荧光差异显示PCR克隆参与胃腺癌转移的基因wcl1 被引量：6

1

作者 王建华 陈诗书 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第2期134-138,共5页

使用来源于同一个胃腺癌病人的原发灶RF 1(ATCC编号CRL 186 4 )和转移灶RF 4 8(ATCC编号CRL 186 3)作为研究肿瘤转移的模型 .通过荧光差异显示PCR(FDD PCR)技术 ,克隆了 4 5个涉及胃腺癌转移相关基因 .和原发灶CRL 186 4相比 ,发... 使用来源于同一个胃腺癌病人的原发灶RF 1(ATCC编号CRL 186 4 )和转移灶RF 4 8(ATCC编号CRL 186 3)作为研究肿瘤转移的模型 .通过荧光差异显示PCR(FDD PCR)技术 ,克隆了 4 5个涉及胃腺癌转移相关基因 .和原发灶CRL 186 4相比 ,发现在转移灶CRL 186 3细胞中有 38个基因被显著上调 ,7个基因被显著下调 ,包括未被发现的基因 3个 .利用生物信息学技术对其中 1个在RF 4 8中高度上调的wcl1进行克隆和鉴定 ,发现wcl1的cDNA全长为 6 6 4bp ,含有 1个 2 4 0bp的完整阅读框 .用RT PCR和Northern印迹证实 ,结果与克隆拼接的大小完全一致 (NCBI数据库收录号AF36 4 86 3) .wcl1编码肽位于胞浆内含 79个氨基酸 ,理论上的pI Mr:5 2 8 896 1 72 .氨基酸序列分析发现 ,其N端 4～ 5 5氨基酸处为未知功能区UPF0 0 16蛋白 ,5 7～ 78处有一段亮氨酸拉链结构域 ,未发现与已知的蛋白质有高度的同源性 .该基因定位于 11q14.组织分布表明 ,wcl1除在分化差的胃腺癌中的表达要高于相应的正常胃组织 ,在微血管内皮中表达也明显高于乳腺管癌、脑纤维状星形细胞瘤 ,未检测到在其它组织有分布 .研究提示 ,Wcl1可能为胃腺癌转移过程中参与核内基因转录的相关蛋白质 . 展开更多

关键词 荧光差异显示pcr 克隆 胃腺癌转移 wcl1 转移相关基因

下载PDF 职称材料

通过荧光差异显示PCR法分离水稻中由ABA调节的基因 被引量：3

2

作者 胥寿玲 沈思师 +1 位作者 许智宏 薛红卫 《实验生物学报》 CSCD 北大核心 2002年第4期257-262,共6页

脱落酸(ABA)在植物种子发育以及植物细胞对外源环境因子(如逆境、胁迫等)反应过程中起着重要的作用,对其调节基因的分离将有助于了解其相关信号传导途径及作用机制。通过荧光差异显示PCR法我们由水稻中分离了部分ABA调节的cDNA片段,在... 脱落酸(ABA)在植物种子发育以及植物细胞对外源环境因子(如逆境、胁迫等)反应过程中起着重要的作用,对其调节基因的分离将有助于了解其相关信号传导途径及作用机制。通过荧光差异显示PCR法我们由水稻中分离了部分ABA调节的cDNA片段,在所分离克隆的17个片段中,有14个片段被ABA诱导(2、4、8、12h),有3个片段被ABA抑制(8h)。测序及序列分析表明这些片段可能分别编码与植物光合作用(7)、信号传导(1)、转录调控(2)、代谢(6)相关的蛋白或未知蛋白(1)而且其表达可能受到ABA的调节或ABA参与了其作用,对其中可能编码α/β水解酶折叠蛋白、酪氨酸磷酸酶、液泡H^+-ATPase的mRNA进行的RT-PCR和Northern blot分析,确证了ABA对它们表达的调节作用。在此基础上对FDD-PCR技术及ABA作用的可能机制进行了讨论。 展开更多

