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实时荧光定量PCR技术应用研究 被引量：7
1
作者 杨弘华 宋燕燕 +4 位作者 林晓波 张敏瑜 李妍 倪焕峰 刘洋 《山东化工》 CAS 2016年第22期46-47,共2页
实时荧光定量PCR技术(Real-time fluorescent quantitine PCR,FQ-PCR)是在PCR技术的基础上,将荧光基因加入到PCR反应体系中,通过观察荧光基因信号的聚集位置和分布状态,从而监测整个PCR反应过程。是一种具有高度灵敏性和准确性的核酸定... 实时荧光定量PCR技术(Real-time fluorescent quantitine PCR,FQ-PCR)是在PCR技术的基础上,将荧光基因加入到PCR反应体系中,通过观察荧光基因信号的聚集位置和分布状态,从而监测整个PCR反应过程。是一种具有高度灵敏性和准确性的核酸定量监测技术,它以快捷,准确,定量,高效,便捷方便等特点广泛应用在食品安全,转基因食品检测,病毒细菌RNA,DNA检测,动物学,植物学,昆虫学等多个科研领域。 展开更多
关键词 实时荧光定量PCR 基因检测 荧光基因 食品安全
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活体细胞内双光子激发的光漂白特性 被引量：6
2
作者 陈同生 曾绍群 +2 位作者 骆清铭 张智红 周炜 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2002年第2期261-266,共6页
长波长光的强穿透能力和对活体细胞和生物组织光毒性很小的特性 ,使得双光子激发荧光显微术已经成为无损伤成像的重要工具 .可是双光子激发的高光子密度可能会产生高次光子相互作用 ,从而产生更快的光漂白 .从实验上研究了离体和活体细... 长波长光的强穿透能力和对活体细胞和生物组织光毒性很小的特性 ,使得双光子激发荧光显微术已经成为无损伤成像的重要工具 .可是双光子激发的高光子密度可能会产生高次光子相互作用 ,从而产生更快的光漂白 .从实验上研究了离体和活体细胞内的若丹明 12 3和若丹明B分别在单光子激发和双光子激发时的光漂白特性 .在体的实验结果与离体的实验结果一致 .正如期望的一样 ,单光子激发时光漂白速率非常近似地随着激发功率的增加而线性增加 .可是 ,双光子激发时的光漂白速率并不是正比于激发功率的平方 ,而是正比于激发功率的高次方 (>3 5 ) .对绿色荧光蛋白 (GFP)变异体CFP和YFP的实验也得到同样的结果 ,这就表明高次光漂白可能是双 (多 )光子激发中的普遍现象 .因此多光子的应用可能会受到强光漂白的限制 . 展开更多
关键词 活体细胞 光漂白 荧光基因 单光子激发 双光子激发
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荧光兔
3
作者 戴微 《大自然探索》 2000年第12期29-30,共2页
关键词 科学家 绿色荧光蛋白 抗癌基因 基因技术 荧光基因 发光基因 生物学家 基因变异 外科手术 生物冷光
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荧光标记中性粒细胞特异性敲除膜结合型前列腺素E2合酶-1小鼠的构建及其在静脉血栓形成中的应用
4
作者 黄永胡 陈虹 +3 位作者 张雨泽 钱思远 饶昊杰 王淼 《中国分子心脏病学杂志》 CAS 2020年第5期3570-3573,共4页
