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桑树花青素还原酶基因MaANR的克隆和表达分析 被引量:14
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作者 李军 梁燕梅 +4 位作者 赵爱春 刘长英 吕蕊花 刘晓清 余茂德 《蚕业科学》 CAS CSCD 北大核心 2016年第4期570-575,共6页
花青素还原酶(ANR)是原花青素单体生物合成过程中的关键酶之一,对花青素在植物组织中的积累有重要调控作用。通过检索川桑(Morus notabilis)基因组数据库鉴定获得了ANR候选基因序列,并以人工四倍体果桑品种嘉陵30号的桑椹c DNA为模板克... 花青素还原酶(ANR)是原花青素单体生物合成过程中的关键酶之一,对花青素在植物组织中的积累有重要调控作用。通过检索川桑(Morus notabilis)基因组数据库鉴定获得了ANR候选基因序列,并以人工四倍体果桑品种嘉陵30号的桑椹c DNA为模板克隆了ANR基因(Ma ANR),其CDS序列长1 014 bp,编码337个氨基酸残基。聚类分析结果表明Ma ANR与草莓、西洋梨的花青素还原酶Fa ANR和Pc ANR的亲缘关系较近。实时荧光定量PCR检测Ma ANR在桑椹中的表达量最高,在桑树其他部位和组织中的表达量极低,在茎中几乎检测不到表达;Ma ANR在生长发育早期的桑椹中表达量较低,在快速生长过程的桑椹中高量表达,而在花青素大量合成的桑椹成熟时期表达量极低。初步推测Ma ANR可能是桑椹中花青素积累的重要负调控因子。 展开更多
关键词 桑树 花青素还原酶 基因克隆 表达模式 桑椹 发育时期
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红花花青素还原酶基因ANR的克隆及表达分析 被引量:11
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作者 鲁丹丹 谭政委 +5 位作者 李磊 余永亮 许兰杰 杨红旗 董薇 梁慧珍 《核农学报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第3期517-526,共10页
花青素还原酶(ANR)是类黄酮代谢途径下游合成原花青素的关键酶,对花青素含量有一定的负调控作用。为探索ANR基因在红花(Carthamus tinctorius L.)中的序列特征及其与红花花色的关系,采用反转录PCR方法从红花中克隆ANR基因,对其进行生物... 花青素还原酶(ANR)是类黄酮代谢途径下游合成原花青素的关键酶,对花青素含量有一定的负调控作用。为探索ANR基因在红花(Carthamus tinctorius L.)中的序列特征及其与红花花色的关系,采用反转录PCR方法从红花中克隆ANR基因,对其进行生物信息学和系统进化分析,并检测了其在不同花色红花品种的不同组织部位及不同花期的表达量。结果表明,CtANR最长开放阅读框(ORF)为1020 bp,编码339个氨基酸,分子量为37958.28,理论等电点为5.87,为不稳定的亲水性蛋白,属于NADB-Rossmann超家族,二级结构主要由α-螺旋和无规卷曲组成。CtANR和刺菜蓟ANR的同源性最高,为83.98%,与刺菜蓟ANR的亲缘关系最近,与梅花、欧洲甜樱桃ANR的亲缘关系较远,模体基序相差较大。定量分析表明,红色和白色红花品种中,CtANR基因都是在果球形成初期表达量最低,其次是根和茎中表达量较低,而在花中的表达量相对较高。在花发育的不同时期,红色红花品种中CtANR基因的表达呈现降低-升高-降低的趋势,而白色红花品种中CtANR基因的表达呈现降低-升高的趋势。在不同花色的红花品种中,CtANR基因的表达量在花发育的S1、S3和S5时期差异极显著(P<0.01),S4、苞片、根、叶中差异显著(P<0.05),其他时期与其他组织中差异不显著。本研究为解析红花类黄酮生物合成的分子机制及红花花色相关基因的研究提供了理论基础。 展开更多
关键词 红花 花青素还原酶 ANR 基因克隆 表达分析
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茶树花青素还原酶基因在大肠杆菌中的表达及优化 被引量:7
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作者 骆洋 王弘雪 +7 位作者 王云生 卢忠尉 刘亚军 单育 陈啸天 叶辉 高丽萍 夏涛 《茶叶科学》 CAS CSCD 北大核心 2011年第4期326-332,共7页
