microRNA在自身免疫性疾病中的研究进展 被引量：5

1

作者 郭莹 瞿文 +1 位作者 王一浩 邵宗鸿 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第8期1237-1240,1244,共5页

microRNA（miRNA）是一类能够调节基因表达的短单链内源非编码RNA,人体30%编码蛋白的RNA受miRNA调节,这种带有茎-环结构的miRNA主要通过与互补的mRNA结合引起RNA降解或翻译抑制,对基因的表达起调控作用,进而调节细胞发育、增殖、分化、... microRNA（miRNA）是一类能够调节基因表达的短单链内源非编码RNA,人体30%编码蛋白的RNA受miRNA调节,这种带有茎-环结构的miRNA主要通过与互补的mRNA结合引起RNA降解或翻译抑制,对基因的表达起调控作用,进而调节细胞发育、增殖、分化、凋亡以及肿瘤的发生。 展开更多

关键词 MICRORNA 自身免疫性疾病 细胞分化 茎-环结构 翻译抑制 基因沉默 编码蛋白 免疫调控 信号通路 调节基因

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单股正链RNA病毒基因组3'非编码区功能 被引量：1

2

作者 刘长龙 袁世山 《中国动物传染病学报》 CAS 2010年第3期76-81,共6页

单股正链RNA病毒数量众多,对人、动物和植物造成很大的危害。病毒基因组3'末端都具有一段非编码区,基因组3'非编码区在病毒的复制过程中发挥着重要的作用。本文简单介绍了单股正链RNA病毒基因组3'非编码区结构的预测、测定... 单股正链RNA病毒数量众多,对人、动物和植物造成很大的危害。病毒基因组3'末端都具有一段非编码区,基因组3'非编码区在病毒的复制过程中发挥着重要的作用。本文简单介绍了单股正链RNA病毒基因组3'非编码区结构的预测、测定和功能的研究方法,并重点概括了不同单股正链RNA病毒3'非编码区一级序列、茎-环结构、假结体、TLS等结构在病毒基因组的复制、转录和翻译中的调控作用以及目前存在的问题。 展开更多

关键词 3'非编码区(3'UTR) RNA复制 亚基因组RNA转录 翻译 茎-环结构 假结体

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核糖体失活蛋白的研究进展 被引量：28

3

作者 李建国 《分子植物育种》 CAS CSCD 2005年第4期566-570,共5页

核糖体失活蛋白是一类作用于rRNA而抑制核糖体功能的毒蛋白,广泛存在于高等植物体内。核糖体失活蛋白分为3类:第1类是单肽链蛋白,分子量大约30kD,一般为碱性糖蛋白,具有RNAN-糖苷酶活性;第2种类型是异源二聚体蛋白,分子量大约为60kD,A... 核糖体失活蛋白是一类作用于rRNA而抑制核糖体功能的毒蛋白,广泛存在于高等植物体内。核糖体失活蛋白分为3类:第1类是单肽链蛋白,分子量大约30kD,一般为碱性糖蛋白,具有RNAN-糖苷酶活性;第2种类型是异源二聚体蛋白,分子量大约为60kD,A链具有RNAN-糖苷酶活性,B链是一个对半乳糖专一的凝集素,B链可以分别或同时与真核细胞表面的糖蛋白或糖脂的半乳糖部分结合,介导A链逆向进入胞质溶胶;第3种类型是先合成无活性的核糖体失活蛋白前体,然后在涉及形成活性位点的氨基酸之间进行酶解加工。核糖体失活蛋白通过对核糖体大亚基RNA的3'端茎环结构中一个高度保守的核苷酸区域的作用,破坏核糖体大亚基RNA的结构,使核糖体失活。核糖体失活蛋白的功能主要通过2个方面产生,即RNA的N-糖苷酶活性和RNA水解酶的活性。核糖体失活蛋白不仅对病毒具有广谱抗性,而且对真菌和昆虫也有抗性。核糖体失活蛋白可以给植物提供对病毒和真菌的广谱抗性,这为我们利用有关的核糖体失活蛋白基因提高植物对病毒和真菌的抗性提供了一条新的途径。 展开更多