关键词 荧光差异显示pcr 调节 表达 蛋白 酪氨酸磷酸酶 分离 基因 ABA 水稻 外源

下载PDF 职称材料

低剂量的甲醛诱导MRC5损伤耐受差异表达基因的研究 被引量：5

3

作者 卫秦芝 庄志雄 +4 位作者 袁建辉 李习艺 杨晓华 黄海燕 庾蕾 《卫生研究》 CAS CSCD 北大核心 2005年第3期265-268,共4页

目的　用荧光差异显示PCR(fluoroDD PCR)方法寻找低剂量的甲醛(FA)诱导人胚肺成纤维细胞(MRC 5 )损伤耐受差异表达的基因。方法　用MTT方法得到FA对MRC 5毒性的剂量-反应关系。根据剂量-反应关系选择对MRC 5几乎没有损伤或有增殖的剂量... 目的　用荧光差异显示PCR(fluoroDD PCR)方法寻找低剂量的甲醛(FA)诱导人胚肺成纤维细胞(MRC 5 )损伤耐受差异表达的基因。方法　用MTT方法得到FA对MRC 5毒性的剂量-反应关系。根据剂量-反应关系选择对MRC 5几乎没有损伤或有增殖的剂量作为低剂量,对细胞有明显损伤的剂量为高剂量,然后用低剂量、高剂量、损伤耐受模式(低剂量预刺激后继而用高剂量刺激)三种方式处理细胞,通过荧光差异显示PCR技术寻找不同处理组与对照组比较差异表达的基因。对其中的11个差异条带进行二次PCR、克隆、测序,在GeneBank上通过Blast鉴定基因。结果　根据FA对MRC 5毒性的剂量-反应关系,选择10 0 μmol L为低剂量、10mmol L为高剂量。然后按方法中所述的方式处理细胞后,用荧光差异显示PCR的方法发现有6 1个差异表达的基因。对其中的11个差异条带进行鉴定,发现有2个已知基因,分别与nuclearfactorofactivatedT cells 5 (NFAT5 )和tetratricopeptiderepeatdomain 3(TPRD 3)高度同源,其余9个为新基因。结论　FA在低剂量可以促进MRC 5的增殖,通过荧光差异显示PCR获得6 1个FA诱导MRC 5损伤耐受差异表达的基因,通过对其中11个差异条带的鉴定,为进一步研究FA诱导MRC 5损伤耐受的机制提供线索。 展开更多

关键词 甲醛 损伤耐受 荧光差异显示pcr

下载PDF 职称材料

水稻eIF3大亚基(eIF3a)编码基因的克隆及其表达模式分析 被引量：5

4

作者 李竑 沈思师 +1 位作者 许智宏 薛红卫 《实验生物学报》 CSCD 北大核心 2003年第1期54-60,共7页

真核生物翻译起始因子(eIFs)在蛋白合成中起关键作用,在已经鉴定的13个因子中eIF3(由8个或更多的亚基组成)是分子量最大的一个并在翻译起始过程中起着核心作用。eIF3a是eIF3中最大的亚基并介导了eIF3的大多数的功能的实现。利用荧光-差... 真核生物翻译起始因子(eIFs)在蛋白合成中起关键作用,在已经鉴定的13个因子中eIF3(由8个或更多的亚基组成)是分子量最大的一个并在翻译起始过程中起着核心作用。eIF3a是eIF3中最大的亚基并介导了eIF3的大多数的功能的实现。利用荧光-差异显示PCR法对生长素处理后的水稻材料进行分析发现eIF3a的表达可被生长素诱导,进一步通过筛选cDNA文库分离出水稻编码eIF3a的全长cDNA(命名为OseIF3a1),OseIF3a1含3459碱基(含5’和3’非翻译区)并编码一个986氨基酸的蛋白,与基因组序列比较表明OseIF3a1基因存在有12个内含子。OSeIF3a1与玉米和烟草的同源蛋白一致性分别为82.4%和70.1%并与其他真核生物eIF3a蛋白具较高一致性。以组织材料进行的RT-PCR结果表明OseIF3a1在根、幼苗、幼穗、茎和叶中表达,启动子-报告基因的转基因结果进一步表明OseIF3a1在根尖及幼嫩叶片表达较高,进一步的RTPCR分析确证了生长素对OseIF3a1的诱导,表明生长素在调控植物生长时可能涉及了翻译水平上的调节。 展开更多

