子模拟技术优化筛选甲磺隆的高特异性多肽,并应用量子点荧光淬灭免疫层析试纸条验证模拟筛选结果。运行CDOCKER程序对乙酰乳酸合成酶晶体结构与甲磺隆分子进行对接,结合蛋白中对甲磺隆的活性空腔结构和受配体相互作用的关键氨基酸设计多肽。运行虚拟氨基酸突变对所有多肽进一步优化并建库。根据结合能初步筛选出S1、S2和S3三条多肽,应用试纸条方法进一步验证3条多肽可成功识别甲磺隆目标物并筛选出S1为最优序列,试验结果与模拟结果一致性良好。 展开更多

关键词 甲磺隆 分子模拟 分子对接 虚拟氨基酸突变 荧光淬灭免疫层析试纸条

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同时检测玉米中黄曲霉毒素B_(1)和赭曲霉毒素A的时间分辨荧光免疫层析试纸条的研制 被引量：17

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作者 卢迪莎 王序 +2 位作者 杨金易 罗林 肖治理 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2022年第2期346-354,共9页

研究制备了一种可同时快速定量检测黄曲霉毒素B_(1)(aflatoxin B_(1),AFB_(1))和赭曲霉毒素A(ochratoxin A,OTA)的二联时间分辨荧光免疫层析试纸条。采用铕系时间分辨荧光微球分别标记AFB_(1)和OTA单克隆抗体,优化荧光微球活化pH值、标... 研究制备了一种可同时快速定量检测黄曲霉毒素B_(1)(aflatoxin B_(1),AFB_(1))和赭曲霉毒素A(ochratoxin A,OTA)的二联时间分辨荧光免疫层析试纸条。采用铕系时间分辨荧光微球分别标记AFB_(1)和OTA单克隆抗体,优化荧光微球活化pH值、标记的抗体浓度、荧光探针使用量、检测线包被原浓度、质控线羊抗鼠IgG浓度、样品前处理条件等因素。结果表明:检测AFB_(1)和OTA的IC_(50)分别为1.58、3.91μg/kg,线性范围分别为0.26~9.73、1.14~13.29μg/kg,肉眼检测限分别为3.70、5.55μg/kg;与黄曲霉毒素类似物交叉率为12%~62%,与赭曲霉毒素B交叉率为58%,与其他真菌毒素无明显交叉反应;选择玉米样品进行添加回收实验,2种毒素回收率在92%~103%之间,变异系数小于15%;对实际样品的检测与高效液相色谱法和市售胶体金试纸检测结果一致;且该试纸条可在4℃稳定保存5个月以上,稳定性较好。本研究所制备的时间分辨荧光免疫层析试纸条具有灵敏、准确、快速和简便等特点,非常适用于玉米等食品和农产品中AFB_(1)和OTA的现场快速筛查。 展开更多

关键词 黄曲霉毒素B_(1) 赭曲霉毒素A 时间分辨 荧光免疫层析试纸条

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时间分辨荧光免疫层析试纸条在油料饼粕黄曲霉毒素B_1检测中的应用 被引量：18

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作者 李静 李培武 +3 位作者 张奇 丁小霞 张文 张兆威 《中国油料作物学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第2期256-262,共7页

采用黄曲霉毒素时间分辨荧光免疫层析试纸条及配套的时间分辨荧光速测仪,对油料饼粕中黄曲霉毒素B1的快速检测进行了应用研究。该时间分辨荧光免疫分析技术是基于时间分辨荧光免疫层析试纸条和载有Eu（Ⅲ）标记特异性单克隆抗体的样品... 采用黄曲霉毒素时间分辨荧光免疫层析试纸条及配套的时间分辨荧光速测仪,对油料饼粕中黄曲霉毒素B1的快速检测进行了应用研究。该时间分辨荧光免疫分析技术是基于时间分辨荧光免疫层析试纸条和载有Eu（Ⅲ）标记特异性单克隆抗体的样品瓶建立的检测技术。时间分辨荧光速测仪可内置标准曲线,直接输出检测结果。对6种油料饼粕做黄曲霉毒素B1添加回收率实验,回收率在70%~120%之间,批间、批内变异系数〈15%。在实际样品的检测中,时间分辨荧光免疫层析试纸条检测技术与液相色谱-串联质谱法相比,检测结果相对误差〈15%。时间分辨荧光免疫层析试纸条检测技术测定快速、准确,技术稳定、可靠,设备经济、小型,适用于大批量油料饼粕样品的快速检测和风险评估。 展开更多