关键词 核糖体失活蛋白 研究进展 N-糖苷酶 广谱抗性 异源二聚体 rRNA 植物体内 细胞表面 胞质溶胶 活性位点 茎环结构 蛋白基因 分子量 糖蛋白 半乳糖 大亚基 毒蛋白 体功能 凝集素 氨基酸 核苷酸 水解酶 病毒 真菌 类型 A链

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核糖开关与基因表达调控 被引量：5

4

作者 韩祥东 刘薇 +1 位作者 吴存祥 冯永君 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第12期1094-1100,共7页

核糖开关(riboswitch)是近几年基因表达调控研究的一个热点.核糖开关位于mRNA的非翻译区(untranslated regions,UTR),能够直接感受胞内外信号并引起自身二级结构的变化,在转录或后转录(翻译和mRNA稳定性)水平实现对下游相关基因的表达调... 核糖开关(riboswitch)是近几年基因表达调控研究的一个热点.核糖开关位于mRNA的非翻译区(untranslated regions,UTR),能够直接感受胞内外信号并引起自身二级结构的变化,在转录或后转录(翻译和mRNA稳定性)水平实现对下游相关基因的表达调控,该过程不依赖于包括蛋白质在内的其它任何因子的作用.根据现已发现的核糖开关所能识别的信号因子类型,可以将其分为4类,即小分子代谢物、金属离子、环境因素及空载tRNA敏感的核糖开关;其中,小分子代谢物敏感的核糖开关是发现和研究最多且最深入的一类.随着研究的深入,将会有更多的核糖开关被发现,这不仅有助于理解生物进化与环境适应性,而且在生物学基础研究,新型药物的开发以及工业生产领域都将发挥重要作用. 展开更多

关键词 核糖开关 基因表达调控 茎环结构 适体 配体

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cGAS蛋白促进PCV-2茎环结构诱导cGAS-STING信号通路天然免疫反应研究

5

作者 苏冰 邓治邦 《黑龙江畜牧兽医》 CAS 北大核心 2024年第13期59-65,71,共8页

为了探索猪圆环病毒2型(PCV-2)DNA茎环结构是否可以激活环鸟苷酸腺苷酸合成酶(cGAS),以及是否诱导cGAS-STING信号通路天然免疫反应,试验将含有PCV-2茎环结构的单链DNA(SL-DNA)转染至PK15细胞中,通过Western-blot检测cGAS蛋白是否在PK15... 为了探索猪圆环病毒2型(PCV-2)DNA茎环结构是否可以激活环鸟苷酸腺苷酸合成酶(cGAS),以及是否诱导cGAS-STING信号通路天然免疫反应,试验将含有PCV-2茎环结构的单链DNA(SL-DNA)转染至PK15细胞中,通过Western-blot检测cGAS蛋白是否在PK15细胞中表达;将SL-DNA转染至过表达及敲除cGAS蛋白的PK15细胞中,通过实时荧光定量PCR检测细胞中cGAS、干扰素刺激基因(STING)、TANK结合激酶1(TBK1)、干扰素调节因子3(IRF3)、干扰素-β(IFN-β)、白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)基因的表达水平。结果表明:SL-DNA转染后,PK15细胞中cGAS蛋白表达量上升;过表达cGAS蛋白的PK15细胞与PK15细胞相比,SL-DNA转染后cGAS、STING、TBK1、IRF3、IFN-β、IL-1β、IL-6、TNF-α基因的相对表达量均极显著升高(P<0.01);敲除cGAS蛋白的PK15细胞与PK15细胞相比,SL-DNA转染后cGAS、STING、TBK1、IRF3、IFN-β、IL-1β、IL-6、TNF-α基因的相对表达量均极显著降低(P<0.01)。说明cGAS蛋白可以识别PCV-2的茎环结构,并且促进其诱导的cGAS-STING信号通路天然免疫反应。 展开更多

关键词 猪圆环病毒2型 茎环结构 环鸟苷酸腺苷酸合成酶 cGAS-STING信号通路 天然免疫反应

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茎环结构DNA循环放大技术测定水样中的痕量银离子 被引量：4

