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用花粉管途径获得小麦转基因植株 被引量：93
1
作者 曾君祉 王东江 +4 位作者 吴有强 张健 周文娟 朱小平 徐乃正 《中国科学（B辑）》 CSCD 北大核心 1993年第3期256-262,共7页
本文将带GUS标记基因的质粒pBI121用花粉管途径转化普通小麦(T. aestivum L)品种小山3号的小花。从结实的106粒种子中,经点杂交初步筛选,再经Southern分子杂交鉴定,选出5株转基因小麦,转化率为4.7％。同时用荧光法和X-Gluc染色法测试,... 本文将带GUS标记基因的质粒pBI121用花粉管途径转化普通小麦(T. aestivum L)品种小山3号的小花。从结实的106粒种子中,经点杂交初步筛选,再经Southern分子杂交鉴定,选出5株转基因小麦,转化率为4.7％。同时用荧光法和X-Gluc染色法测试,检测到这些植株中有GUS基因的表达产物β-葡糖苷酸酶(GUS)存在,证明GUS基因已整合到小麦植株中,并能在植物体中表达。 展开更多
关键词 小麦 花粉管途径 转基因植株
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利用花粉管导入法获得转反义PEP基因大豆植株 被引量：14
2
作者 胡张华 黄锐之 +2 位作者 刘智宏 郎春秀 陈锦清 《浙江农业学报》 CSCD 1999年第2期99-100,共2页
近年来，大豆遗传转化技术发展非常迅速，用农杆菌介导法［１］将新霉素磷酸转移酶Ⅱ（ＮＰＴⅡ）、ＧＵＳ等报告基因玉米转座子ＡＣ，ＤＣ因子［４］及抗除草剂基因导入大豆细胞。此外，虽然可以采用电击法［２］、ＰＥＧ法［３］、基... 近年来，大豆遗传转化技术发展非常迅速，用农杆菌介导法［１］将新霉素磷酸转移酶Ⅱ（ＮＰＴⅡ）、ＧＵＳ等报告基因玉米转座子ＡＣ，ＤＣ因子［４］及抗除草剂基因导入大豆细胞。此外，虽然可以采用电击法［２］、ＰＥＧ法［３］、基因枪法［４］进行大豆遗传转化研究，... 展开更多
关键词 大豆 反义PEP基因 花粉管途径 遗传
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利用花粉管通道途径获得转基因小麦 被引量：9
3
作者 刘志方 陈穗云 +2 位作者 夏光敏 陈永喆 陈惠民 《山东大学学报（理学版）》 CAS CSCD 北大核心 2001年第1期84-89,共6页
将带有NPT Ⅱ基因的质粒PGV用花粉管通道途径转化小麦烟农 1 0 3,共结实 1 0 2 5粒 ,其中有 71 8粒种子可以萌发出幼苗 ,在这 71 8株幼苗中 ,经卡那霉素筛选 ,得到 75棵绿色抗性植株 ,提取这些抗性植株的叶片总DNA ,作NPT Ⅱ基因的PCR扩... 将带有NPT Ⅱ基因的质粒PGV用花粉管通道途径转化小麦烟农 1 0 3,共结实 1 0 2 5粒 ,其中有 71 8粒种子可以萌发出幼苗 ,在这 71 8株幼苗中 ,经卡那霉素筛选 ,得到 75棵绿色抗性植株 ,提取这些抗性植株的叶片总DNA ,作NPT Ⅱ基因的PCR扩增 ,有 37株为阳性 ,转化率为 5.1 6% ,对其中 9个PCR阳性植株的Southern杂交检测结果表明它们均为转基因植株 . 展开更多
关键词 小麦 NPT-Ⅱ基因 花粉管途径 转基因小麦植株
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小麦花粉管途径转化及高效筛选体系的建立 被引量：6
4
作者 黄益洪 刘春光 +5 位作者 马鸿翔 刘根齐 周淼平 孙勇如 余桂红 陆维忠 《分子植物育种》 CAS CSCD 2004年第6期777-782,共6页