关键词 油料饼粕 黄曲霉毒素B1 时间分辨荧光免疫层析试纸条 时间分辨荧光速测仪 定量检测

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大田软海绵酸和鳍藻毒素时间分辨荧光免疫层析试纸条的研制与应用 被引量：3

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作者 韩蕾 赵芮 +4 位作者 刘昭 贾宝林 姜祖林 冯少姝 梁玉波 《海洋环境科学》 CAS CSCD 北大核心 2022年第5期783-790,共8页

腹泻性贝类毒素主要包括大田软海绵酸(okadaic acid,OA)、鳍藻毒素-1(dinophysis toxin-1,DTX-1)和鳍藻毒素-2(dinophysis toxin-2,DTX-2)。被贝类毒素污染的海产品可对食用者的健康构成危害。在我国近岸海域OA常有检出,DTX-1和DTX-2偶... 腹泻性贝类毒素主要包括大田软海绵酸(okadaic acid,OA)、鳍藻毒素-1(dinophysis toxin-1,DTX-1)和鳍藻毒素-2(dinophysis toxin-2,DTX-2)。被贝类毒素污染的海产品可对食用者的健康构成危害。在我国近岸海域OA常有检出,DTX-1和DTX-2偶有检出。本文用荧光免疫微球标记抗OA单克隆抗体,利用牛血清白蛋白合成高偶联比的包被抗原,以硝酸纤维素膜为载体,运用免疫层析技术,研制了能够同时快速准确检测OA、DTX-1和DTX-2的时间分辨荧光免疫层析试纸条,定量限分别为90.6μg/kg、115.4μg/kg和69.8μg/kg。实验验证结果表明:本文研制的时间分辨荧光免疫层析试纸条对含有OA、DTX-1和DTX-2中的一种、两种或三种组分的毒素样品检测结果,与液相色谱-串联质谱法检测结果的相关性良好。该时间分辨荧光免疫层析试纸条灵敏、准确、操作简便,成本低,在我国海洋环境监测及海产品食用安全检测中,应用前景良好。 展开更多

关键词 时间分辨荧光免疫层析试纸条 快速检测技术 腹泻性贝类毒素

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头孢氨苄残留荧光免疫层析试纸条的研制 被引量：3

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作者 胡佳丽 刘小雷 +6 位作者 于东升 石磊 李莉 张帆 陈艳 刘彩虹 邹明强 《中国药学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2014年第12期1067-1072,共6页

目的建立快速、灵敏的头孢氨苄残留荧光免疫层析试纸条检测法。方法以Eu-SiO2荧光纳米颗粒作为标记物,共价偶联于头孢氨苄单克隆抗体,将头孢氨苄-卵清蛋白全抗原和羊抗小鼠抗体喷涂于硝酸纤维素膜分别作为检测线和质控线,以竞争性免疫... 目的建立快速、灵敏的头孢氨苄残留荧光免疫层析试纸条检测法。方法以Eu-SiO2荧光纳米颗粒作为标记物,共价偶联于头孢氨苄单克隆抗体,将头孢氨苄-卵清蛋白全抗原和羊抗小鼠抗体喷涂于硝酸纤维素膜分别作为检测线和质控线,以竞争性免疫抑制反应模式制备了头孢氨苄残留荧光免疫层析试纸条。结果通过优化实验后制备的免疫层析试纸条对头孢氨苄残留的检测限为25 ng·mL-1,可在30 min内判读结果,与头孢菌素类、青霉素等的12种抗生素均无交叉反应,具有良好的特异性。结论本实验所制备的头孢氨苄残留荧光免疫层析试纸条具有操作简便、快速灵敏、便于普及等优点,为该类抗生素的检测提供了一种新型的检测方法。 展开更多

