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Kiss-1基因在不同发育阶段五指山猪睾丸中的表达及定位研究 被引量:5
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作者 荀文娟 曹婷 +2 位作者 周汉林 侯冠彧 施力光 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2015年第2期370-374,共5页
试验采用荧光定量技术研究亲吻素-1(Kiss-1)基因mRNA在30、60、80(初情期)和120日龄五指山公猪睾丸中的表达情况,并采用免疫组化技术定位其表达。结果显示,Kiss-1mRNA在五指山猪睾丸中的表达随着年龄的增长表达量逐渐升高,到初情期(80日... 试验采用荧光定量技术研究亲吻素-1(Kiss-1)基因mRNA在30、60、80(初情期)和120日龄五指山公猪睾丸中的表达情况,并采用免疫组化技术定位其表达。结果显示,Kiss-1mRNA在五指山猪睾丸中的表达随着年龄的增长表达量逐渐升高,到初情期(80日龄)时达到最高(P<0.05),随后到120日龄时显著降低(P<0.05);免疫组化结果显示,睾丸间质细胞、精原细胞、初级精母细胞、次级精母细胞、圆形精子细胞及间质细胞中均发现Kiss-1阳性反应产物,而在精子中未发现Kiss-1阳性表达产物。结果证实,Kiss-1基因在五指山猪精子发生过程中发挥着重要作用。 展开更多
关键词 KISS-1 五指山猪 睾丸 荧光定量rcr 免疫组化
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海带配子体碳酸酐酶(CA)基因的克隆及其特征分析 被引量:3
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作者 余贞 毕燕会 周志刚 《水产学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第9期1343-1353,共11页
根据海带雄配子体抑制消减cDNA文库2个长为376 bp的表达序列标签(expressedsequence tag,EST),Blastn搜索发现它们与掌状海带的碳酸酐酶(carbonic anhydrase,CA)基因序列(GenBank登录号:AJ130777)有70%的相似性,结合该EST以及掌状海带C... 根据海带雄配子体抑制消减cDNA文库2个长为376 bp的表达序列标签(expressedsequence tag,EST),Blastn搜索发现它们与掌状海带的碳酸酐酶(carbonic anhydrase,CA)基因序列(GenBank登录号:AJ130777)有70%的相似性,结合该EST以及掌状海带CA基因保守序列设计引物,扩增得到海带配子体CA基因部分开放阅读框(open reading frame,ORF)序列,再以此为基础设计基因特异性引物,然后利用cDNA末端快速扩增技术(rapidamplification of cDNA ends,RACE),克隆得到一条长2 804 bp的cDNA序列(GenBank登录号:JF827608),其中5'-非翻译区(untranslated region,UTR)长166 bp,3'-UTR长1 765 bp,且具有明显的polyA尾巴,ORF长873 bp。它编码一个由290个氨基酸组成的前体蛋白,预测在20 Gly-21 Val处有一个典型的信号肽酶切位点,酶切后的成熟蛋白由270个氨基酸组成,具有3个锌结合的His残基所构成的催化活性中心,其分子量为30.44 ku,等电点为5.06。无论在cDNA或者DNA序列上,雌、雄配子体CA基因都没有差异,且无内含子。Southern-blotting杂交结果显示,海带配子体CA基因为单拷贝基因。蛋白同源性搜索,发现该基因的编码蛋白与掌状海带的α-CA蛋白有87%的同源性。基于36个CA蛋白的氨基酸序列所构建的邻接(Neighbor-Joining)系统进化树显示,自海带配子体中所克隆的CA基因位于α-CA蛋白所组成的一支,推测它可能为α-型,因而不在线粒体中起作用。实时荧光定量PCR(quantitativereal-time PCR,Q-RT-PCR)结果表明,在增加CO2浓度的条件下,CA基因在海带雌、雄配子体中的日表达量均较未增加的条件下有所增加,由此推测该CA基因不属于胞外CA;基于海带配子体CA蛋白仅具有一个信号肽,可以推测它是定位于叶绿体外膜上,以泵的方式为叶绿体光合作用提供充足的CO2。 展开更多
关键词 海带 配子体 碳酸酐酶基因 克隆 荧光定量rcr
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四川德阳地区解脲脲原体感染现状分析及两种核酸检测方法比较 被引量:1
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作者 文强 曹桂群 +1 位作者 王秀 徐志红 《实验与检验医学》 CAS 2020年第5期956-959,共4页
