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郁金香花青素合成酶基因TgANS的克隆与功能鉴定 被引量：3
1
作者 黄玲 胡先梅 +3 位作者 梁泽慧 王艳平 产祝龙 向林 《园艺学报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第9期1935-1944,共10页
以红色的郁金香品种‘纯火’为材料,采用高效液相色谱技术对其4个花期的花青素苷含量进行了测定,结果表明,随着花朵的发育,花青素苷的含量逐渐升高,在盛开期含量最高,达3 002.75μg·g^(-1) FW。从花中克隆出结构基因Tg ANS,GenBan... 以红色的郁金香品种‘纯火’为材料,采用高效液相色谱技术对其4个花期的花青素苷含量进行了测定,结果表明,随着花朵的发育,花青素苷的含量逐渐升高,在盛开期含量最高,达3 002.75μg·g^(-1) FW。从花中克隆出结构基因Tg ANS,GenBank登录号为MZ442383,开放阅读框长1 071 bp,编码356个氨基酸,TgANS基因表达水平在不同花期存在显著差异,随着花发育逐渐升高,表达趋势与花青素苷的积累趋势基本一致。将Tg ANS导入烟草进行异源表达,转基因株系花色明显变红,Tg ANS表达量显著增加,花青素苷含量增加,进一步对这些株系内源的NtCHS、NtCHI、NtFLS、NtF3H、NtF3’H和NtDFR表达进行分析,NtF3H、NtF3’H和NtDFR表达量显著上升,NtCHS和NtCHI表达量下降。表明郁金香Tg ANS参与了花青素苷的合成。 展开更多
关键词 郁金香 花青素合成酶(ans) 花青素苷 基因功能
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‘滁菊’花青素合成酶(CmANS)基因的分子特征、原核表达与表达分析 被引量：3
2
作者 赵维萍 丁子俊 +4 位作者 王方平 刘洋 刘阿梅 刘克勤 蔡华 《植物生理学报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第4期677-686,共10页
花青素合成酶(anthocyanin synthetase, ANS)是花青素和原花青素在生物合成过程中的关键酶之一,可将无色花色素转化为有颜色的花青素,它在植物发育和防御中起着重要的作用。利用同源克隆的方法从‘滁菊’中分离到一个花青素合成酶基因,... 花青素合成酶(anthocyanin synthetase, ANS)是花青素和原花青素在生物合成过程中的关键酶之一,可将无色花色素转化为有颜色的花青素,它在植物发育和防御中起着重要的作用。利用同源克隆的方法从‘滁菊’中分离到一个花青素合成酶基因,命名为CmANS,该基因cDNA全长1 119 bp,开放阅读框(ORF)为1 068 bp,可编码355个氨基酸,获得cDNA的GenBank注册号为KU530173。氨基酸序列比对和系统进化树分析表明,‘滁菊’的ANS与同属的‘杭白菊’亲缘关系最近,高达97.18%。实时荧光定量分析结果显示,CmANS基因在‘滁菊’初开期时的表达量较低,盛开期的表达量最高。构建CmANS的原核表达载体,对重组蛋白进行了IPTG诱导表达,并通过Western blot进行了表达验证。本研究可为后期深入研究CmANS基因的功能提供理论基础,为‘滁菊’花青素生物合成和代谢调控提供思路,同时为‘滁菊’的分子育种提供候选基因。 展开更多
关键词 滁菊 花青素合成酶(ans) 基因克隆 原核表达
原文传递
比利时杜鹃花花青素合成酶基因(RhANS)克隆及其功能分析 被引量：2
3
作者 蒋宝鑫 杨国霞 +3 位作者 吕思佳 贾永红 谢晓鸿 吴月燕 《核农学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第3期449-460,共12页
花青素合成酶(ANS)是植物花青素合成途径中的关键酶。为探究比利时杜鹃花(Rhododendron hybridum Hort.)ANS基因的功能及表达特性,本研究以比利时杜鹃花不同发育时期花瓣及盛花期的根、茎、叶为试验材料,利用反转录(RT-PCR)和RACE技术克... 花青素合成酶(ANS)是植物花青素合成途径中的关键酶。为探究比利时杜鹃花(Rhododendron hybridum Hort.)ANS基因的功能及表达特性,本研究以比利时杜鹃花不同发育时期花瓣及盛花期的根、茎、叶为试验材料,利用反转录(RT-PCR)和RACE技术克隆RhANS基因cDNA序列;利用超高效液相色谱质谱(Waters UPLC-Qtof)技术分析比利时杜鹃花不同发育阶段花瓣中花青素含量;利用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)分析比利时杜鹃花不同发育阶段花瓣和不同器官中ANS基因相对表达量;将RhANS基因重组到原核表达载体(pET-28a)上,并在大肠杆菌(BL21)中进行表达纯化出目的蛋白,并利用高效液相色谱(HPLC)检测目的蛋白RhANS的酶活性。结果表明,从比利时杜鹃花克隆得到RhANS基因cDNA全长序列1350 bp,开放阅读框(ORF)序列1074 bp,编码357个氨基酸,含有2-酮戊二酸双加氧酶家族基因结构域2OG-FeⅡ-Oxy;比利时杜鹃花花青素含量随着花的开放呈逐渐上升的变化趋势;RhANS基因表达量在比利时杜鹃花4个花期的花瓣和不同器官(根、茎和叶)中均表达。不同花发育时期RhANS表达量与花青素含量呈上升趋势;通过大肠杆菌原核表达载体诱导表达出大小约为40 kDa的蛋白,与理论值相近。高效液相色谱仪(HPLC)检测表明,目的蛋白具有ANS酶活性。本研究为杜鹃花中花青素生物合成的分子调控机理提供了理论依据。 展开更多