6

作者 杜平 《化学研究与应用》 CAS CSCD 北大核心 2018年第5期666-671,共6页

利用茎环结构DNA的循环杂交放大作用和碱基C与Ag^+之间的稳定结构,设计了一种高灵敏性的表面增强拉曼生物传感器用于水样中Ag^+的检测。首先制备了携带有大量拉曼信号分子的纳米金生物条码作为拉曼信号探针。然后通过酰胺键将捕获DNA固... 利用茎环结构DNA的循环杂交放大作用和碱基C与Ag^+之间的稳定结构,设计了一种高灵敏性的表面增强拉曼生物传感器用于水样中Ag^+的检测。首先制备了携带有大量拉曼信号分子的纳米金生物条码作为拉曼信号探针。然后通过酰胺键将捕获DNA固载在磁珠表面上,利用C-Ag^+-C形成的稳定结构和链式循环杂交反应放大技术,将含有大量拉曼信号DNA分子的纳米金颗粒通过生物素和链霉亲和素的特异性结合到磁珠上,最后通过SERS技术实现了溶液中Ag^+的检测。最佳实验条件下,当固定磁珠捕获DNA浓度为1.0×10^(-7)M,Tris-HCl缓冲溶液为pH7.4,37℃下杂交反应2.5 h后,Ag^+的浓度与拉曼信号强度呈良好的线性关系,测定线性范围为1.0×10^(-7)~1.0×10^(-12)M,检测限1.0×10^(-12)M(S/N=3)。该传感器用于海产品中Ag^+的测定,测定值与ICP-AES的测定值基本一致。 展开更多

关键词 茎环结构DNA 杂交循环放大表面增强拉曼技术 AG^+

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与猪圆环病毒2型基因组茎环结构相互作用的宿主细胞蛋白的筛选 被引量：3

7

作者 张辉 唐青海 +5 位作者 危艳武 黄立平 张志慧 刘建波 吴洪丽 刘长明 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2013年第12期1211-1216,共6页

利用酵母单杂交技术对猪圆环病毒2型(PCV2)基因组复制起始处茎环结构序列与PK-15细胞中的互作蛋白进行了筛选和鉴定。首先将合成的PCV2复制起始处的茎环结构序列整合到酵母染色体中构建诱饵酵母菌株;采用SMART技术合成PK-15细胞cDNA文库... 利用酵母单杂交技术对猪圆环病毒2型(PCV2)基因组复制起始处茎环结构序列与PK-15细胞中的互作蛋白进行了筛选和鉴定。首先将合成的PCV2复制起始处的茎环结构序列整合到酵母染色体中构建诱饵酵母菌株;采用SMART技术合成PK-15细胞cDNA文库,将总cDNA与pGADT7-Rec表达载体共同转化酵母诱饵菌株,通过同源重组在酵母细胞内同步进行cDNA文库的构建,以药物筛选阳性克隆;通过酵母菌落PCR得到阳性克隆中的cDNA插入片段,通过序列分析对此予以确认。本试验成功地构建了酵母单杂交文库,筛选出1.01×106个酵母克隆,其中196个为阳性克隆。经PCR产物测序,并通过NCBI Blast法进行序列比对,确定有4种蛋白可与PCV2基因组茎环序列发生作用。本研究从宿主细胞cDNA文库中筛选到4种可与PCV2基因组茎环序列发生作用的蛋白,为下一步阐明这些宿主蛋白对PCV2复制的调节作用奠定了基础。 展开更多

关键词 猪圆环病毒2型 茎环结构 宿主细胞 互作蛋白

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基于PET原理的FAM标记核酸适配体的汞离子检测研究 被引量：2