关键词 eIF3大亚基 编码基因 水稻 克隆 表达模式 真核翻译起始因子 荧光差异显示pcr 生长素

下载PDF 职称材料

荧光差异显示PCR克隆大鼠脑缺血相关基因KIAA0280 被引量：5

5

作者 臧林泉 银巍 +3 位作者 皮荣标 邱鹏新 苏兴文 颜光美 《中山大学学报（医学科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2004年第2期97-101,共5页

【目的】研究大鼠急性局灶性脑缺血时缺血组织与非缺血组织中基因表达的差异,克隆出与脑缺血相关的基因。【方法】应用荧光差异显示PCR(FDDPCR)从同一例大鼠大脑皮层缺血组织和非缺血组织中筛选出有表达差异的基因片段,经反向Northernb... 【目的】研究大鼠急性局灶性脑缺血时缺血组织与非缺血组织中基因表达的差异,克隆出与脑缺血相关的基因。【方法】应用荧光差异显示PCR(FDDPCR)从同一例大鼠大脑皮层缺血组织和非缺血组织中筛选出有表达差异的基因片段,经反向Northernblot杂交,将杂交阳性的片段且经RT-PCR反复验证,选取差异明显的片段进行克隆测序;经生物信息学分析处理,选取同源性低的EST片段R6,利用cDNA5'端快速扩增PCR(5'RACE法)进行基因全长的克隆。【结果】利用5'RACE法成功地克隆EST片段R6至编码区,扩增并获取全长4821bp及完整的可读框(ORF),RT-PCR及Northernblot印迹结果证实了克隆的结果,同源性分析发现该基因ORF与人大脑中已知的KIAA0280基因高度同源,同源性96%,编码166个氨基酸,为结构及功能未明确蛋白质,该基因定位于大鼠第11号染色体长臂(11q.13)。【结论】应用荧光差异显示PCR成功地自大鼠体内克隆到与人KIAA0280相似的基因,其在大鼠急性局灶性脑缺血中明显上调,该蛋白质结构及功能均未见报道及研究,其显著地差异表达提示其在脑缺血病理过程中具有重要作用。 展开更多

关键词 荧光差异显示pcr 克隆 大鼠 脑缺血 KIAA0280基因 生物信息学 动物模型 分子机制

下载PDF 职称材料

低剂量三氯乙烯诱导人正常肝细胞损伤耐受差异表达基因的研究 被引量：3

6

作者 卫秦芝 庄志雄 +4 位作者 袁建辉 黄海燕 李习艺 杨晓华 庾蕾 《卫生研究》 CAS CSCD 北大核心 2005年第4期403-406,共4页

目的寻找低剂量三氯乙烯(TCE)诱导人正常肝细胞(L02)损伤耐受差异表达的基因。方法参照本实验室用MTT法所得的TCE对L02毒性剂量-效应关系,选择5μmolL的三氯乙烯为低剂量,40μmolL为高剂量,按以下方式对细胞进行染毒:空白对照、低剂量... 目的寻找低剂量三氯乙烯(TCE)诱导人正常肝细胞(L02)损伤耐受差异表达的基因。方法参照本实验室用MTT法所得的TCE对L02毒性剂量-效应关系,选择5μmolL的三氯乙烯为低剂量,40μmolL为高剂量,按以下方式对细胞进行染毒:空白对照、低剂量、高剂量、损伤耐受组(先用低剂量刺激24小时,再用高剂量刺激6小时),然后用荧光差异显示PCR(FluoroDDPCR)寻找不同方式刺激差异表达的基因,并对差异表达基因进行克隆、鉴定。结果按方法所示的方式处理细胞,处理完毕后提取各组细胞总RNA,进行荧光差异显示PCR,找到51个差异条带。对其中的11个差异条带进行克隆鉴定同源性比较,发现其中9个已知基因,2个新基因。结论用荧光差异显示PCR方法寻找TCE诱导L02损伤耐受过程差异表达的基因,通过鉴定基因,为进一步研究TCE诱导L02的损伤耐受的机理提供科学依据。 展开更多