本文报道了一种从大量花粉管途径转化处理后代中快速有效地筛选到转基因植株的方法。转化质粒为含bar筛选标记基因的天麻抗真菌蛋白(GAFP)与兔防御素(NP-1)双价抗病基因植物表达载体(pBI35S-gafp-NP1-bar),受体小麦品种为扬麦158和Alon... 本文报道了一种从大量花粉管途径转化处理后代中快速有效地筛选到转基因植株的方法。转化质粒为含bar筛选标记基因的天麻抗真菌蛋白(GAFP)与兔防御素(NP-1)双价抗病基因植物表达载体(pBI35S-gafp-NP1-bar),受体小麦品种为扬麦158和Alondra。对花粉管途径转化处理获得的种子分3步进行筛选鉴定:首先,转化处理种子密播于塑料盘中,待小苗长到3叶期时,用浓度为120mg/L的Basta除草剂弥雾喷施筛选,约10d后绝大部分小苗变黄枯死,只有约1%的高抗Basta除草剂的T0小苗存活;然后对其Basta抗性植株用gafp基因引物进行PCR检测,其中62.5%的Basta抗性植株为PCR阳性;最后将T0代PCR阳性植株后代种子(T1)分别发芽并按株系混合取样提取DNA,分别用gafp和bar基因引物进行PCR检测验证,结果均为阳性。表明外源基因已整合入小麦基因组并由T0代植株稳定遗传到T1代,同时证明该筛选方法是可靠有效的。 展开更多
关键词 小麦 花粉管途径 基因转化 筛选体系 天麻抗真菌蛋白基因 兔防御素基因 BAR基因
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小麦花粉管途径转化及高效筛选体系的建立
5
《作物育种信息》 2005年第12期6-7,共2页
本文报道了一种从大量花粉管途径转化处理后代中快速有效地筛选到转基因植株的方法。转化质粒为含有bar筛选标记基因的天麻抗真菌蛋白（CAVP）与兔防御素（hip-1）双价抗病基因植物表达载体（pBBSS—gafp-NPI—bar），受体小麦品种为扬... 本文报道了一种从大量花粉管途径转化处理后代中快速有效地筛选到转基因植株的方法。转化质粒为含有bar筛选标记基因的天麻抗真菌蛋白（CAVP）与兔防御素（hip-1）双价抗病基因植物表达载体（pBBSS—gafp-NPI—bar），受体小麦品种为扬麦158和Alondra。对花粉管途径转化处理获得的种子分3步进行筛选鉴定：首先，转化处理种子密播于塑料盘中，待小苗长到3叶期时，用浓度为120ms／L的Basra除草剂弥雾喷施筛选， 展开更多
关键词 花粉管途径 筛选体系 小麦品种 转化 天麻抗真菌蛋白 植物表达载体 标记基因 转基因植株 扬麦158 抗病基因
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以GFP为标记用花粉管通道途径导入外源DNA 被引量：17
6
作者 黄国存 董越梅 孙敬三 《科学通报》 EI CAS CSCD 北大核心 1998年第23期2531-2533,共3页
绿色荧光蛋白(GFP)基因是新发现的可以在植物体内表达的新型报告基因.用花粉管通道法将pBIN35S-mGFP4质粒DNA导入棉花,经荧光显微镜及手持紫外灯检验和分子杂交验证,得到转基因幼胚和植株,从而为花粉管通道转基因方法的可行性提供了直... 绿色荧光蛋白(GFP)基因是新发现的可以在植物体内表达的新型报告基因.用花粉管通道法将pBIN35S-mGFP4质粒DNA导入棉花,经荧光显微镜及手持紫外灯检验和分子杂交验证,得到转基因幼胚和植株,从而为花粉管通道转基因方法的可行性提供了直接可靠的细胞及分子生物学证据. 展开更多
关键词 花粉管通道途径 GFP 棉花 外源DNA 转基因技术
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小麦花粉管生长途径及受精过程经历时间的研究 被引量：18
7
作者 申家恒 申业 王艳杰 《作物学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第4期522-526,T0001-T0002,共7页
应用常规石蜡切片和荧光显微镜技术，对小麦花粉管生长途径及受精过程相应时间进行了研究。结果表明，授粉后，花粉随即萌发，2个精子进入花粉管，营养核留在花粉粒内，不久解体。花粉管进入羽毛状柱头分支结构的细胞间隙，继续生长于... 应用常规石蜡切片和荧光显微镜技术，对小麦花粉管生长途径及受精过程相应时间进行了研究。结果表明，授粉后，花粉随即萌发，2个精子进入花粉管，营养核留在花粉粒内，不久解体。花粉管进入羽毛状柱头分支结构的细胞间隙，继续生长于花柱基部至子房顶部的引导组织的细胞间隙内。随后穿过子房壁，在子房壁与外珠被之间的缝隙中向珠孔方向生长。白花粉萌发至花粉管长入珠孔大约需要1h。白花粉萌发并到达柱头分支结构中，花粉管均具明显的绿色荧光；但在引导组织区以及子房壁与外珠被之间生长的花粉管几乎看不到荧光。授粉后1h花粉管经珠孔及珠心表皮细胞间隙进入1个助细胞，并释放精子。授粉后2—6h精卵融合，授粉后16h合子第一次分裂。授粉后2，3h精子与极核融合，授粉后4h初生胚乳核第一次分裂。授粉后2—16h，即精卵融合至合子分裂前为花粉管通道法转化合适的时间，采用花柱横切滴加法转入外源DNA。 展开更多