8

作者 张华伟 赵晗 于丽佳 《化学试剂》 CAS 北大核心 2020年第12期1460-1464,共5页

汞作为毒性最大的重金属之一,在环境中难以降解。利用光致诱导电子转移(PET)原理设计单端荧光标记核酸适配体用于汞离子检测研究。采用分子荧光光谱进行表征,激发波长490 nm,发射光谱范围为516~650 nm。在适配体5′末端修饰鸟嘌呤(G)碱... 汞作为毒性最大的重金属之一,在环境中难以降解。利用光致诱导电子转移(PET)原理设计单端荧光标记核酸适配体用于汞离子检测研究。采用分子荧光光谱进行表征,激发波长490 nm,发射光谱范围为516~650 nm。在适配体5′末端修饰鸟嘌呤(G)碱基作为荧光淬灭基团,在3′末端修饰荧光素(FAM)基团。加入汞离子后,无规则卷曲单链形成茎环结构双链,G碱基与FAM接近产生PET效应荧光淬灭。在此体系中,线性范围为0~9 nmol/L,检测限为0.15 nmol/L,可在自来水中检测Hg^2+,回收率82.5%~98%。具有较高的灵敏度和特异性,操作方法简单。 展开更多

关键词 汞离子 适配体探针 光致诱导电子转移 茎环结构 荧光策略

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猪繁殖与呼吸综合征病毒5'非翻译区中一顺式结构因子对病毒感染必要性的分析 被引量：2

9

作者 高飞 陆嘉琦 +1 位作者 袁世山 童光志 《中国动物传染病学报》 CAS 2012年第1期1-9,共9页

人们广泛认为动脉炎病毒的基因组5'非翻译区(untranslated region,UTR)在病毒基因组RNA复制、亚基因组mRNA转录和蛋白翻译过程中发挥关键作用,然而其结构与功能仍然在很大程度上不为人知。现基于2型猪繁殖与呼吸综合征病毒弱毒(Porc... 人们广泛认为动脉炎病毒的基因组5'非翻译区(untranslated region,UTR)在病毒基因组RNA复制、亚基因组mRNA转录和蛋白翻译过程中发挥关键作用,然而其结构与功能仍然在很大程度上不为人知。现基于2型猪繁殖与呼吸综合征病毒弱毒(Porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)感染性克隆pAPRRS的基础,构建了一系列5'UTR的5'末端缺失突变体,利用RNA和DNA转染,分析了拯救病毒的遗传学与病毒学特征,发现拯救病毒的5'末端突变位点被一些不知来源的AU-rich外源序列所修复。基于T7启动子与CMV启动子转录起始位点的不同,我们人为引入一段GC-rich的序列以研究病毒的自我修复是否为模板依赖性,结果发现病毒的外源序列修复机制是非模板依赖的。通过二级结构预测分析发现,在PRRSV5'UTR中的第一个茎环结构是病毒感染性必不可少的。 展开更多

关键词 非翻译区 茎环结构 回复突变体 RNA/DNA导策

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MiRdetector:一个预测与搜寻miRNA基因的计算工具 被引量：2

10

作者 张冬宁 刘阳 王翼飞 《上海大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2006年第4期376-382,共7页

MicroRNA（miRNA）是一类内源性的长约21～24nucleotide（nt）的非编码小分子RNA，能够调节其它基因的表达活性，在生物体的发育过程中发挥重要的作用．每种生物体中miRNA的基因总数还未知，生物信息学分析手段为发现新的miRNA基因提供... MicroRNA（miRNA）是一类内源性的长约21～24nucleotide（nt）的非编码小分子RNA，能够调节其它基因的表达活性，在生物体的发育过程中发挥重要的作用．每种生物体中miRNA的基因总数还未知，生物信息学分析手段为发现新的miRNA基因提供了有效的方法．作者开发了一个预测与搜寻miRNA基因的完全自动化系统“MiRdetector”．MiRdetector系统是基于计算机比对和miRNA前体茎环结构判断的．用水稻miRNA基因对系统的预测精度进行了检验。系统正确识别了155个样本中的140个，预测精度达到90．32％，并且搜寻到了95个可能的水稻miRNA基因。由于系统的假阳性率较低，因此能够为进一步证实miRNA基因的实验研究提供高质量的数据集． 展开更多

关键词 miRNA基因 系统 MiRdetector BLASTN 生物基因组 茎环结构

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用序列比对设计的茎环结构探针检测金黄色葡萄球菌 被引量：1

11

作者 杨旭 肖潇 +2 位作者 陈章 李会东 邓乐 《微生物学通报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第6期1169-1173,共5页

