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耐碱性木聚糖酶在短小芽孢杆菌中高效分泌表达的研究 被引量：8
1
作者 包怡红 刘伟丰 董志扬 《中国食品学报》 EI CAS CSCD 2008年第5期37-43,共7页
从木聚糖酶高产菌株BP51中克隆得到木聚糖酶基因xynA及其启动子调控序列,将其构建在芽孢杆菌表达载体pWG03中得到重组质粒pWGXYN。采用同源高效表达策略,以原生质体转化方法将pWGXYN转入短小芽孢杆菌(Bacillus pumilus)BP4756中,获得重... 从木聚糖酶高产菌株BP51中克隆得到木聚糖酶基因xynA及其启动子调控序列,将其构建在芽孢杆菌表达载体pWG03中得到重组质粒pWGXYN。采用同源高效表达策略,以原生质体转化方法将pWGXYN转入短小芽孢杆菌(Bacillus pumilus)BP4756中,获得重组菌株BPSDBY。通过诱导重组菌株中的xynA基因高效分泌表达,使木聚糖酶产酶活力比原菌株BP4756提高了20倍。此外,对重组表达的木聚糖酶的酶学性质进行了初步研究。 展开更多
关键词 木聚糖酶 短小芽孢杆菌 芽孢杆菌表达系统
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碱性α-淀粉酶基因在巨大芽孢杆菌中的表达及酶学性质研究 被引量：6
2
作者 金辉 廖思明 +2 位作者 王青艳 刘筱梦 黄日波 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第11期154-159,共6页
将已克隆的碱性α-淀粉酶基因信号肽编码序列去除,用PCR的方法加入酶切位点,然后与表达载体pHIS1525连接转化大肠杆菌DH5α,筛选出阳性转化子DH5α-pHIS1525-JH,并提取质粒进一步转化巨大芽孢杆菌YYBm1原生质体,获得基因工程菌YYBm1-pHI... 将已克隆的碱性α-淀粉酶基因信号肽编码序列去除,用PCR的方法加入酶切位点,然后与表达载体pHIS1525连接转化大肠杆菌DH5α,筛选出阳性转化子DH5α-pHIS1525-JH,并提取质粒进一步转化巨大芽孢杆菌YYBm1原生质体,获得基因工程菌YYBm1-pHIS1525-JH。SDS-PAGE分析表明该基因在巨大芽孢杆菌中得到了有效表达。酶学性质研究表明,该酶的最适温度与pH值分别为60℃与pH8.5,在pH7.0-10.5之间具有较好的稳定性,Km值为1.94 mg/mL,酶活力可达2 516.5 U。 展开更多
关键词 碱性α-淀粉酶 巨大芽孢杆菌 芽孢杆菌表达系统 基因表达 酶学性质
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耐碱性木聚糖酶基因在巨大芽孢杆菌中的表达及其酶学性质 被引量：4
3
作者 包怡红 刘伟丰 +1 位作者 何永志 董志杨 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第10期1353-1359,共7页
【目的】从耐碱性木聚糖酶高产短小芽孢杆菌中克隆得到带有自身启动子的木聚糖酶基因,将其在巨大芽孢杆菌中进行表达,并对表达产物进行性质分析。【方法】将克隆得到的木聚糖酶基因xynA以及带有自身启动子序列的结构基因,构建在芽孢杆... 【目的】从耐碱性木聚糖酶高产短小芽孢杆菌中克隆得到带有自身启动子的木聚糖酶基因,将其在巨大芽孢杆菌中进行表达,并对表达产物进行性质分析。【方法】将克隆得到的木聚糖酶基因xynA以及带有自身启动子序列的结构基因,构建在芽孢杆菌表达载体pWH1520和改造后的载体pWG03中,得到重组质粒pWTEJX和pWGXYN,分别转化到巨大芽孢杆菌BM70中,获得重组巨大芽孢杆菌BMJXH9和BMGpp12;经过诱导产酶培养,均得到分泌表达。【结论】重组巨大芽孢杆菌BMGpp12比BMJXH9产酶活力提高了3倍,重组表达的木聚糖酶的酶学性质研究表明其仍具有很好的耐碱性,这为木聚糖酶的进一步应用研究提供了重要的理论依据。 展开更多
关键词 木聚糖酶 巨大芽孢杆菌 芽孢杆菌表达系统