目的调查德阳地区解脲脲原体(ureaplasma urealyticum,UU)感染现状及两种核酸检测方法差异。方法回顾2016年11月至2018年10月德阳市人民医院就诊患者的UU核酸检测结果,并应用统计学原理分析结果数据。结果1001例患者采用核酸恒温扩增技... 目的调查德阳地区解脲脲原体(ureaplasma urealyticum,UU)感染现状及两种核酸检测方法差异。方法回顾2016年11月至2018年10月德阳市人民医院就诊患者的UU核酸检测结果,并应用统计学原理分析结果数据。结果1001例患者采用核酸恒温扩增技术(Simultaneous amplification and testing,SAT)进行UU-RNA检测,1032例患者采用PCR-荧光探针法进行UU-DNA检测。UU-RNA检测阳性率(45.95%)低于UU-DNA(54.36%),女性的UU阳性率(RNA:53.33%;DNA:66.03%)高于男性(RNA:41.24%;DNA:44.68%);年龄段间的阳性率呈现随年龄的增加而降低的趋势。在复检人群中,仍有18.97%(RNA)~32.00%(DNA)的患者反复感染或还未治愈。结论德阳地区受检人群的UU感染率整体较高,女性显著高于男性,青中年高于老年。SAT技术适用于UU临床疗效监测。部分患者UU感染易反复,难治愈,需要临床医生合理用药,谨慎治疗。 展开更多
关键词 解脲脲原体 分布特征 核酸恒温扩增技术 荧光定量rcr
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宫颈癌组织中PEBP4、mTOR mRNA和蛋白的表达及临床意义 被引量:5
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作者 曹学全 胡金蒙 +4 位作者 杨朝晖 卢洪胜 魏科娜 章辉 顾华敏 《浙江医学》 CAS 2018年第17期1904-1908,1994,共6页
目的探讨宫颈癌组织中磷脂酰乙醇胺结合蛋白4(PEBP4)、雷帕霉素靶蛋白(mTOR)mRNA和蛋白的表达水平及其临床意义。方法应用实时荧光定量PCR法及免疫组化En Vision法分别检测48例宫颈癌组织和48例正常宫颈组织中PEBP4和mTOR mRNA和蛋白的... 目的探讨宫颈癌组织中磷脂酰乙醇胺结合蛋白4(PEBP4)、雷帕霉素靶蛋白(mTOR)mRNA和蛋白的表达水平及其临床意义。方法应用实时荧光定量PCR法及免疫组化En Vision法分别检测48例宫颈癌组织和48例正常宫颈组织中PEBP4和mTOR mRNA和蛋白的表达差异,分析其表达与宫颈癌患者临床病理特征的关系。采用Spearman等级相关分析宫颈癌组织中PEBP4、mTOR mRNA和蛋白表达的相关性。结果宫颈癌组织中PEBP4和mTOR mRNA表达水平均明显高于正常宫颈组织,差异均有统计学意义(均P<0.01)。宫颈癌组织中PEBP4和mTOR蛋白表达的阳性率分别为72.92%和66.67%,均明显高于正常宫颈组织的10.42%和8.32%,差异均有统计学意义(均P<0.01)。PEBP4 mRNA表达水平和蛋白表达阳性率与宫颈癌浸润肌层、淋巴结是否转移和临床分期均有关(均P<0.05)。mTOR mRNA表达水平和蛋白表达阳性率与宫颈癌淋巴结是否转移和临床分期均有关(均P<0.05)。宫颈癌组织中PEBP4、mTOR mRNA和蛋白之间的表达均呈正相关(均P<0.01)。结论宫颈癌组织中PEBP4和mTOR mRNA和蛋白的表达均明显升高,且两者mRNA和蛋白之间的表达均呈正相关,表明PEBP4和mTOR异常表达可能在宫颈癌的发生、发展中起正向调控作用。 展开更多
关键词 宫颈癌 磷脂酰乙醇胺结合蛋白4 雷帕霉素靶蛋白 实时荧光定量rcr
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实时定量聚合酶链反应法检测人周围血淋巴细胞受照后GADD45基因表达的改变 被引量:2
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作者 刘莉 佘义 +4 位作者 赵卫东 李进 王芹 田丽丽 姜恩海 《中国职业医学》 CAS 北大核心 2008年第6期454-457,共4页
目的建立辐射诱导人淋巴细胞GADD45基因表达定量检测技术,探讨GADD45基因表达变化作为辐射生物剂量计的可行性。方法健康人周围血经X射线照射后分离淋巴细胞,提取总RNA,反转录成cDNA,利用实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)法检测GADD45基... 目的建立辐射诱导人淋巴细胞GADD45基因表达定量检测技术,探讨GADD45基因表达变化作为辐射生物剂量计的可行性。方法健康人周围血经X射线照射后分离淋巴细胞,提取总RNA,反转录成cDNA,利用实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)法检测GADD45基因经不同剂量照射(0~8 Gy)、2 Gy照后不同时间(0~72 h)的mRNA表达水平,以管家基因GAPDH为内参进行定量分析。结果照射后GADD45基因在转录水平表达呈剂量依赖性增加,4 Gy照射时达到峰值,8 Gy仍然保持在较高水平,GADD45基因表达改变存在线性剂量-效应关系,其线性回归方程为y^=3.408+1.528x,R2=0.787。2 Gy照射后GADD45基因mRNA表达在照射后1 h呈现上升趋势,在4 h时达峰值,照射后72 h基因表达仍未恢复到初始水平。结论实时荧光定量PCR检测GADD45基因表达方法具有良好的敏感性、重复性和剂量-效应关系,有可能成为新的辐射生物剂量计。 展开更多
关键词 GADD45基因 生物剂量计 基因表达 实时荧光定量rcr
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