基于金黄色葡萄球菌16S rRNA基因序列,采用序列比对设计了一种茎环结构的寡聚核苷酸探针。探针的环序列即为金黄色葡萄球菌16S rRNA基因序列的其中一个片段,同其他菌种的16S rRNA基因序列误配2个以上的核苷酸,因此能高度专一、灵敏的检... 基于金黄色葡萄球菌16S rRNA基因序列,采用序列比对设计了一种茎环结构的寡聚核苷酸探针。探针的环序列即为金黄色葡萄球菌16S rRNA基因序列的其中一个片段,同其他菌种的16S rRNA基因序列误配2个以上的核苷酸,因此能高度专一、灵敏的检测金黄色葡萄球菌16S rRNA。根据分子信标技术和酶联免疫分析的原理,评估一个实验方法,即利用能构象转换的、固定化的茎环结构探针酶联检测靶核酸。由于探针的特异性加强,这个检测系统能有效的排除假阳性即不会出现误配一个核苷酸的情况。采用微量浓度测定分析,最低下限可检测出大约4ng的金葡球菌16SrRNA。这种方法的灵敏度比其他常规检测方法高出了至少一个数量级。 展开更多

关键词 序列比对 茎环结构探针 16S核糖体核糖核酸 检测

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SV40PolyA顺式活化基因元件中不完整茎环结构的发现和序列研究 被引量：1

12

作者 王红钢 马欢 +4 位作者 李珠 张彬 景向阳 张媛 吕占军 《遗传》 CAS CSCD 北大核心 2011年第4期337-346,共10页

研究室的前期工作发现,Alu串连序列插入pEGFP-C1质粒的GFP基因下游,瞬时转染HeLa细胞抑制GFP基因表达,2F2R(来自SV40PolyA反序5′端的第2个60 bp)插入GFP和Alu串连序列之间可以解除Alu序列对GFP基因的抑制作用。文章通过删减2F2R发现,45... 研究室的前期工作发现,Alu串连序列插入pEGFP-C1质粒的GFP基因下游,瞬时转染HeLa细胞抑制GFP基因表达,2F2R(来自SV40PolyA反序5′端的第2个60 bp)插入GFP和Alu串连序列之间可以解除Alu序列对GFP基因的抑制作用。文章通过删减2F2R发现,45R(2F2R 5′端的45 bp)、30R和22R可以活化基因,且二串连体活化基因作用高于单体。Secloop(2F2R近中部的22 bp)和Poly4(2F2R 3′端的30 bp)不能活化基因。30R与Poly4用9碱基连接形成30R-Poly4,其活化基因作用低于2F2R,两个22R之间连接碱基数对活化GFP基因作用没有明显的影响。22R(5′-GTGAAAAAAATGCTTTATTTGT-3′)含有不完整的回文序列,可以形成不完整的茎环结构,包括一个3碱基loop、3 bp第一茎、2碱基泡和3 bp第二茎。改变22R茎环结构的碱基突变明显影响其活化GFP基因的作用,过多互补和过少互补的茎环结构均不利于活化基因,提示适当的不完整茎环结构与活化基因有关。 展开更多

关键词 非编码序列 GFP 茎环结构 ALU SV40PolyA

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绞股蓝核糖体失活蛋白家族编码基因的5个cDNA及其下游非编码区 被引量：1

13

作者 林毅 谢荔岩 +3 位作者 陈国强 吴祖建 谢联辉 林奇英 《植物学通报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第2期163-168,共6页

通过3'RACE克隆策略获得绞股蓝(Gynostemma pentaphyllum)核糖体失活蛋白(ribosome-inac-tivating protein,RIP)Gynostemmin的5个cDNA序列gynostemminⅠ￣Ⅴ及其下游非编码区(3'untranslatedregion,3'UTR)。它们的编码区长... 通过3'RACE克隆策略获得绞股蓝(Gynostemma pentaphyllum)核糖体失活蛋白(ribosome-inac-tivating protein,RIP)Gynostemmin的5个cDNA序列gynostemminⅠ￣Ⅴ及其下游非编码区(3'untranslatedregion,3'UTR)。它们的编码区长度除gynostemminⅡ为825bp外,其余均为831bp。其下游非编码区的长度分别为279、174、170、161和171bp。在3'UTR中,gynostemminⅠ比另外4个多了两个小的茎环结构和一富含AU的不稳定子元件,其mRNA的稳定性可能因此受到影响。 展开更多