关键词 三氯乙烯 损伤耐受 荧光差异显示pcr

下载PDF 职称材料

低剂量过氧化氢诱导机体适应性反应差异表达基因的研究 被引量：2

7

作者 卫秦芝 庄志雄 +4 位作者 袁建辉 李习艺 杨晓华 黄海燕 庾蕾 《中国职业医学》 CAS 北大核心 2005年第4期2-6,共5页

目的寻找低剂量过氧化氢(H2O2)诱导人胚肺成纤维细胞(MRC-5)适应性反应差异表达的基因。方法用溴化四氮唑蓝(MTT)法检测细胞存活率得到H2O2对MRC-5毒性的剂量反应关系,分别用低剂量、高剂量和低剂量预刺激后用高剂量攻击细胞,观察细胞... 目的寻找低剂量过氧化氢(H2O2)诱导人胚肺成纤维细胞(MRC-5)适应性反应差异表达的基因。方法用溴化四氮唑蓝(MTT)法检测细胞存活率得到H2O2对MRC-5毒性的剂量反应关系,分别用低剂量、高剂量和低剂量预刺激后用高剂量攻击细胞,观察细胞生长的变化,得到低剂量H2O2诱导MRC-5的适应性反应模型。然后用荧光差异显示聚合酶链反应(FluoroDD-PCR)寻找不同方式刺激的差异表达基因。结果根据H2O2诱导MRC-5毒性的剂量反应关系,选择0.088、0.88、8.8、88μmol/L为低剂量,1100μmol/L为高剂量,用低剂量处理细胞24h,然后用高剂量刺激1h,可以观察到在0.88μmol/L预刺激细胞24h后,对继而1100μmol/L的刺激有明显的抵抗效应。对不同方式处理的细胞RNA进行FluoroDD-PCR,找到60个差异条带。对其中的15个差异条带进行克隆鉴定同源性比较,发现其中7个已知基因,8个新基因。结论H2O2可以诱导MRC-5的适应性反应过程,用FluoroDD-PCR方法找到差异表达的基因。 展开更多

关键词 过氧化氢 适应性反应 荧光差异显示pcr

下载PDF 职称材料

低剂量的氢醌诱导细胞损伤耐受差异表达基因的研究

8

作者 卫秦芝 庄志雄 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第8期1092-1095,共4页

目的探讨低剂量氢醌(HQ)诱导人胚肺成纤维细胞(HLF)损伤耐受差异表达的基因。方法参照本实验室用MTT法所得的HQ对HLF毒性的剂量效应关系,选择100pmol/L的HQ为低剂量,100μmol/L的HQ为高剂量,按以下方式对细胞进行染毒:空白对照、低剂量... 目的探讨低剂量氢醌(HQ)诱导人胚肺成纤维细胞(HLF)损伤耐受差异表达的基因。方法参照本实验室用MTT法所得的HQ对HLF毒性的剂量效应关系,选择100pmol/L的HQ为低剂量,100μmol/L的HQ为高剂量,按以下方式对细胞进行染毒:空白对照、低剂量、高剂量、损伤耐受组(先用低剂量预刺激24h,再用高剂量刺激6h,然后用荧光差异显示PCR寻找不同方式刺激差异表达的基因,并对差异表达基因进行克隆、鉴定同源性比较。结果按方法所示的方式处理细胞,处理完毕后提取各组细胞总RNA,进行荧光差异显示PCR,找到33个差异条带。对其中的8个差异条带进行克隆鉴定同源性比较,发现其中1个已知基因,7个未知基因。结论用荧光差异显示PCR方法寻找HQ诱导HLF损伤耐受过程差异表达的基因,通过鉴定基因,为进一步研究低剂量HQ诱导HLF损伤耐受的机制提供科学依据。 展开更多

关键词 氢醌 损伤耐受 荧光差异显示pcr

下载PDF 职称材料

心脏移植后外周血FK506结合蛋白1A基因的表达

9

作者 许秀芳 李温斌 +5 位作者 孟旭 李文 刘艳霞 刘舒 周健 黄益民 《首都医科大学学报》 CAS 2002年第2期125-127,共3页

利用荧光差异显示PCR(DD PCR)技术检测心脏移植后外周血白细胞基因的表达。结果显示 :RPL2 3基因移植后有波动 ,排斥发生时表达增强 ;FK5 0 6结合蛋白 1A基因移植后表达较弱 ,排斥发生时明显增强。提示 :外周血DD PCR检测白细胞基因的... 利用荧光差异显示PCR(DD PCR)技术检测心脏移植后外周血白细胞基因的表达。结果显示 :RPL2 3基因移植后有波动 ,排斥发生时表达增强 ;FK5 0 6结合蛋白 1A基因移植后表达较弱 ,排斥发生时明显增强。提示 :外周血DD PCR检测白细胞基因的表达可能对研究排斥反应机制及进行移植排斥反应诊断具有一定的意义。 展开更多