膜结合型前列腺素E2合酶-1(mPGES-1)是一个新型抗炎药靶,全身敲除mPGES-1不影响动脉血栓形成,抑制血管病理性重构。目的构建荧光(tdTomato)标记的mPGES-1中性粒细胞特异性敲除小鼠并鉴定其在静脉血栓形成中的应用。方法与结果人工合成... 膜结合型前列腺素E2合酶-1(mPGES-1)是一个新型抗炎药靶,全身敲除mPGES-1不影响动脉血栓形成,抑制血管病理性重构。目的构建荧光(tdTomato)标记的mPGES-1中性粒细胞特异性敲除小鼠并鉴定其在静脉血栓形成中的应用。方法与结果人工合成基因打靶序列,包括mPGES-1同源序列、LoxP序列、Lox2272序列和tdTomato表达序列,利用CRISPR/Cas9技术将这段合成序列同源置换C57BL/6N小鼠的mPGES-1基因序列,制备转基因小鼠(mPGES-1fl/fl),将其与中性粒细胞特异性表达Cre重组酶的小鼠(Lyz-Cre+)杂交获得Lyz-Cre(+)mPGES-1fl/fl小鼠。向小鼠腹腔注射脂多糖诱导炎症,半定量PCR结果显示Lyz-Cre(+)mPGES-1fl/fl小鼠外周血白细胞mPGES-1表达缺失,荧光显微镜观察和流式细胞分析结果表明tdTomato成功标记Lyz-Cre(+)mPGES-1fl/fl小鼠中性粒细胞。通过限制血流诱导小鼠下腔静脉血栓,荧光标记的中性粒细胞参与静脉血栓形成。敲除中性粒细胞mPGES-1不影响基础状态血液PGE2水平,但显著抑制诱导静脉血栓相关的PGE2水平上调。结论成功构建报告基因tdTomato特异性标记的mPGES-1组织特异性敲除的转基因小鼠,利用此工具鼠进一步发现中性粒细胞参与静脉血栓形成,中性粒细胞mPGES-1介导静脉血栓形成相关的PGE2合成。 展开更多
关键词 荧光基因 MPGES-1 中性粒细胞 静脉血栓 转基因小鼠
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开启秘密之门
5
作者 青云 《知识就是力量》 2012年第6期26-27,共2页
最近，韩国研究人员培育出一只小猎狗。这条狗看上去和一般的小狗没有不同，那么科学家为什么花那么大的心思去培育呢？把这条狗放在黑暗中，就可以看出它的与众不同之处：它的爪子居然在黑暗中能发出绿光。该研究项目负责人李：秉春表... 最近，韩国研究人员培育出一只小猎狗。这条狗看上去和一般的小狗没有不同，那么科学家为什么花那么大的心思去培育呢？把这条狗放在黑暗中，就可以看出它的与众不同之处：它的爪子居然在黑暗中能发出绿光。该研究项目负责人李：秉春表示，我们的最终研究目的不是仅仅让狗发光。接下来将让一些致病基因与荧光基因绑定，移入实验狗体内。 展开更多
关键词 项目负责人 研究人员 荧光基因 致病基因 猎狗 科学家 培育 中能
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猪年科普:关于猪你不知道的十件事
6
《科学中国人》 2019年第3期78-79,共2页
猪年起算自二十四节气之立春,因为生肖年依附于干支纪年,而干支纪年又是干支历的纪年方法,历代官方历书(即黄历)皆如此。猪在十二生肖中排行最后一位,与十二地支配属'亥',故一天十二时辰的'亥时'——晚上九点至十一点称... 猪年起算自二十四节气之立春,因为生肖年依附于干支纪年,而干支纪年又是干支历的纪年方法,历代官方历书(即黄历)皆如此。猪在十二生肖中排行最后一位,与十二地支配属'亥',故一天十二时辰的'亥时'——晚上九点至十一点称'猪时',易卦为'猪为材'。2019年,我们又迎来了猪年,现在就让我们走近'猪'这一可爱的动物,来了解它不为人知的一面。 展开更多
关键词 干支纪年 干支历 荧光基因 人类疾病 二十四节气 基因构成
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科技动态
7
《世界农业》 1987年第3期58-59,共2页
发光烟草 最近,美国加利福尼亚大学生化系的一个科研小组宣布,他们已从萤火虫的体细胞中分离出荧光基因,并建立了无性繁殖系。由荧光基因合成的酶(荧光酶)在发光反应中起催化剂作用。他们利用根癌土壤杆菌(Agrobacterium tumefacien)成... 发光烟草 最近,美国加利福尼亚大学生化系的一个科研小组宣布,他们已从萤火虫的体细胞中分离出荧光基因,并建立了无性繁殖系。由荧光基因合成的酶(荧光酶)在发光反应中起催化剂作用。他们利用根癌土壤杆菌(Agrobacterium tumefacien)成功地将荧光基因移植到活体烟草中。 展开更多