关键词 头孢氨苄 Eu-SiO2纳米颗粒 荧光免疫层析试纸条

原文传递

基于BHHCT-Eu^(3+)@SiO_2荧光稀土二氧化硅纳米颗粒的免疫层析试纸条检测卡那霉素 被引量：2

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作者 赵兵洁 赵金宝 +4 位作者 齐小花 邹明强 陈艳 张帆 杨屹 《分析化学》 SCIE EI CAS CSCD 北大核心 2017年第10期1467-1474,共8页

采用微波辅助合成的荧光稀土二氧化硅纳米颗粒(BHHCT-Eu^(3+)@SiO_2)为标记物,建立了快速定量检测卡那霉素(Kana)残留的荧光免疫层析方法。实验结果表明,微波辅助合成的BHHCT-Eu^(3+)@SiO_2纳米颗粒呈球形,粒径约36 nm,具有良好的荧光... 采用微波辅助合成的荧光稀土二氧化硅纳米颗粒(BHHCT-Eu^(3+)@SiO_2)为标记物,建立了快速定量检测卡那霉素(Kana)残留的荧光免疫层析方法。实验结果表明,微波辅助合成的BHHCT-Eu^(3+)@SiO_2纳米颗粒呈球形,粒径约36 nm,具有良好的荧光发射性能,最大吸收波长和最大发射波长分别为343和615 nm。将BHHCT-Eu^(3+)@SiO_2与卡那霉素抗体(Kana-ab)通过醛基化葡聚糖交联,合成了荧光标记抗体Eu^(3+)-Kana-ab,结合定量侧向层析读数仪,建立了牛奶中Kana残留的快速定量检测方法,对Kana的检出限(IC_(10))为0.85 ng/mL,半数抑制浓度(IC_(50))为12.76 ng/mL,检测范围(IC_(20)-IC_(80))为3.0~76.0 ng/mL,牛奶中的Kana的加标回收率范围为93.7%~97.4%,RSD为3.1%~4.6%,与Kana类似物的交叉反应均<1%。牛奶中Kana残留的测定结果与ELISA方法相关性良好。 展开更多

关键词 卡那霉素 微波辅助合成 荧光稀土二氧化硅纳米颗粒 荧光免疫层析试纸条 牛奶

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鳗鱼中氯霉素荧光免疫层析快速检测方法研究 被引量：2

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作者 汤轶伟 崔芷萌 +4 位作者 刘欢 吕长鑫 刘秀英 钟克利 汤立军 《渤海大学学报（自然科学版）》 CAS 2020年第2期112-118,共7页

为建立鳗鱼中氯霉素残留荧光免疫层析快速检测方法,基于GSH-Mn-ZnS QD标记氯霉素单克隆抗体荧光探针,样品垫、NC膜、检测线(T线)包被量及质控线(C线)包被量等条件的优化,构建了氯霉素荧光免疫层析试纸条.结果表明,样品垫为玻纤GF-08,NC... 为建立鳗鱼中氯霉素残留荧光免疫层析快速检测方法,基于GSH-Mn-ZnS QD标记氯霉素单克隆抗体荧光探针,样品垫、NC膜、检测线(T线)包被量及质控线(C线)包被量等条件的优化,构建了氯霉素荧光免疫层析试纸条.结果表明,样品垫为玻纤GF-08,NC膜为Pall70 NC膜,检测线和质控线包被浓度为1.0 ng/mL为效果最佳.最优条件下,该试纸条检测检测限为100 ng/mL.该试纸条灵敏度高、特异性好、可用于鳗鱼样品中氯霉素的残留检测. 展开更多