关键词 非编码区 核糖体失活蛋白 绞股蓝 下游 编码基因 家族 cDNA序列 RACE 茎环结构 mRNA 稳定子 稳定性 长度 克隆

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植物小RNA的巨大作用 被引量：1

14

作者 明凤 《世界科学》 2008年第10期26-27,共2页

microRNA(或miRNA)是一种长度介于20～24个核苷酸的单链RNA,由III型RNase Dicer从含有茎环结构的内源转录本中切割产生。作为一种负调控因子,miRNA作用于它们的靶标mRNA,能够在转录或翻译水平上对基因的表达起到调控作用。从1993年首个m... microRNA(或miRNA)是一种长度介于20～24个核苷酸的单链RNA,由III型RNase Dicer从含有茎环结构的内源转录本中切割产生。作为一种负调控因子,miRNA作用于它们的靶标mRNA,能够在转录或翻译水平上对基因的表达起到调控作用。从1993年首个miRNA在线虫中的发现开始,到2002年第一个植物miRNA的发现,miRNA引发了世界各国科学家的极大兴趣与高度重视,其普遍性和重要性才逐渐被人们所认识。miRNA于2002年成为当年十大科技榜首之位。 展开更多

关键词 小RNA 植物 miRNA MICRORNA RNASE DICER 负调控因子 茎环结构

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分子灯塔设计核酸测定原理及应用

15

作者 周新文 《国外医学（分子生物学分册）》 CSCD 2000年第3期182-185,共4页

分子灯塔是一种在分子杂交基础上发展的一种荧光探针。这种探针5′端标记荧光物质,3′端连接荧光淬灭剂,而且在5′端和3′端设计互补碱基序列,使探针形成茎环结构。在检测核酸时具有快速、重复性好、灵敏度和特异性高、结果明确等优点... 分子灯塔是一种在分子杂交基础上发展的一种荧光探针。这种探针5′端标记荧光物质,3′端连接荧光淬灭剂,而且在5′端和3′端设计互补碱基序列,使探针形成茎环结构。在检测核酸时具有快速、重复性好、灵敏度和特异性高、结果明确等优点。本文就分子灯塔的设计原理、分析特点和在核酸测定中的应用前景简要综述。 展开更多

关键词 分子探针 茎环结构 核酸 基因探针 DNA分子杂交

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小米psbA基因5'末端非编码区的结构特征

16

作者 黄瑶 吴乃虎 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 1996年第2期119-123,共5页

以小米(Setaria italica)为材料,克隆了含有叶绿体psbA基因的2.2kb EcoRⅠ片段,测定了该基因5＇末端非编码区的核苷酸序列。序列分析显示psbA基因5＇末端非编码区存在着与原核类似的启动子结构,其“-10”区的序列为TATACT,与原核生物“... 以小米(Setaria italica)为材料,克隆了含有叶绿体psbA基因的2.2kb EcoRⅠ片段,测定了该基因5＇末端非编码区的核苷酸序列。序列分析显示psbA基因5＇末端非编码区存在着与原核类似的启动子结构,其“-10”区的序列为TATACT,与原核生物“-10”共有基序(Consensus motif)仅相差一个核苷酸;其“-35”区的序列为TTGACA,与原核生物“-35”共有基序完全相同。另外,在“-10”区和“-35”区之间还存在着一个类似真核启动子结构的“TATATA”保守序列。这些结果表明小米psbA基因的启动子既具有原核的特征又具有真核的特征。小米psbA基因的mRNA前导序列长87bp,与高粱完全一致,而比水稻多出了“CTATTTT”7个核苷酸,比小麦、大麦和黑麦多出了“TTTT”4个核苷酸。因此推测在禾本科的C_3和C_4植物之间,psbA基因mRNA前导序列区的差异可能具有普遍性。计算机分析结果显示,以上6种植物的psbA基因mRNA前导序列区内均能形成小的茎环结构,而且这段“CTATTTT”额外序列恰好位于茎环结构中,造成了6种植物间茎环大小的差异。这一小的二级结构可能对psbA基因的表达调控有一定的影响。 展开更多