关键词 根癌土壤杆菌 荧光基因 科技动态 无性繁殖系 加利福尼亚 发光反应 体细胞 催化剂作用 大学生 萤火虫
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一种新型生物能源发光苔藓的研究
8
作者 阚义 张欣妮 《现代农业科技》 2012年第14期198-199,共2页
利用转基因技术将萤火虫的荧光基因和苔藓融合,产生一种新的生物替代能源,其原理是通过荧光现象和光合作用的协同,实现低消耗的能量循环,成为一个自给自足的供光体系。作为地下的供光系统,苔藓的某些生活特性可以有效地解决矿难的发生... 利用转基因技术将萤火虫的荧光基因和苔藓融合,产生一种新的生物替代能源,其原理是通过荧光现象和光合作用的协同,实现低消耗的能量循环,成为一个自给自足的供光体系。作为地下的供光系统,苔藓的某些生活特性可以有效地解决矿难的发生。其衍生品光苔灯,可以应用到公共环境照明中。以光苔能源改善社会的能源结构,从而达到可持续发展的目的,实现绿色能源的广泛普及。 展开更多
关键词 荧光基因 苔藓 生物能源 可持续发展
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超分子光化学体系的研究进展
9
作者 林德娟 《漳州师院学报》 1997年第2期31-36,47,共6页
本文叙述了近年来超分子化学的研究情况及进展，介绍了此类具分子识别能力的大环化学与荧光基团，荧光标记物结合形成的大环配体超分子光化学体系在药学、环境、生命科学中的应用及其发展方向。
关键词 超分子光化学 分子识别 荧光基因 光化学
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TaqMan-分子灯标:一种新型的荧光基因检测探针 被引量：12
10
作者 孔德明 古珑 +1 位作者 沈含熙 宓怀风 《化学学报》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2003年第5期755-759,共5页
在TaqMan及分子灯标的基础上开发了一类新型的均相荧光检测探针———TaqMan 分子灯标 (TaqMan MB) ,该探针集合了分子灯标的发夹结构及TaqMan探针降解作用的工作原理 ,使检测效果更好 .与实时PCR仪联用 ,可用于靶基因的定量检测 .
关键词 TaqMan-分子灯标 荧光基因检测探针 均相荧光检测探针 聚合酶链式反应
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根癌农杆菌Atu5117基因原核表达载体的构建
11
作者 吴萧 李娜 +3 位作者 赵亮 张兴桃 董增 王维维 《宿州学院学报》 2023年第9期22-26,共5页
为进一步提高农杆菌在植物转基因中的效率,构建一个原核基因表达载体,为农杆菌T-复合物招募蛋白VBP1的编码基因Atu5117的表达调控机理研究奠定基础。首先,通过聚合酶链式反应(PCR)获得Atu5117基因5’端上游具有转录活性的基因片段。然后... 为进一步提高农杆菌在植物转基因中的效率,构建一个原核基因表达载体,为农杆菌T-复合物招募蛋白VBP1的编码基因Atu5117的表达调控机理研究奠定基础。首先,通过聚合酶链式反应(PCR)获得Atu5117基因5’端上游具有转录活性的基因片段。然后,用绿色荧光蛋白基因(gfp)和493bp Atu5117启动子构成嵌合基因,体外构建原核表达载体PRSET-Agfp1,并转化到宿主细胞(大肠杆菌DH5α)。通过对绿色荧光蛋白(GFP)的跟踪观察,最终确定有启动子转录活性的基因片段。结果表明,该原核表达载体PRSET-Agfp1构建成功,为Atu5117基因的表达调控机理研究奠定基础。 展开更多