关键词 量子点 氯霉素 荧光免疫层析试纸条 鳗鱼

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两种检测百草枯中毒的免疫层析试纸条研制

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作者 李楠楠 谢斯哲 +4 位作者 莫冬冬 吴剑峰 赵云丽 许永男 谢剑炜 《军事医学》 CAS 2022年第12期932-938,共7页

目的 研制可直接对微量生物样本(血液、尿液等)中痕量百草枯进行快速定量检测的免疫试纸条。方法以4,4-联吡啶为原料,通过半抗原制备、动物免疫、抗体筛选和样品垫材料优化,研制两种可对血液、尿液样本中痕量百草枯进行直接检测的胶体... 目的 研制可直接对微量生物样本(血液、尿液等)中痕量百草枯进行快速定量检测的免疫试纸条。方法以4,4-联吡啶为原料,通过半抗原制备、动物免疫、抗体筛选和样品垫材料优化,研制两种可对血液、尿液样本中痕量百草枯进行直接检测的胶体金免疫层析试纸条(GICA)和时间分辨荧光免疫层析试纸条(TRFICA),并与高效液相色谱串联质谱和表面增强拉曼光谱技术在样品前处理要求、灵敏度、检测时间和样本适用性等多方面进行比较。结果 筛选的抗体特异性较好,对百草枯的结构类似物1,1’-亚乙基-2,2’-联吡啶二溴盐和4,4-联吡啶均无明显交叉干扰。匹配手持式荧光试纸条读卡仪,TRFICA在一定浓度范围内具有较好的定量能力,对全血样本中的检测限可达0.05 ng/ml,检测时间<10 min。相比液质联用和表面增强拉曼光谱的检测技术,具备造价低廉、操作简便、检测速度快、结果易判别且灵敏度高等优势。结论 研制的GICA和TRFICA为百草枯临床中毒患者的即时检测和预后评估提供了新的筛查确证方法。 展开更多

关键词 百草枯 胶体金免疫层析试纸条 时间分辨荧光免疫层析试纸条 即时检测 生物样本

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对硫磷等6种农药残留荧光免疫检测芯片的研发及应用 被引量：1

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作者 王兆芹 汪彤 +3 位作者 崔海峰 赵正苗 万宇平 索金玉 《食品安全导刊》 2021年第16期32-35,共4页

本文通过制备试纸条的核心结构——荧光免疫检测芯片,研制出一种能够同时检测对硫磷、毒死蜱、辛硫磷、甲氰菊酯、氯氰菊酯、溴氰菊酯这6种农药残留的荧光免疫层析矩阵试纸条。该试纸条的对硫磷检测限为果蔬0.02mg/kg,毒死蜱检测限为果... 本文通过制备试纸条的核心结构——荧光免疫检测芯片,研制出一种能够同时检测对硫磷、毒死蜱、辛硫磷、甲氰菊酯、氯氰菊酯、溴氰菊酯这6种农药残留的荧光免疫层析矩阵试纸条。该试纸条的对硫磷检测限为果蔬0.02mg/kg,毒死蜱检测限为果蔬0.5mg/kg,辛硫磷检测限为果蔬10mg/kg,甲氰菊酯检测限为水果5mg/kg、蔬菜1mg/kg,氯氰菊酯检测限为果蔬0.5mg/kg,溴氰菊酯检测限为水果0.1mg/kg、蔬菜0.5mg/kg;检测时间为5min,假阳性率和假阴性率均为0。 展开更多

关键词 有机磷类农药 菊酯类农药 荧光免疫层析试纸条 快速检测

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可同时检测毒死蜱、异菌脲残留的荧光试纸条研制及其应用 被引量：1

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作者 吴小胜 崔廷婷 +3 位作者 王兆芹 惠光鹏 赵正苗 万宇平 《山东畜牧兽医》 2021年第8期13-18,共6页