茶树花青素还原酶是催化非酯型儿茶素EC和EGC合成的关键酶。采用RT-PCR技术,获得了茶树花青素还原酶基因的开放阅读框,它编码含337个氨基酸的蛋白质,推测分子量为37 kD,等电点为6.54;成功地将该基因重组到表达载体pET32a(+)上,并在大肠... 茶树花青素还原酶是催化非酯型儿茶素EC和EGC合成的关键酶。采用RT-PCR技术,获得了茶树花青素还原酶基因的开放阅读框,它编码含337个氨基酸的蛋白质,推测分子量为37 kD,等电点为6.54;成功地将该基因重组到表达载体pET32a(+)上,并在大肠杆菌rosetta中进行原核表达;优化了原核表达中诱导时间、诱导温度、IPTG浓度、氨苄青霉素浓度,纯化出目的蛋白。HPLC检测表明,目的蛋白具有ANR酶活性。 展开更多
关键词 茶树 花青素还原酶 原核表达 活性
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红花CtANR2和CtANR3基因的克隆、结构及表达模式分析 被引量:2
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作者 鲁丹丹 谭政委 +7 位作者 余永亮 李磊 许兰杰 杨红旗 杨青 董薇 安素妨 梁慧珍 《华北农学报》 CSCD 北大核心 2023年第1期84-93,共10页
原花青素是植物中广泛存在的一类黄酮类化合物,是人类膳食的重要营养成分,在防治病虫害方面也发挥着重要作用,花青素还原酶(ANR)是合成原花青素的关键酶。以大果球红花品种为材料,克隆得到2个CtANR基因。生物信息学分析表明,CtANR2和CtA... 原花青素是植物中广泛存在的一类黄酮类化合物,是人类膳食的重要营养成分,在防治病虫害方面也发挥着重要作用,花青素还原酶(ANR)是合成原花青素的关键酶。以大果球红花品种为材料,克隆得到2个CtANR基因。生物信息学分析表明,CtANR2和CtANR3的编码区分别为1020,1023 bp,对应基因组序列中均含有5个外显子和4个内含子,第1个外显子长度不同,其余4个外显子长度一致,内含子长度差异较大。CtANR2和CtANR3基因编码蛋白质的氨基酸数目分别为339,340个,二级结构都主要由α-螺旋和无规则卷曲构成,都属于水溶性蛋白,但CtANR2蛋白不稳定,而CtANR3为稳定的亲水性蛋白。此外,2个蛋白质都不存在信号肽和跨膜结构,可能定位于细胞外。序列比对及系统进化分析表明,CtANR2和CtANR1同源性最高,亲缘关系最近,3个CtANR蛋白与菊科植物ANR蛋白进化关系最近,与茄科、锦葵科和桑科植物ANR蛋白也同属一个大分支。组织特异性表达分析发现,CtANR2和CtANR1组织表达模式相似,都是在花中的表达量最高,初期果球表达量最低,而CtANR3则在苞片中表达量最高,根和初期果球中表达量最低。三者在不同激素胁迫下呈现出不同的表达模式,CtANR2和CtANR1在不同激素处理后表达量均下降,而CtANR3在5种激素处理后表达量均有不同程度的升高。以上结果表明,红花3个CtANR基因可能在红花不同发育阶段及抵抗非生物胁迫中有不同的分工。 展开更多
关键词 红花 花青素还原酶 基因克隆 基因结构 表达模式
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中国沙棘HrANR基因及黄酮类累积与抗旱的关系
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作者 刘瑞 赵浪 +1 位作者 冶贵生 马玉花 《广西植物》 CAS CSCD 北大核心 2024年第2期235-244,共10页
花青素还原酶(anthocyanidin reductase,ANR)是合成黄酮类物质的关键酶之一,为明确其编码基因结构及干旱胁迫下的表达模式和黄酮类物质含量及二者之间的相关性,该文从中国沙棘转录组数据中筛选获得1个ANR基因,命名为HrANR基因。采用生... 花青素还原酶(anthocyanidin reductase,ANR)是合成黄酮类物质的关键酶之一,为明确其编码基因结构及干旱胁迫下的表达模式和黄酮类物质含量及二者之间的相关性,该文从中国沙棘转录组数据中筛选获得1个ANR基因,命名为HrANR基因。采用生物信息学软件对基因序列及编码蛋白进行分析,并对不同胁迫下各组织中HrANR基因的表达量和叶中黄酮类化合物含量进行相关性分析。结果表明:(1)中国沙棘HrANR基因ORF为1017 bp,编码338个氨基酸,为稳定的亲水性蛋白,其ANR同源蛋白具有明显的科属特性。(2)干旱胁迫下HrANR基因在中国沙棘根、茎、叶中均有表达,但表达趋势不同,其中在根中的表达呈先升高后降低再升高的趋势,在茎中呈持续下降的趋势,在叶中呈先升高后持续降低的趋势。(3)通过芦丁标准曲线获得不同胁迫程度下中国沙棘叶内黄酮类的含量,表明黄酮类含量呈先持续上升,随后略有下降,复水后上升至最高点的变化趋势,表明干旱胁迫初期叶黄酮类含量与干旱胁迫呈正相关,在严重胁迫下黄酮类含量与胁迫呈负相关。(4)叶和茎的HrANR基因表达量与黄酮类含量呈负相关(P_(叶)=-0.751,P_(茎)=-0.934),根中呈正相关(P_(根)=0.444)。综上表明,中国沙棘HrANR基因的表达及黄酮类含量变化与其抗旱性密切相关,其结果为中国沙棘抗旱机制的阐明提供了依据。 展开更多