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大肠杆菌-枯草杆菌穿梭载体的构建及其在蛋白酶基因表达中的应用 被引量：7
4
作者 杨键 游志庆 +3 位作者 麦志茂 李洁 田新朋 张偲 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第9期146-150,共5页
利用基因重组技术,以枯草杆菌表达载体pWB980为骨架,插入大肠杆菌的克隆载体pUC18中的抗性基因和复制子,构建穿梭质粒pY980coli。将海洋细菌蛋白酶基因hspa插入pY980coli载体P43启动子下游,导入枯草杆菌WB600中,可实现活性表达。
关键词 穿梭载体 P43启动子 枯草芽孢杆菌表达系统 蛋白酶 分泌表达
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嗜热酸性普鲁兰水解酶Ⅲ的高效分泌表达及其酶学性质 被引量：4
5
作者 曾静 郭建军 袁林 《食品工业科技》 CAS 北大核心 2020年第3期98-103,109,共7页
本文探索了嗜热酸性普鲁兰水解酶ⅢTk-PUL在枯草芽孢杆菌表达系统中的高效分泌表达条件,并对重组Tk-PUL的酶学性质进行了初步研究。通过构建Tk-PUL分泌表达信号肽筛选库,并结合高通量筛选方法,确定引导Tk-PUL在枯草芽孢杆菌中高效分泌... 本文探索了嗜热酸性普鲁兰水解酶ⅢTk-PUL在枯草芽孢杆菌表达系统中的高效分泌表达条件,并对重组Tk-PUL的酶学性质进行了初步研究。通过构建Tk-PUL分泌表达信号肽筛选库,并结合高通量筛选方法,确定引导Tk-PUL在枯草芽孢杆菌中高效分泌表达的信号肽。结果表明,在信号肽AmyE的引导下,重组Tk-PUL在枯草芽孢杆菌表达系统中高效分泌表达。Tk-PUL属于单结构域双功能酶,同时具有α-淀粉酶活性和普鲁兰酶活性。重组Tk-PUL的α-淀粉酶活性的最适反应pH为4.5,最适反应温度为100℃,对应的绝对酶活为54.08 U/mg,于100℃的半衰期约为2 h。重组Tk-PUL的普鲁兰酶活性的最适反应pH为4.5,最适反应温度为100℃,对应的绝对酶活为110.39 U/mg,于100℃的半衰期约为2 h。本研究为Tk-PUL在淀粉酶法制糖工业中的应用奠定了基础。 展开更多
关键词 普鲁兰水解酶Ⅲ 双功能酶 枯草芽孢杆菌表达系统 分泌表达 酶学性质
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嗜热内切-1,4-β-木聚糖酶在枯草杆菌中的表达及酶学性质 被引量：2
6
作者 郑春阳 刘珺 +1 位作者 魏国祥 王磊 《食品与生物技术学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第12期1333-1337,共5页
首先根据Thermopolyspora flexuosa的内切-1,4-β-木聚糖酶基因设计了引物,PCR扩增成功后进行酶切消化,连接载体质粒pHT43,经大肠杆菌DH5α扩增后,挑选阳性克隆,经菌体PCR及测序验证后,将基因序列测序正确的质粒大量抽提,经过转化导入... 首先根据Thermopolyspora flexuosa的内切-1,4-β-木聚糖酶基因设计了引物,PCR扩增成功后进行酶切消化,连接载体质粒pHT43,经大肠杆菌DH5α扩增后,挑选阳性克隆,经菌体PCR及测序验证后,将基因序列测序正确的质粒大量抽提,经过转化导入枯草芽孢杆菌Bacillus subtilius WB800N宿主,培养并经过1 mmol/L IPTG诱导表达后,发酵胞外上清经SDS-PAGE电泳证明重组蛋白质成功获得表达。其相对分子质量为27 kD,最适反应温度为80℃,最适反应pH为6.0。由此得知,分泌表达的嗜热内切-1,4-β-木聚糖酶的枯草芽孢杆菌工程菌株构建成功,这为未来该酶的产业化生产奠定了基础。 展开更多
关键词 枯草芽孢杆菌表达系统 分泌表达 耐高温嗜热内切-1 4-β-木聚糖酶
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