本文利用毒死蜱单克隆抗体、异菌脲单克隆抗体,研制出一种能够检测果蔬加工副产品类饲料中毒死蜱、异菌脲的荧光免疫层析矩阵试纸条。毒死蜱检测限为叶菜类加工副产品类饲料0.5 mg/kg,根茎类加工副产品类饲料1 mg/kg;果蔬加工副产品类... 本文利用毒死蜱单克隆抗体、异菌脲单克隆抗体,研制出一种能够检测果蔬加工副产品类饲料中毒死蜱、异菌脲的荧光免疫层析矩阵试纸条。毒死蜱检测限为叶菜类加工副产品类饲料0.5 mg/kg,根茎类加工副产品类饲料1 mg/kg;果蔬加工副产品类饲料中异菌脲检测限为5 mg/kg,检测时间为5 min,假阳性率和假阴性率均为0,符合《兽药残留检测试剂盒(条、卡)备案技术资料要求及审查工作程序》要求,试纸条能够应用到基层实验室的大批量样本检测,具有实际意义,并且未见同时检测毒死蜱、异菌脲的二合一荧光免疫层析试纸条的相关文献报道,具有创新性。 展开更多

关键词 毒死蜱 异菌脲 荧光免疫层析试纸条 快速检测

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禽流感病毒荧光免疫层析检测试纸条的研制 被引量：2

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作者 孙洁 陈兵 +8 位作者 杨春华 吴峰 陈雨 郑晓聪 王津津 陶虹 丁晶 于力 秦智锋 《上海畜牧兽医通讯》 2019年第4期2-7,共6页

禽流感是重要的人兽共患病,建立现场快速灵敏的检测方法是防控其发生和流行的前提和基础。本研究采用不同亚型流感毒株交叉免疫小鼠法来免疫小鼠,通过多个亚型的NP表达蛋白来筛选杂交瘤阳性细胞株,获得分泌针对NP蛋白单克隆抗体的杂交... 禽流感是重要的人兽共患病,建立现场快速灵敏的检测方法是防控其发生和流行的前提和基础。本研究采用不同亚型流感毒株交叉免疫小鼠法来免疫小鼠,通过多个亚型的NP表达蛋白来筛选杂交瘤阳性细胞株,获得分泌针对NP蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞4株。通过抗体的两两配对,基于荧光量子点作为免疫层析抗体的标记探针,借助免疫层析试纸条双抗夹心法原理,筛选出了适用于免疫层析的两株单克隆抗体,研制了禽流感病毒(Avian influenza virus, AIV )荧光免疫层析检测试纸条[A lateral-flow immunoassay strip with quantum dots(QDs)against AIV , AIV -QD-LFIA],并对该试纸条进行了特异性、敏感性、可重复性及可靠性分析。试验结果显示:本研究所建立的 AIV -QD-LFIA试纸条检测禽流感标准抗原H5N1-HK的敏感性达到104 EID50 ,检测标准抗原H9N2-HK的灵敏度为102 EID50 ,比商品化的禽流感病毒抗原检测卡灵敏度高100倍,比国家标准实时荧光RT-PCR(rRT-PCR)灵敏度低约100倍;可特异性地检测出H5亚型、H7亚型、H9亚型、H1亚型、H3亚型等A型流感病毒,与 IBV 、 NDV 等常见禽呼吸道传染病病原无交叉反应,且经过了国家流感中心标准样本盘的样品测试,特异性强;同时该法具有良好重复性,连续4周检测20个样品重复结果均为阳性;小规模田间试验显示该法用于禽流感病毒的普查监测结果可靠。可见本研究所建立的 AIV -QD-LFIA试纸条可满足禽流感病毒快速、高灵敏的检测需求,具有广阔的应用空间。 展开更多

关键词 禽流感病毒 荧光免疫层析检测试纸条 检测

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