关键词 中国沙棘 花青素还原酶 干旱胁迫 表达模式 黄酮类
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苗药艾纳香花青素还原酶基因的克隆及其生物信息学分析 被引量:5
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作者 鞠志刚 蒋梦星 +3 位作者 王文斌 缪艳燕 杨芳芳 陈晓兰 《分子植物育种》 CAS CSCD 北大核心 2018年第22期7270-7274,共5页
花青素还原酶(anthocyanidin reductase, ANR)是植物原花青素合成代谢途径中的关键酶之一,对植物类黄酮类物质的合成有重要作用。本研究以黔产艾纳香叶片为材料,根据其转录组测序结果,通过RT-PCR方法成功克隆得到艾纳香ANR基因的全长c ... 花青素还原酶(anthocyanidin reductase, ANR)是植物原花青素合成代谢途径中的关键酶之一,对植物类黄酮类物质的合成有重要作用。本研究以黔产艾纳香叶片为材料,根据其转录组测序结果,通过RT-PCR方法成功克隆得到艾纳香ANR基因的全长c DNA序列。随后,利用生物信息学在线工具对该ANR基因所编码蛋白的生理和化学参数、功能结构域、亲/疏水性、信号肽、二/三级结构等进行了相关预测和分析。分析结果表明,该基因cDNA全长为978 bp,编码氨基酸326个,所编码蛋白分子量为36.30 kD,等电点为5.83,为亲水性蛋白,不含信号肽序列。 展开更多
关键词 艾纳香 花青素还原酶 基因克隆 生物信息学
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不同品种忍冬ANR基因克隆、表达模式及原核表达分析 被引量:1
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作者 余永亮 鲁丹丹 +9 位作者 谭政委 杨红旗 李磊 许兰杰 杨青 董薇 安素妨 郭水柱 高松 梁慧珍 《药学学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第11期3449-3460,共12页
花青素还原酶(anthocyanidin reductase,ANR)是黄酮合成途径中的关键酶,该酶的催化活性对花青素含量有重要的调控作用。本研究根据忍冬转录组数据,设计特异性引物,克隆忍冬和红白忍冬ANR基因的CDS、gDNA及启动子序列。结果表明,从忍冬... 花青素还原酶(anthocyanidin reductase,ANR)是黄酮合成途径中的关键酶,该酶的催化活性对花青素含量有重要的调控作用。本研究根据忍冬转录组数据,设计特异性引物,克隆忍冬和红白忍冬ANR基因的CDS、gDNA及启动子序列。结果表明,从忍冬和红白忍冬克隆得LjANR和rLjANR的CDS序列均为1002 bp,gDNA序列分别为2017和2026 bp,启动子序列分别为1170和1164 bp。LjANR和rLjANR均含有6个外显子和5个内含子,外显子长度一致,内含子差异较大,二者启动子序列中均含有大量光响应、激素应答、非生物胁迫应答元件。生物信息学分析发现,LjANR和rLjANR均编码333个氨基酸,均为稳定的疏水性蛋白,无跨膜结构,无信号肽,二级结构主要由α-螺旋和无规卷曲组成。序列比对及系统进化分析表明,LjANR和rLjANR蛋白与猕猴桃、茶树、油茶聚为一类,亲缘关系较近。qRT-PCR分析发现,LjANR和rLjANR均在花蕾中表达量最高,根中表达量最低,不同花期的表达量变化模式相似,S1和S2期表达量较高,然后表达量逐渐下降,至S4期达到最低,之后在S5期有一个缓慢的上升后表达量再次下降,两个品种中ANR基因的表达量在根、S2、S5期差异显著,茎、花蕾、S1、S3、S6期差异极显著。将LjANR基因构建到原核表达载体pET-32a上进行诱导表达,在59 kD处成功表达出目的蛋白。该研究为进一步研究ANR基因的功能奠定了基础,同时也为忍冬新品种的选育提供理论指导。 展开更多
关键词 忍冬 花青素还原酶 基因克隆 表达模式 原核表达
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Characterization of proanthocyanin-related leucoanthocyanidin reductase and anthocyanidin reductase genes in Lycium ruthenicum Murr. 被引量:3