关键词 心脏移植 外周血 FK506结合蛋白1A基因 免疫排斥 荧光差异显示pcr

下载PDF 职称材料

荧光差异显示PCR分离果蝇七氟醚敏感性相关基因 被引量：5

10

作者 刘红 任笑蒙 +1 位作者 陈兰英 刘进 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第6期715-722,共8页

吸入麻醉药是临床上常用的一类全身麻醉药 .为深入研究吸入麻醉药的作用机理 ,以本实验室创建的对七氟醚敏感的果蝇品系 (F PS1 )和耐药 (F PR1 )的果蝇品系为研究模型 ,以野生型黑腹果蝇 (Drosophilamelanogaster)为对照 ,应用荧光mRN... 吸入麻醉药是临床上常用的一类全身麻醉药 .为深入研究吸入麻醉药的作用机理 ,以本实验室创建的对七氟醚敏感的果蝇品系 (F PS1 )和耐药 (F PR1 )的果蝇品系为研究模型 ,以野生型黑腹果蝇 (Drosophilamelanogaster)为对照 ,应用荧光mRNA差异显示PCR (fluorescentdifferentialdisplayreversetranscriptional PCR ,fluoroDDRT PCR)方法 ,分离与吸入麻醉药七氟醚敏感性相关的候选基因(EST) .在分离到的 32个差异片段中 ,经Northern印迹杂交鉴定后 ,得到 1个阳性片段 (No .4 1 ) ,其在敏感品系果蝇中表达较高 .通过cDNA末端快速扩增技术 (rapidamplificationofcDNAends ,RACE)克隆和拼接获得了 1 75kb的全长cDNA ,该基因位于Chr2R 4 5F3区域内 ,为一已知序列的新基因 .实验结果与前期工作用遗传学定位方法所得结果一致 ,从而可推测决定七氟醚敏感性的相关基因可能位于果蝇第 2号染色体上 . 展开更多

关键词 荧光mRNA差异显示pcr 七氟醚敏感性基因 果蝇 麻醉药 作用机理

下载PDF 职称材料

多胎与单胎山羊发情期卵巢褪黑素受体基因的差异表达研究 被引量：6

11

作者 汪运舟 曾启繁 +2 位作者 陈维云 王慧 王树迎 《中国农学通报》 CSCD 北大核心 2011年第3期262-267,共6页

为探明褪黑素受体(MTR1A)对山羊产羔数等繁殖性状的调控作用,并比较多胎高产的济宁青山羊与单胎的沂蒙黑山羊发情期卵巢组织中MTR1A的差异表达量。采用荧光定量差异显示PCR(DDRT-qPCR)技术,以持家基因GAPDH为分子内标,对比研究了褪黑素... 为探明褪黑素受体(MTR1A)对山羊产羔数等繁殖性状的调控作用,并比较多胎高产的济宁青山羊与单胎的沂蒙黑山羊发情期卵巢组织中MTR1A的差异表达量。采用荧光定量差异显示PCR(DDRT-qPCR)技术,以持家基因GAPDH为分子内标,对比研究了褪黑素受体1A(MTR1A)基因在多胎的济宁青山羊和单胎的沂蒙黑山羊发情期卵巢组织中的差异表达量。研究发现,MTR1A在两种山羊发情期的卵巢组织中均有表达,但是,在青山羊发情期卵巢组织中的表达量显著低于在沂蒙黑山羊卵巢组织中的表达量(P<0.05)。说明,发情期褪黑素受体基因在卵巢组织中的高表达是限制山羊卵巢排卵和产羔数的重要因素之一。研究结果提示:卵巢组织是褪黑素作用的重要靶器官,褪黑素对于山羊卵巢组织的发育、成熟和排卵具有重要影响。研究结果对于阐明褪黑素受体调控山羊生殖机能的作用机理提供了基础研究数据。 展开更多

关键词 济宁青山羊 沂蒙黑山羊 卵巢 褪黑素受体-1A 荧光定量差异显示pcr 发情期

下载PDF 职称材料