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Streptoverticillium mobaraense谷氨酰胺转胺酶的表达、纯化和复性
被引量:
7
1
作者
唐名山
王树英
+1 位作者
陈坚
李华钟
《食品与发酵工业》
CAS
CSCD
北大核心
2004年第4期17-21,共5页
以基因组DNA为模板 ,利用PCR技术从茂原轮链丝菌 (Streptoverticilliummobaraense)中扩增得到产成熟谷氨酰胺转胺酶MTG的结构基因mtg ,克隆于表达载体pQE 3 0T ,构建成lac启动子控制下的His6融合表达质粒pMTG ,将此重组质粒转化到受体菌...
以基因组DNA为模板 ,利用PCR技术从茂原轮链丝菌 (Streptoverticilliummobaraense)中扩增得到产成熟谷氨酰胺转胺酶MTG的结构基因mtg ,克隆于表达载体pQE 3 0T ,构建成lac启动子控制下的His6融合表达质粒pMTG ,将此重组质粒转化到受体菌E .coliM1 5中。对质粒稳定性的研究表明 ,E .coliM1 5在无选择压的情况下 ,于 3 7℃连续转接 5次 ,质粒丢失率仅有 2 4%,说明质粒基本稳定。重组菌经IPTG诱导 ,表达的重组谷氨酰胺转胺酶占菌体总蛋白的 1 8%,经SDS PAGE分析 ,表达的蛋白质的分子质量为 3 8ku ,与预期分子质量相符。表达产物主要以包涵体的形式存在。细胞经超声破碎 ,离心取包涵体溶于 8mol/L的尿素中 ,然后通过Ni NTA亲和柱分离纯化和稀释法复性。目的蛋白的纯度可达 95 %以上。比酶活为 1 0 3U/mg。
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关键词
茂
原
轮
链
丝
菌
谷氨酰胺转胺酶
基因克隆
分离
纯化
基因重组技术
复性
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职称材料
茂原轮链丝菌谷氨酰胺转胺酶的表达、纯化和复性
2
作者
唐名山
《食品信息与技术》
2004年第7期20-20,共1页
关键词
茂
原
轮
链
丝
菌
谷氨酰胺转胺酶
基因表达
纯化
复性
PCR技术
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职称材料
题名
Streptoverticillium mobaraense谷氨酰胺转胺酶的表达、纯化和复性
被引量:
7
1
作者
唐名山
王树英
陈坚
李华钟
机构
江南大学生物工程学院
出处
《食品与发酵工业》
CAS
CSCD
北大核心
2004年第4期17-21,共5页
文摘
以基因组DNA为模板 ,利用PCR技术从茂原轮链丝菌 (Streptoverticilliummobaraense)中扩增得到产成熟谷氨酰胺转胺酶MTG的结构基因mtg ,克隆于表达载体pQE 3 0T ,构建成lac启动子控制下的His6融合表达质粒pMTG ,将此重组质粒转化到受体菌E .coliM1 5中。对质粒稳定性的研究表明 ,E .coliM1 5在无选择压的情况下 ,于 3 7℃连续转接 5次 ,质粒丢失率仅有 2 4%,说明质粒基本稳定。重组菌经IPTG诱导 ,表达的重组谷氨酰胺转胺酶占菌体总蛋白的 1 8%,经SDS PAGE分析 ,表达的蛋白质的分子质量为 3 8ku ,与预期分子质量相符。表达产物主要以包涵体的形式存在。细胞经超声破碎 ,离心取包涵体溶于 8mol/L的尿素中 ,然后通过Ni NTA亲和柱分离纯化和稀释法复性。目的蛋白的纯度可达 95 %以上。比酶活为 1 0 3U/mg。
关键词
茂
原
轮
链
丝
菌
谷氨酰胺转胺酶
基因克隆
分离
纯化
基因重组技术
复性
Keywords
transglutaminase, Streptoverticillium mobaraense, E coli, purification, refolding
分类号
TQ920 [轻工技术与工程—发酵工程]
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职称材料
题名
茂原轮链丝菌谷氨酰胺转胺酶的表达、纯化和复性
2
作者
唐名山
出处
《食品信息与技术》
2004年第7期20-20,共1页
关键词
茂
原
轮
链
丝
菌
谷氨酰胺转胺酶
基因表达
纯化
复性
PCR技术
分类号
Q936 [生物学—微生物学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
Streptoverticillium mobaraense谷氨酰胺转胺酶的表达、纯化和复性
唐名山
王树英
陈坚
李华钟
《食品与发酵工业》
CAS
CSCD
北大核心
2004
7
下载PDF
职称材料
2
茂原轮链丝菌谷氨酰胺转胺酶的表达、纯化和复性
唐名山
《食品信息与技术》
2004
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