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作者 沈笑飞 曾少华 +2 位作者 吴敏 刘春朝 王瑛 《Journal of Chinese Pharmaceutical Sciences》 CAS CSCD 2014年第6期369-377,共9页
Proanthocyanidins (PAs) are a set of important phytochemical compounds in Lycium ruthenicum Murr. However, PAbiosynthesis in L. ruthenicum remains unclear. In this study, leucoanthocyanidin reductase (LAR) and ant... Proanthocyanidins (PAs) are a set of important phytochemical compounds in Lycium ruthenicum Murr. However, PAbiosynthesis in L. ruthenicum remains unclear. In this study, leucoanthocyanidin reductase (LAR) and anthocyanidin reductases(ANR) involved in PA biosynthesis were retrieved from L. ruthenicum EST database. Polymerase chain reaction (PCR) resultsconfirmed that LrLAR and LrANR encoded a protein composed of 333 and 338 amino acids, respectively. Phylogenetic analysisshowed that LrLAR and LrANR were clustered with known LAR and ANR proteins of other plants, respectively. Quantitativereverse-transcription PCR (qRT-PCR) results indicated that both genes expressed in a sharp increase manner from unripe stage tocolor break stage and were down-regulated increasingly hereafter, and that both expression levels are extremely low in youngleaves, mature leaves, stems, and roots compared with fruits. Phytochemical assay revealed that the content of total PA in fruitwas higher than that in young leaves, mature leaves, stems, and roots, and that the total PA level was increased sharply andthen relatively stable hereafter during fruit ripening. Our results lay a foundation for uncovering the PA biosynthesis and furtherengineering manipulation in L. ruthenicum. 展开更多
关键词 ANR LAR Lycium ruthenicurn Proanthocyanidin
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茶树ANR基因家族的全基因组鉴定与分析
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作者 段丽丽 李魁印 《贵州大学学报(自然科学版)》 2023年第2期47-54,共8页