关键词 小米 PSBA基因 启动子 茎环结构

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bta-miR-377琼脂糖凝胶电泳条件优化 被引量：1

17

作者 郝琴琴 任静 +1 位作者 成俊丽 李鹏飞 《山西农业科学》 2022年第5期709-713,共5页

bta-miR-377与下丘脑分泌的可卡因苯丙胺调节转录肽(Cocaine and amphetamine regulated transcript peptide,CART)存在靶向结合关系。为分析bta-miR-377在牛下丘脑组织中的表达情况,为后续探讨bta-miR-377与CART相互作用进而影响牛卵... bta-miR-377与下丘脑分泌的可卡因苯丙胺调节转录肽(Cocaine and amphetamine regulated transcript peptide,CART)存在靶向结合关系。为分析bta-miR-377在牛下丘脑组织中的表达情况,为后续探讨bta-miR-377与CART相互作用进而影响牛卵泡发育的作用机制奠定基础,经Trizol法提取牛下丘脑总RNA,采用茎环结构法设计特异性引物,并利用半定量RT-PCR技术克隆bta-miR-377,观察不同条件琼脂糖凝胶电泳后Marker和目的条带的分离情况,其中凝胶浓度为2.0%、2.5%;电压为100、80 V;时间为40、60、80 min;同时通过Image J软件对不同条件下获得的bta-miR-377条带进行灰度值分析,结合电泳结果确定最佳分离条件。结果显示,利用茎环结构法能够达到延长bta-miR-377片段的目的,且特异性强;凝胶浓度为2.5%、电压为80 V、时间为80 min时,bta-miR-377条带分离效果好且表达量高,该条件下条带的灰度值与其他组相比差异显著,与电泳分析结果一致,说明低浓度凝胶的分辨率低,长时间高压会导致DNA降解进而使条带弥散,而适当电压下电泳时间过短会使DNA分子无法聚集而使条带过宽,说明适宜的电泳条件是鉴定目的 miRNA表达的关键。综上可见,bta-miR-377在牛下丘脑中有表达,丰富了动物生殖生理学中下丘脑-垂体-性腺轴的内分泌调控理论。 展开更多

关键词 bta-miR-377 茎环结构法 半定量RT-PCR 琼脂糖凝胶 条件优化

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抗HBV核酶的研究进展

18

作者 张嵘 王婷 范珊红 《实用肝脏病杂志》 CAS 1998年第3期183-185,共3页

乙型肝炎病毒(HBV)是引起乙型肝炎的病原体,据统计全球HBV慢性携带者的总数超过2.8亿。我国是HBV感染的高发区,据血清流行病学调查国人HBsAg携带率达10％,约1.5亿人。

关键词 锤头状核酶 甲型肝炎病毒RNA RIBOZYME 抗HBV 酶的稳定性 血清流行病学调查 体外转录 茎环结构 鸭乙型肝炎病毒 丁型肝炎

全文增补中

转录后调控元件部分或完全缺失对乙型肝炎病毒前基因组RNA核外输出的影响

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作者 黄迎丽 顾文慧 +5 位作者 朱慧慧 李亚茹 马园园 陈文文 孙锁锋 李修岭 《中华实用诊断与治疗杂志》 2022年第10期1017-1021,共5页