关键词 农杆菌 启动子 原核表达载体 绿色荧光基因
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内蒙古自治区包头市儿童急性呼吸道感染病原体分布及流行特征
12
作者 赵常亮 蒋海燕 +1 位作者 吴玥 刘利军 《发育医学电子杂志》 2023年第2期119-124,共6页
目的分析内蒙古自治区包头市儿童急性呼吸道感染(acute respiratory infection,ARI)病原体分布及流行特征。方法将2016年7月1日至2021年6月30日包头市7家三级医院儿科40180例0~12岁ARI患儿的鼻咽拭子标本纳入研究,并按性别、年龄、季节... 目的分析内蒙古自治区包头市儿童急性呼吸道感染(acute respiratory infection,ARI)病原体分布及流行特征。方法将2016年7月1日至2021年6月30日包头市7家三级医院儿科40180例0~12岁ARI患儿的鼻咽拭子标本纳入研究,并按性别、年龄、季节、年份进行分组研究。采用高通量荧光基因芯片技术进行26种34个亚型病原体基因检测。统计学方法采用χ^(2)检验。结果40180例标本中,共32887例检出病原体,检出率为81.85%;其中16289例(49.53%)为单一病原体感染,11679例(35.51%)为双重感染,4919例(14.96%)为三重及以上感染。累计检出58993株病原体株,其中细菌检出率为66.69%(26798/40180);病毒检出率为71.89%(28884/40180)。细菌中前3位为肺炎链球菌、流感嗜血杆菌和溶血性链球菌。病毒中前3位为呼吸道合胞病毒、副流感病毒和腺病毒。男性22727例(56.56%),女性17453例(43.44%);病毒与细菌检出率男性均高于女性,差异有统计学意义(χ^(2)值分别为32.180、5.645,P值均<0.05)。年龄<3岁者占69.35%(27865/40180),其病毒、细菌、白色念珠菌、肺炎支原体检出率均高于≥3岁儿童(χ^(2)值分别为1505.948、4613.823、48.792、4361.449,P值均<0.001)。春季送检10858份(27.02%),夏季送检7048份(17.54%),秋季送检9765份(24.30%),冬季送检12509份(31.13%),除了肺炎克雷伯菌,其他病原体在不同季节的分布比较,差异均有统计学意义(P值均<0.05)。一年四季均以肺炎链球菌感染为主;在病毒感染中,春秋两季以副流感病毒为主,夏季以腺病毒为主,冬季以呼吸道合胞病毒为主。不同年份的病原体检出率比较,差异均有统计学意义(P值均<0.001)。2016年至2021年肺炎链球菌是感染占比最高的病原体。结论内蒙古自治区包头市0~12岁ARI患儿的病原体以病毒为主,其次为细菌、肺炎支原体。男性患儿发病率高于女性患儿;年龄<3岁者高于≥3岁者;冬春季高于夏秋季,医务工作者应高� 展开更多
关键词 儿童 急性呼吸道感染 病原体分布 高通量荧光基因芯片 流行特征 肺炎链球菌
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基于ADuC824的PCR仪测温系统的研制 被引量：2
13
作者 邱宪波 袁景淇 +1 位作者 唐日泉 邹龙 《计算机工程》 CAS CSCD 北大核心 2004年第7期159-160,共2页
从软件和硬件角度讨论了以新型单片机ADuC824为核心的荧光基因扩增仪(PCR仪)温度测量系统的设计。模拟试验表明，该温度测量系统的性能、精度指标能满足PCR热循环高精度温度控制的要求。
关键词 ADUC824 荧光基因扩增仪 温度测量系统
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稳定表达T_7RNA聚合酶的猪睾丸细胞系的建立 被引量：2