花青素还原酶(anthocyanidin reductase,ANR)是原花青素生物合成途径中的关键酶之一,同时,ANR通过调节植物不同组织中花青素的积累影响植物对光的吸收程度和叶面温度,提高茶树的防御力和对环境的适应性。利用生物信息学分析方法,从‘舒... 花青素还原酶(anthocyanidin reductase,ANR)是原花青素生物合成途径中的关键酶之一,同时,ANR通过调节植物不同组织中花青素的积累影响植物对光的吸收程度和叶面温度,提高茶树的防御力和对环境的适应性。利用生物信息学分析方法,从‘舒茶早’基因组数据中鉴定出茶树ANR基因家族成员,并分析ANR家族成员的基因结构、蛋白理化性质、保守基序及顺势作用元件。结果表明,CsANR家族有21个成员,分为7类,含有多个保守基序,编码287~627个氨基酸,其中,有15个蛋白为亲水性蛋白,6个为疏水性蛋白。对CsANR家族基因的顺势作用元件分析表明CsANR家族含有光响应、防御和胁迫响应、植物激素响应(茉莉酸甲酯、生长素、脱落酸及赤霉素)和低温响应元件,说明该基因家族可能在参与植物生长发育及应对胁迫中发挥作用,本研究结果可为茶树ANR基因功能研究提供依据。 展开更多
关键词 茶树 花青素还原酶 基因家族 鉴定 分析
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茶树花青素还原酶的酶学特性研究 被引量:4
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作者 杨琴 赵磊 +4 位作者 刘亚军 刘莉 王云生 高丽萍 夏涛 《茶叶科学》 CAS CSCD 北大核心 2013年第3期221-228,共8页
茶树花青素还原酶(CsANR)作为原花青素生物合成途径中的关键酶,催化花青素为相应的2,3-顺式-黄烷-3-醇。为了研究该酶的酶学特性,本文采用原核表达及钴离子亲和柱纯化技术,表达并纯化出目的蛋白;重点对CsANR1酶学特性进行研究分析。结... 茶树花青素还原酶(CsANR)作为原花青素生物合成途径中的关键酶,催化花青素为相应的2,3-顺式-黄烷-3-醇。为了研究该酶的酶学特性,本文采用原核表达及钴离子亲和柱纯化技术,表达并纯化出目的蛋白;重点对CsANR1酶学特性进行研究分析。结果表明,CsANR1的最适反应温度为40℃,最适pH值为6.5;对底物矢车菊色素的亲和力高于飞燕草色素。Cu2+、Co2+、Fe2+、Mn2+、Zn2+和Hg2+等金属离子对酶有抑制作用,存放15d后酶活下降50%。 展开更多
关键词 茶树 花青素还原酶 原核表达 学特性
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香椿TsANR基因的克隆及在温度胁迫下的表达分析 被引量:3
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作者 隋娟娟 杨京霞 +3 位作者 胡新 董新月 舒生 姬云涛 《阜阳师范大学学报(自然科学版)》 2021年第1期57-61,共5页
花青素还原酶是调控原花青素形成的关键酶之一,该酶对花青素的积累具有重要调控作用。从香椿中克隆得到一个花青素还原酶基因,命名为TsANR。基因序列注册到GenBank中,登录号为MT629925。TsANR基因开放阅读框有1011 bp核苷酸组成,共编码... 花青素还原酶是调控原花青素形成的关键酶之一,该酶对花青素的积累具有重要调控作用。从香椿中克隆得到一个花青素还原酶基因,命名为TsANR。基因序列注册到GenBank中,登录号为MT629925。TsANR基因开放阅读框有1011 bp核苷酸组成,共编码336个氨基酸,编码的蛋白分子量为36.451 kD,属于酸性亲水性蛋白。系统进化树分析表明TsANR蛋白与同为无患子目的阿月浑子ANR蛋白亲缘关系最近。荧光定量试验结果表明:TsANR基因在香椿幼苗叶中的相对表达量最高,4℃低温处理24 h内,Ts ANR基因表达量在4 h后,表达量显著低于对照水平;在38℃高温处理24 h内,TsANR基因表达量在1 h时表达量显著增加,随后在2 h后表达恢复至对照水平。 展开更多
关键词 香椿 花青素还原酶 TsANR基因 基因表达
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银杏类黄酮合成关键基因的鉴定和GbANR2的基因的克隆 被引量:1
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作者 季雅菲 《农业技术与装备》 2022年第4期64-66,共3页
类黄酮是银杏中重要的一类次生代谢产物,有着重要的药用价值。花青素还原酶作为类黄酮合成途径中的关键酶,对银杏中类黄酮的含量及叶色的变化具有重要调控作用。文章基于公共数据库中126个银杏转录组数据,对银杏类黄酮合成途径中的48个... 类黄酮是银杏中重要的一类次生代谢产物,有着重要的药用价值。花青素还原酶作为类黄酮合成途径中的关键酶,对银杏中类黄酮的含量及叶色的变化具有重要调控作用。文章基于公共数据库中126个银杏转录组数据,对银杏类黄酮合成途径中的48个结构基因进行共表达分析,鉴定出类黄酮合成途径中的12个核心基因。进一步对其中一个核心基因GbANR2进行了克隆,并分析了其基因结构、染色体位置、蛋白质结构,以及在不同组织中的表达。 展开更多
