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题名睡美人转座子在草鱼CIK细胞中介导的高效基因整合
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作者
陈凯
薛亭
王艺舟
潘启华
于淼
陈天圣
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机构
华中农业大学水产学院
河南师范大学水产学院
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出处
《水生生物学报》
CAS
CSCD
北大核心
2018年第2期264-270,共7页
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基金
国家重点基础研究计划 (2013CB967700)
国家自然科学基金(31672653和31771648)
华中农业大学自主科技创新基金(2013RC014和2662015PY049)资助
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文摘
为研究睡美人(Sleeping Beauty,SB)转座子系统在草鱼(Ctenopharyngodon idellus)肾脏细胞(CIK)中介导的整合特性,构建了SB转座子和转座酶在两个质粒的二元反式(trans)转座子系统,以及转座子和转座酶元件在同一个质粒的一元顺式(cis)转座子系统;通过转染CIK细胞,用荧光显微镜、流式细胞仪和荧光定量PCR分析了转染2d后及嘌呤霉素筛选4周后的细胞,测定Ds Red转染效率和整合效率,并结合高效热不对称交互式PCR扩增获得SB转座子整合位点的序列。结果表明,SB二元转座子系统的整合效率远高于一元系统;SB转座子与转座酶比例为1鲶2时,外源基因Ds Red的整合效率最高;SB转座子偏向于插入草鱼基因组TA序列处。研究表明优化SB转座子和转座酶的比例能提高外源基因在草鱼细胞中的整合效率并快速获得突变细胞,同时为在鱼类细胞中采用SB转座子建立突变体文库提供理论基础。
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关键词
睡美人转座子
转座酶
草鱼肾脏细胞
整合位点
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Keywords
Sleeping Beauty transposon
Transposase
CIK cells
Integration sites
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分类号
S962.1
[农业科学—水产养殖]
Q173
[农业科学—水产科学]
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题名微载体规模化培养草鱼细胞与病毒的工艺及优化
被引量：6
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作者
刘秋凤
曾令兵
周勇
马杰
范玉顶
张辉
李瑞伟
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机构
上海海洋大学水产与生命科学学院
中国水产科学研究院长江水产研究所
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出处
《淡水渔业》
CSCD
北大核心
2013年第4期69-75,共7页
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基金
国家现代农业产业技术体系建设"大宗淡水鱼类产业技术体系"专项资金(编号CARS-46-11)
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文摘
研究了在悬浮培养系统中使用微载体Cephodex规模化培养草鱼肾脏组织细胞CIK和草鱼呼肠孤病毒(GCRV)的条件并进行了优化。结果表明,Cephodex是一种适合CIK细胞贴壁生长的微载体,搅拌方式(搅拌时间/静止时间)及血清浓度(0%、5%、10%、15%)对CIK细胞在Cephodex微载体上的贴附效率有影响。贴附期以转速35 r/min、每静置45 min搅拌2 min的间歇搅拌方式最佳,8 h后细胞贴附率可达90%以上;细胞贴附期培养基中的血清浓度为5%。当Cephodex微载体用量10 mg/mL、细胞初始接种密度2.5×105cells/mL、连续搅拌速度40 r/min时可获得最佳的细胞生长效能。用优化的最佳工艺条件大规模培养CIK细胞,接种感染复数为0.1的GCRV病毒3 d后,培养细胞出现典型细胞病变效应,病毒滴度(lgTCID50/mL)为8.5。本项研究为草鱼出血病疫苗规模化制备技术研究奠定了基础。
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关键词
草鱼肾脏组织细胞系（CIK）
草鱼呼肠孤病毒（GCRV）
微载体
大规模培养
工艺与优化
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Keywords
grass carp kidney cell line （CIK）
grass carp reovirus （GCRV）
microcarrier
large -scale culture
technique and optimization
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分类号
S942.5
[农业科学—水产养殖]
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