目的探讨转录后调控元件(post-transcriptional regulatory element,PRE)部分或完全缺失对乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)前基因组RNA(pregenomic RNA,pgRNA)核外输出的影响。方法以含HBV全基因组质粒为模板,采用PCR法构建PRE完... 目的探讨转录后调控元件(post-transcriptional regulatory element,PRE)部分或完全缺失对乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)前基因组RNA(pregenomic RNA,pgRNA)核外输出的影响。方法以含HBV全基因组质粒为模板,采用PCR法构建PRE完全缺失质粒(HBVΔPRE)、PREα缺失质粒(HBVΔPREα)、PREβ缺失质粒(HBVΔPREβ)、SLα缺失质粒(HBVΔSLα)、SLβ缺失质粒(HBVΔSLβ)。对数生长期人肝癌HepG2细胞分为WT组(转染HBV全基因组质粒)、del-PREα组(转染HBVΔPREα)、del-PREβ组(转染HBVΔPREβ)、del-PRE组(转染HBVΔPRE),转染48h后采用反转录实时荧光定量PCR法检测4组细胞、细胞质、细胞核HBV pgRNA相对表达量,计算细胞质与细胞核HBV pgRNA比值(细胞质/细胞核HBV pgRNA);采用Western blot法检测WT组与del-PRE组细胞乙型肝炎表面抗原(hepatitis B surface antigen,HBsAg)、乙型肝炎核心抗原(hepatitis B core antigen,HBcAg)蛋白相对表达量。对数生长期HepG2细胞分为WT组(转染HBV全基因组质粒)、del-SLα组(转染HBVΔSLα)、del-SLβ组(转染HBVΔSLβ),转染48h后采用反转录实时荧光定量PCR法检测3组细胞、细胞质、细胞核HBV pgRNA相对表达量,计算细胞质/细胞核HBV pgRNA。结果WT组细胞、细胞质HBV pgRNA相对表达量(1.03±0.07、1.01±0.21)及细胞质/细胞核HBV pgRNA(1.01±0.01)均高于del-PREα组(0.74±0.04、0.57±0.01、0.41±0.00)、del-PREβ组(0.58±0.02、0.24±0.01、0.30±0.01)、del-PRE组(0.41±0.01、0.21±0.00、0.30±0.00)(P<0.05),del-PREα组均高于del-PREβ组、del-PRE组(P<0.05);del-PREβ组细胞、细胞质HBV pgRNA相对表达量均高于del-PRE组(P<0.05),细胞质/细胞核HBV pgRNA与del-PRE组比较差异无统计学意义(P>0.05)。del-PREα组细胞核HBV pgRNA相对表达量(1.38±0.01)均高于WT组(1.00±0.02)、del-PREβ组(0.79±0.01)、del-PRE组(0.71±0.01)(P<0.05),WT组均高于del-PREβ组、del-PRE组(P<0.05),del-PREβ组高于del-PRE组(P<0.05)。del-PRE组HBsAg蛋白相对表达量(0.66±0.00 展开更多

关键词 乙型肝炎病毒 转录后调控元件 茎环结构 核外输出 HEPG2细胞

原文传递

22R序列loop和泡突变对GFP报告基因表达的作用

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作者 王红钢 王予东 《河南大学学报（医学版）》 CAS 2011年第4期255-259,共5页

目的:我们研究室的前期工作在猴空泡病毒40(SV40)早期mRNA PolyA序列(SV40PolyA)中发现1个活化基因的原件22R(5′-GTGAAAAAAATGCTTTATTTGT-3′),该片段可以解除Alu串连序列(或Line-1重复序列)对GFP报告基因的抑制作用。我们研究22R突变... 目的:我们研究室的前期工作在猴空泡病毒40(SV40)早期mRNA PolyA序列(SV40PolyA)中发现1个活化基因的原件22R(5′-GTGAAAAAAATGCTTTATTTGT-3′),该片段可以解除Alu串连序列(或Line-1重复序列)对GFP报告基因的抑制作用。我们研究22R突变对GFP报告基因表达的作用。方法:将22R及其突变片段插入pEGFP-C1质粒,构建表达载体,瞬时转染HeLa细胞,荧光显微镜下计数观察GFP荧光阳性细胞数。结果:AAG、AGA、TGT、TTG和TGC(22R,野生型)5个质粒促进基因表达作用比较明显。VECT、VEGT、VETA、VETC、VETG和VETT明显促进GFP基因表达。结论:22Rloop和泡的突变对其活化GFP报告基因作用有重要影响。 展开更多

关键词 SV40PolyA 22R GFP 茎环结构 转染

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