关键词 银杏 类黄酮 基因克隆 基因共表达分析 花青素还原酶
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茶树单体和聚合态儿茶素生物合成的研究进展 被引量:5
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作者 刘亚军 王培强 +3 位作者 蒋晓岚 庄菊花 高丽萍 夏涛 《茶叶科学》 CAS CSCD 北大核心 2022年第1期1-17,共17页
儿茶素类化合物,主要包括单体儿茶素和聚合态儿茶素,是茶树(Camellia sinensis)多酚主要组成部分,是绿茶"茶味"决定性成分。茶树儿茶素类化合物合成与积累具有显著的组织器官特异性,鲜叶中主要积累单体儿茶素,根中以积累聚合... 儿茶素类化合物,主要包括单体儿茶素和聚合态儿茶素,是茶树(Camellia sinensis)多酚主要组成部分,是绿茶"茶味"决定性成分。茶树儿茶素类化合物合成与积累具有显著的组织器官特异性,鲜叶中主要积累单体儿茶素,根中以积累聚合态儿茶素为主。类黄酮代谢途径下游的无色花青素还原酶(LAR)和花青素还原酶(ANR)是决定茶树儿茶素类化合物类型的关键酶类。本文主要综述了茶树儿茶素类化合物合成、积累、转录调控研究进展,重点关注LAR、ANR以及无色花青素双加氧酶(LODX)功能和基因转录调控的最新研究进展,并对儿茶素合成途径待解决问题提出了自己的观点。 展开更多
关键词 儿茶素 花青素 无色花青素还原酶 花青素还原酶 无色花青素双加氧
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甘肃红豆草无色花青素还原酶LAR基因的克隆和表达分析 被引量:7
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作者 陈春艳 马晖玲 董文科 《草业学报》 CSCD 北大核心 2015年第6期177-187,共11页
以甘肃红豆草为材料,采用RT-PCR法克隆无色花青素还原酶LAR基因,分析该功能基因在甘肃红豆草不同器官表达的差异性。结果表明,克隆的甘肃红豆草LAR基因,与Gen Bank已报道LAR基因(登录号:HM152981)序列相似性达到98.34%,其ORF长为1089 bp... 以甘肃红豆草为材料,采用RT-PCR法克隆无色花青素还原酶LAR基因,分析该功能基因在甘肃红豆草不同器官表达的差异性。结果表明,克隆的甘肃红豆草LAR基因,与Gen Bank已报道LAR基因(登录号:HM152981)序列相似性达到98.34%,其ORF长为1089 bp,编码362个氨基酸残基;其编码的氨基酸序列与不同属豆科物种的相似性存在较大的差异。基因序列已注册到Gen Bank,序列登录号为KP013623。LAR基因在甘肃红豆草不同器官表达差异较大;其中叶中表达量最高,其次是花和果,茎中表达量最低,这与器官间缩合单宁含量的变化规律一致。推测其表达与甘肃红豆草缩合单宁器官间的积累差异有关。这些研究结果也为探索缩合单宁积累和表达调控的机制提供基础。 展开更多
关键词 甘肃红豆草 RT-PCR 无色花青素还原酶 克隆与表达
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桑树花青素合成相关基因MaLAR和MaUGAT的克隆与表达分析 被引量:2
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作者 曾益春 刘刚 +7 位作者 代洁 刘江 危玲 朱洪庆 佟万红 黄盖群 姚永权 郑继川 《蚕业科学》 CAS CSCD 北大核心 2023年第5期385-394,共10页
无色花青素还原酶(leucoanthocyanidin reductase,LAR)是催化无色花青素转化为儿茶素的一个关键酶,是植物类黄酮生物合成路径中的一个下游酶,可抑制无色花青素在花青素合成酶(anthocyanidin synthase,ANS)的催化下转化为花青素;花青素⁃3... 无色花青素还原酶(leucoanthocyanidin reductase,LAR)是催化无色花青素转化为儿茶素的一个关键酶,是植物类黄酮生物合成路径中的一个下游酶,可抑制无色花青素在花青素合成酶(anthocyanidin synthase,ANS)的催化下转化为花青素;花青素⁃3⁃O⁃葡萄糖苷⁃2⁃O⁃葡萄糖醛酸转移酶(cyanidin⁃3⁃O⁃glucoside 2⁃O⁃glucuronosyltransferase,UGAT)是植物花青素生物合成路径中一个关键酶,其催化花青素⁃3⁃O⁃葡萄糖苷转化为花青素3⁃O⁃(2⁃O⁃β⁃D⁃葡萄糖醛酸基)⁃β⁃D⁃葡萄糖苷,使得无色花青素最终转化为稳定的花色苷物质而累积在果实中。