关键词 比利时杜鹃花 花青素合成酶(ans) 超高效液相色谱质谱(Waters UPLC-Qtof) 表达分析 原核表达
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三华李ANS基因克隆及其在果实采后转色过程中的表达分析 被引量：1
4
作者 许薇 陈振林 +2 位作者 刘英健 劳琪珍 宋慕波 《山东农业科学》 北大核心 2023年第7期10-16,共7页
花青素合成酶(anthocyanidin synthase,ANS)是参与植物组织花青素合成的关键酶。果肉富含花青素是三华李果实的显著特色。本研究首次克隆得到三华李ANS全长cDNA,将其命名为PsANS,并对其在不同组织和果实成熟转色过程中的表达模式进行分... 花青素合成酶(anthocyanidin synthase,ANS)是参与植物组织花青素合成的关键酶。果肉富含花青素是三华李果实的显著特色。本研究首次克隆得到三华李ANS全长cDNA,将其命名为PsANS,并对其在不同组织和果实成熟转色过程中的表达模式进行分析。结果表明,PsANS编码区长度为1074 bp,包含一个长度为217 bp的内含子,可编码一个包含357个氨基酸、分子量为40401.37的蛋白质;该蛋白二级结构以α-螺旋和不规则卷曲为主,亚细胞定位于细胞质中。蛋白互作预测发现,含有ANS结构域的蛋白主要与TT4、DFR、UF3GT、F3H、TT8等存在互作关系。不同植物的ANS蛋白同源性较高,均包含相似的蛋白催化位点;PsANS与同属蔷薇科的欧洲李ANS蛋白的亲缘关系较近。PsANS在不同组织中表达差异较大,果肉中表达量最高。三华李后熟转色过程中PsANS表达呈上升趋势,乙烯处理进一步上调了PsANS的表达,表明PsANS对三华李果实发育和后熟过程中花青素的合成起着重要作用。 展开更多
关键词 三华李 花青素合成酶(ans) 基因克隆 乙烯 采后转色过程 表达分析
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洋葱ANS基因启动子的克隆与瞬时表达分析 被引量：3
5
作者 刘畅 缪军 +6 位作者 霍雨猛 杨妍妍 刘冰江 王志峰 刘波 王富 吴雄 《山东农业科学》 2013年第5期13-17,共5页
通过PCR方法对洋葱花青素合成酶基因(AcANS)上游启动子序列进行扩增,获得长度为1.8 kb和2.2 kb的两种片段,命名为ANSPM1和ANSPM2。序列分析表明,克隆到的两个启动子除含有多个TATA-box、CAAT-box等基本启动子元件,还含有与MYB转录因子... 通过PCR方法对洋葱花青素合成酶基因(AcANS)上游启动子序列进行扩增,获得长度为1.8 kb和2.2 kb的两种片段,命名为ANSPM1和ANSPM2。序列分析表明,克隆到的两个启动子除含有多个TATA-box、CAAT-box等基本启动子元件,还含有与MYB转录因子结合的元件,以及参与光响应、逆境、激素应答的顺式作用元件。同时构建ANSPM1和ANSPM2驱动GUS报告基因的植物表达载体,通过洋葱表皮细胞瞬时表达分析,表明两个启动子均有活性。 展开更多
关键词 洋葱 花青素合成酶基因(ans) 启动子 克隆 瞬时表达
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不同植物LDOX/ANS基因的生物信息学分析 被引量：34
6
作者 董娇 周军 +4 位作者 辛培尧 许玉兰 刘岩 韦援教 付海辉 《基因组学与应用生物学》 CAS CSCD 北大核心 2010年第5期815-822,共8页
花青素是一类重要的植物次生代谢产物。本文采用生物信息学的方法对已在GenBank上登录的拟南芥、西洋梨、苹果、桃、葡萄、芥菜、菊花新品种和水稻等植物的无色花青素双加氧酶/花青素合成酶(LDOX/ANS)基因的核酸及氨基酸序列、组成成分... 花青素是一类重要的植物次生代谢产物。本文采用生物信息学的方法对已在GenBank上登录的拟南芥、西洋梨、苹果、桃、葡萄、芥菜、菊花新品种和水稻等植物的无色花青素双加氧酶/花青素合成酶(LDOX/ANS)基因的核酸及氨基酸序列、组成成分、导肽、信号肽、跨膜结构域、疏水性/亲水性、蛋白质二级结构、三级结构及功能域等进行预测和推断。结果表明,ORF除了桃和菊花新品种为500bp左右之外,其它几种植物都在1070bp左右,分子量均为4kD左右,理论等电点均低于7,说明LDOX/ANS呈酸性。Glu、Leu和Val是这些植物共有的主要氨基酸。核苷酸同源性比对结果显示,拟南芥LDOX/ANS与其它植物LDOX/ANS的同源性较高;8个物种的LDOX/ANS基因被分为两个大类,单子叶植物水稻LDOX/ANS基因被单独分为一类,其它的均聚成一大类。研究还发现这些植物的LDOX/ANSN端不存在导肽和信号肽,无跨膜结构域,肽链表现为亲水性。蛋白质二级结构中最主要的结构元件是α-螺旋和无规则卷曲,包含一个20G-FeⅡOxy功能结构域。通过此次研究,希望为今后深入研究该类酶的功能和结构特征提供依据。 展开更多
关键词 无色花青素双加氧酶/花青素合成酶(LDOX/ans) 核苷酸序列 序列分析 生物信息学
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