14
作者 祁光宇 刘萍 +7 位作者 刘斌 王凡 武发菊 杜平 董金杰 黄银君 牟克斌 刘学荣 《东北农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第12期26-31,共6页
根据GenBank中登录的T7RNA聚合酶基因参考序列,设计合成了1对特异性引物扩增对T7RNA聚合酶基因进行扩增,将测序正确的T7RNA聚合酶基因和真核表达载体pIRES2-EGFP双酶切后进行连接构建pIRES2-EGFP-T7RNA RNA质粒。再将构建正确的pIRES2-E... 根据GenBank中登录的T7RNA聚合酶基因参考序列,设计合成了1对特异性引物扩增对T7RNA聚合酶基因进行扩增,将测序正确的T7RNA聚合酶基因和真核表达载体pIRES2-EGFP双酶切后进行连接构建pIRES2-EGFP-T7RNA RNA质粒。再将构建正确的pIRES2-EGFP-T7RNA质粒经用脂质体法转染猪睾丸细胞,通过G418筛选和单细胞克隆化,同时构建pET-32a-RED原核表达质粒载体,用其检测T7启动子控制下的红色荧光蛋白的表达。结果表明,建立的ST/T7RNA细胞系经20次传代仍然能稳定表达T7RNA聚合酶。结果显示,成功建立能稳定表达T7RNA聚合酶的猪睾丸细胞系,为猪瘟病毒反向遗传操作平台奠定了基础。 展开更多
关键词 T7RNA聚合酶 EGFP和RED荧光基因 猪睾丸细胞 ST T7RNA细胞系
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红色荧光基因慢病毒转染骨髓间充质干细胞:表达21d对细胞活性无影响 被引量：2
15
作者 尹飚 杨逸禧 +3 位作者 杨波 王簕 黎双庆 杨富国 《中国组织工程研究》 CAS 北大核心 2015年第10期1539-1543,共5页
背景:掌握转染的最佳感染复数和产生较强荧光强度的时间,可为后期观察人骨髓间充质干细胞在动物模型体内的示踪奠定基础。目的:探讨HIV-1来源的慢病毒携带增强型红色荧光蛋白转染人骨髓间充质干细胞的可行性。方法:将第4代人骨髓间充质... 背景:掌握转染的最佳感染复数和产生较强荧光强度的时间,可为后期观察人骨髓间充质干细胞在动物模型体内的示踪奠定基础。目的:探讨HIV-1来源的慢病毒携带增强型红色荧光蛋白转染人骨髓间充质干细胞的可行性。方法:将第4代人骨髓间充质干细胞分成空白组和感染复数为2,3,4组,以细胞数5.0×105个接种于12孔培养皿,添加含有体积分数为1%胎牛血清的成人骨髓间质干细胞完全培养基1 m L。调整慢病毒携带增强型红色荧光蛋白感染滴度为1.0×1011TU/L,加入各组培养皿中病毒液体积分别为10,15,20μL,感染复数分别为2,3,4,空白组加入10μL PBS。转染后24,72 h荧光倒置显微镜观察细胞红色荧光表达情况并计算出转染率。结果与结论:增强型红色荧光蛋白在骨髓间充质干细胞中稳定表达,转染后24 h倒置荧光显微镜下可见红色荧光,72 h荧光达到最强,细胞转染率与感染复数值呈线性增长关系。转染后21 d内,各转染实验组的人骨髓间充质干细胞数量与空白组比较差异无显著性意义(P>0.05),以上结果提示采用HIV-1来源的慢病毒载体介导增强型红色荧光蛋白转染标记人骨髓间充质干细胞是可行的,当感染复数为4时转染效率高并可持续表达至少21 d,且标记后对其增殖活性无影响。 展开更多
关键词 骨髓 间质干细胞 慢病毒感染 干细胞 骨髓干细胞 慢病毒 增强型红色荧光基因 人骨髓间充质干细胞 转染 国家自然科学基金
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三种出血热病毒的荧光基因芯片检测方法的建立 被引量：1
16