通过与川桑(Morus notabilis)基因组数据库进行比对鉴定到了MaLAR和MaUGAT基因,并以粤椹大10与和田白桑的桑椹cDNA为模板克隆了MaLAR和MaUGAT基因。聚类分析结果表明粤椹大10 MaLAR与甜樱桃(Prunus avium)亲缘关系较近,和田白桑MaLAR与川桑亲缘关系较近;粤椹大10 MaUGAT与和田白桑MaUGAT均与川桑亲缘关系较近,均属于蔷薇目。实时荧光定量PCR检测表明MaLAR在和田白桑桑椹S1—S3阶段的表达水平均高于粤椹大10;而MaUGAT则在粤椹大10桑椹S2—S3阶段中表达水平显著高于和田白桑。研究表明MaLAR在桑树花青素合成途径中可能起负调控作用,而MaUGAT在桑树花青素合成途径中可能起正调控作用。 展开更多
关键词 桑树 无色花青素还原酶 花青素⁃3⁃O⁃葡萄糖苷⁃2⁃O⁃葡萄糖醛酸转移 基因克隆 表达分析
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芒果ANR基因的克隆及其表达分析 被引量:5
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作者 李先良 赵志常 +4 位作者 高爱平 陈业渊 黄建峰 党志国 罗睿雄 《江苏农业科学》 北大核心 2017年第4期22-25,共4页
花青素还原酶(anthocyanidin reductase,简称ANR)基因是植物产生原花青素的关键基因,对于研究原花青素的代谢有重要的作用。根据已经报道的ANR基因的序列设计兼并引物,采用3'c DNA末端快速扩增(3'RACE)、5'c DNA末端快速扩... 花青素还原酶(anthocyanidin reductase,简称ANR)基因是植物产生原花青素的关键基因,对于研究原花青素的代谢有重要的作用。根据已经报道的ANR基因的序列设计兼并引物,采用3'c DNA末端快速扩增(3'RACE)、5'c DNA末端快速扩增(5'RACE)方法,从芒果果实内克隆到1个ANR基因,其全长c DNA序列为1 201 bp。该基因开放阅读框为1 008 bp,编码335个氨基酸,等电点为5.41,分子量为36.33 ku。对基因组扩增得到了1 810 bp长度的片段,分析发现,该基因含有5个内含子,内含子位置分别为130~646 bp、733~814 bp、1 017~1 080 bp、1 259~1 349 bp、1 563~1 651 bp。通过系统发育树分析发现,该基因编码的蛋白与可可、葡萄等果树具有较近的亲缘关系。对不同芒果品种中ANR基因的表达进行分析发现,该基因在绿色的桂七品种中表达量较高,而在红色的贵妃品种中表达量较低。 展开更多
关键词 芒果 花青素 花青素还原酶(ANR) 基因克隆 表达分析
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不同植物无色花青素还原酶及其基因的生物信息学分析 被引量:4
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作者 李蒙 鲍锋 《江西农业学报》 CAS 2017年第9期5-9,共5页
对9种不同植物的无色花青素还原酶及其基因进行生物信息学分析,探索该蛋白的结构并预测LAR的功能。通过生物信息学软件对Gen Bank中已经登录的不同植物LAR基因和氨基酸序列进行分析,对其组成成分、理化性质、翻译后修饰位点、功能域、... 对9种不同植物的无色花青素还原酶及其基因进行生物信息学分析,探索该蛋白的结构并预测LAR的功能。通过生物信息学软件对Gen Bank中已经登录的不同植物LAR基因和氨基酸序列进行分析,对其组成成分、理化性质、翻译后修饰位点、功能域、二级结构、亚细胞定位、分子进化等进行预测和推断。结果表明,9种植物无色花青素还原酶基因全长在1.0~1.2 kb,编码342~391个氨基酸,不具有信号肽;9种植物LAR都具有蛋白激酶C磷酸化位点、酪蛋白激酶Ⅱ磷酸化位点和N-端肉豆蔻酰化位点,个别植物LAR具有N-端糖基化位点、酪氨酸激酶磷酸化位点和c AMP和c GMP依赖蛋白激酶磷酸化位点;二级结构以α螺旋和无规则卷曲为主;进化分析表明禾本科的玉米与其他科植物亲缘关系较远。 展开更多
关键词 无色花青素还原酶 生物信息学 结构预测 功能分析
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CPB-LAR-GFP表达载体的构建及其在紫花苜蓿愈伤组织中的表达 被引量:4
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作者 陈春艳 马晖玲 +2 位作者 董文科 杨江伟 李玉珠 《草原与草坪》 CAS CSCD 2017年第1期25-30,共6页