作者 曹佳媛 田明尧 +5 位作者 崔卓栋 柴丹 范园园 赵飞 张艳芳 金宁一 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2016年第1期1-7,共7页
为建立可同时检测新疆出血热病毒(CCHFV)、裂谷热病毒(RVFV)、拉沙病毒(LSV)的荧光基因芯片,分别针对CCHFV和RVFV的S基因、LSV的NP基因,应用生物学软件设计了3对引物与6条探针。运用多重PCR扩增和标记目的片段,将其与基因芯片杂交,最后... 为建立可同时检测新疆出血热病毒(CCHFV)、裂谷热病毒(RVFV)、拉沙病毒(LSV)的荧光基因芯片,分别针对CCHFV和RVFV的S基因、LSV的NP基因,应用生物学软件设计了3对引物与6条探针。运用多重PCR扩增和标记目的片段,将其与基因芯片杂交,最后扫描分析结果。分别对杂交温度与杂交时间进行条件优化,最后对基因芯片的特异性、敏感性和重复性进行评估。结果显示,设计的所有探针都可以与目的片段特异性杂交,探针1a与1b可检测到CCHFV,探针2a与2b可检测到RVFV,探针3a与3b可检测到LSV。相比多重PCR,荧光基因芯片检测CCHFV的灵敏度提高了10倍,检测RVFV的灵敏度提高了100倍,检测LSV的灵敏度提高了100倍。结果表明,本试验建立的同时检测3种出血热病毒的荧光基因芯片检测方法特异性高、敏感性强,可用于这3种病毒的快速检测与甄别。 展开更多
关键词 新疆出血热病毒 裂谷热病毒 拉沙病毒 多重PCR 荧光基因芯片
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荧光PCR基因分析仪的快速并行温度控制 被引量：1
17
作者 杨志远 谢秋华 《三明高等专科学校学报》 2004年第2期16-22,共7页
提出一种模仿人工经验的智能升降温控制系统,成功地应用于荧光PCR基因分析仪,同时也给出DS18B20温度传感器的详细用法及程序。
关键词 荧光基因分析仪 PCR检测 聚合酶链反应 温度控制 人工智能 温度传感器 DS18B20
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荧光基因探针PCR诊断试剂盒通过检定
18
作者 冯世容 《中华医学信息导报》 1998年第24期11-11,共1页
该校达安基因诊断中心承担的国家重点科技项目《病原体荧光探针PCR诊断试剂盒研究》中的结核菌等5个诊断试剂盒,不久前经中国药品生物制品检定所质量检定合格。
关键词 PCR诊断 荧光基因 诊断试剂盒 基因诊断 荧光探针 国家检定 科技项目 医药生物 质量检定 沙眼衣原体
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科技动态
19
《花卉》 2004年第10期5-5,共1页
关键词 花卉 荧光基因 小花龙血材 野生分布
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邰港科技全球首发5种转基因荧光鱼珊瑚缸
20
作者 邰港 《水族世界》 2005年第4期90-90,共1页
"荧光鱼"已成为邰港科技生技发展的代名词,自2001年首度发表全球第一条全亮荧光基因鱼以来,历经四年,现有十种新品系荧光鱼陆续对外出售。而在今年,邰港将一举发表5种新品系的荧光基因鱼,它们分别是邰港1号钻石新品系——绿... "荧光鱼"已成为邰港科技生技发展的代名词,自2001年首度发表全球第一条全亮荧光基因鱼以来,历经四年,现有十种新品系荧光鱼陆续对外出售。而在今年,邰港将一举发表5种新品系的荧光基因鱼,它们分别是邰港1号钻石新品系——绿钻夜明珠、红钻夜明珠和金钻夜明珠3种,以及邰港2号白金新品系——白金红豹和白金绿豹两种。 展开更多
关键词 新品系 红色荧光蛋白 夜明珠 荧光基因 珊瑚 纳米科技 钻石 金红 转基因 代名词
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