以无色花青素还原酶编码基因LAR为靶序列,构建携带绿色荧光蛋白GFP和抗除草剂bar基因的双标记选择植物表达载体,通过农杆菌介导法对紫花苜蓿进行遗传转化,经PCR检测和PPT筛选出抗性愈伤组织,转基因紫花苜蓿愈伤组织的缩合单宁含量比对照... 以无色花青素还原酶编码基因LAR为靶序列,构建携带绿色荧光蛋白GFP和抗除草剂bar基因的双标记选择植物表达载体,通过农杆菌介导法对紫花苜蓿进行遗传转化,经PCR检测和PPT筛选出抗性愈伤组织,转基因紫花苜蓿愈伤组织的缩合单宁含量比对照高30.8%。试验证明重组基因已转化至紫花苜蓿愈伤组织中并发挥生理功能,为研究缩合单宁合成与代谢的分子调控机制和培育具有抗除草剂和抗臌胀病的牧草新品种奠定基础。 展开更多
关键词 甘肃红豆草 无色花青素还原酶 抗除草剂 绿色荧光蛋白 紫花苜蓿 转化
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油茶花青素还原酶基因克隆和体外功能研究 被引量:3
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作者 黄贝 李龙宝 +5 位作者 吴信洁 何周 陈子怡 姚芳 杨华 宛晓春 《茶业通报》 2018年第2期71-76,共6页
花青素还原酶(ANR)是催化花青素还原形成单体儿茶素的关键酶。油茶(Camellia oleifera Abel.)属于山茶科山茶属植物,其花青素还原酶基因尚未被克隆和功能分析。本研究采用RT-PCR技术,克隆获得了两条油茶花青素还原酶基因的全长序列,CoA... 花青素还原酶(ANR)是催化花青素还原形成单体儿茶素的关键酶。油茶(Camellia oleifera Abel.)属于山茶科山茶属植物,其花青素还原酶基因尚未被克隆和功能分析。本研究采用RT-PCR技术,克隆获得了两条油茶花青素还原酶基因的全长序列,CoANR1基因全长1441bp,开放阅读框(ORF)长度为1047bp,编码348个氨基酸残基,与茶树ANR1基因的蛋白序列同源性为97%;CoANR2基因全长1413bp,ORF框长度为1014bp,编码337个氨基酸残基,与茶树ANR2基因的蛋白序列同源性为99%。采用大肠杆菌表达方法获得CoANR1和CoANR2重组蛋白,纯化蛋白经体外酶活检测能够催化矢车菊色素合成儿茶素(C)和表儿茶素(EC),催化飞燕草色素合成没食子儿茶素(GC)和没食子表儿茶素(EGC)。本研究为进一步研究油茶儿茶素合成的分子机制提供了重要的研究基础和理论依据。 展开更多
关键词 油茶 儿茶素 花青素还原酶基因 克隆和表达 活检测
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多穗柯无色花青素还原酶基因的克隆及其表达与根皮苷含量的相关性分析 被引量:2
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作者 朱金丽 王卓 +3 位作者 王志焱 张妍彤 黄剑 邢朝斌 《中草药》 CAS CSCD 北大核心 2020年第12期3292-3297,共6页
目的克隆多穗柯Lithocarpus polystachyus的无色花青素还原酶(leucoanthocyanidin reductase,LAR)基因,并对其表达量与根皮苷含量的关系进行分析。方法根据多穗柯转录组测序的结果(Unigene号:DN30711_c0_g1_i1),利用PCR法扩增获得多穗柯... 目的克隆多穗柯Lithocarpus polystachyus的无色花青素还原酶(leucoanthocyanidin reductase,LAR)基因,并对其表达量与根皮苷含量的关系进行分析。方法根据多穗柯转录组测序的结果(Unigene号:DN30711_c0_g1_i1),利用PCR法扩增获得多穗柯LAR基因的全长cDNA序列,进行生物信息学分析,采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法检测LAR基因的表达量,使用UPLC法测定根皮苷的含量,应用SPSS 18.0软件分析LAR基因表达量与根皮苷含量间的相关关系。结果多穗柯LAR基因的cDNA全长1053 bp,包含一个完整的开放阅读框,编码350个氨基酸。该蛋白不存在跨膜区域,定位于细胞质中。多穗柯LAR蛋白属于PCBER_SDR_a家族,与栓皮栎LAR蛋白具有较高的相似性(95%),且亲缘关系最近。多穗柯的根皮苷含量与LAR基因的表达量呈正相关(P<0.05)关系。结论首次克隆得到多穗柯LAR基因,并证实多穗柯根皮苷含量与LAR基因的表达量呈正相关,为揭示多穗柯中根皮苷的生物合成机制奠定理论和技术基础。 展开更多
关键词 多穗柯 无色花青素还原酶 克隆 根皮苷 表达
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