关键词 小麦(Triticum AESTIVUM L.) 花粉管生长途径 受精过程 花粉管通道法
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百合花粉管通道法遗传转化的研究 被引量：5
8
作者 李双 袁霖 贾桂霞 《黑龙江农业科学》 2011年第8期15-18,共4页
为了提高百合花粉管通道法遗传转化效率,采用pBI121-GFP-FT载体,对外源基因携带形式、导入方式和导入时间进行了研究。对质粒和农杆菌两种形式携带的外源基因的研究结果表明:菌液形式携带外源基因有利于百合花粉管通道法遗传转化。采用... 为了提高百合花粉管通道法遗传转化效率,采用pBI121-GFP-FT载体,对外源基因携带形式、导入方式和导入时间进行了研究。对质粒和农杆菌两种形式携带的外源基因的研究结果表明:菌液形式携带外源基因有利于百合花粉管通道法遗传转化。采用切割柱头授粉后涂抹外源基因、常规授粉后涂抹外源基因以及子房注射外源基因3种导入方式进行百合遗传转化,结果表明常规授粉后涂抹外源基因更适宜百合花粉管通道法遗传转化。对授粉后0 h涂抹外源基因和授粉后延迟3 h涂抹外源基因2种处理进行比较研究,结果表明授粉后0 h涂抹外源基因更适宜于百合花粉管通道法遗传转化。将试验所得种子进行荧光观察,转基因植株有绿色荧光。PCR检测结果表明GFP-FT基因已经整合到百合基因组中。 展开更多
关键词 花粉管通道途径 绿色荧光蛋白(GFP) 百合
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高粱受精过程及其经历的时间 被引量：4
9
作者 李冉俐 申家恒 +2 位作者 贾媛 李伟 王黎明 《作物学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第12期2234-2242,共9页
应用常规石蜡切片技术,对高粱花粉管生长途径、双受精过程及其经历的时间进行研究。结果表明,高粱开花即授粉,花粉随即萌发,花粉管进入羽状柱头分支结构的细胞间隙,向下生长于花柱至子房顶部引导组织的细胞间隙中;进入子房腔后,在子房... 应用常规石蜡切片技术,对高粱花粉管生长途径、双受精过程及其经历的时间进行研究。结果表明,高粱开花即授粉,花粉随即萌发,花粉管进入羽状柱头分支结构的细胞间隙,向下生长于花柱至子房顶部引导组织的细胞间隙中;进入子房腔后,在子房壁与外珠被之间的缝隙中向珠孔方向生长;花粉管破坏一个助细胞后,在卵细胞与中央细胞之间的空隙中释放连续的球状内容物;两个精核分别进入卵细胞和中央细胞分别与卵核和极核融合。受精过程经历的时间为开花后0.5～3h左右,花粉管破坏一个助细胞进入胚囊,并释放精子;1～3h精核与极核融合形成初生胚乳核,精卵融合形成合子;4h左右初生胚乳核分裂;14h左右合子分裂。4～14h为合子静止期,该期为物理、化学诱变及花粉管通道法转基因技术实施的合适时间。 展开更多
关键词 高粱(Sorghum BICOLOR L.Moench) 花粉管生长途径 受精过程 受精经历时间 合子静止期
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亚麻受精过程及其经历的时间 被引量：1
10
作者 杨虹 申家恒 +2 位作者 李伟 丁建庭 康庆华 《作物学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第5期892-898,共7页
应用石蜡制片技术,观察亚麻的受精过程及其各阶段经历的时间。结果表明,亚麻开花时落到柱头上的花粉随即萌发,花粉管在花柱引导组织的细胞间隙中生长,进入子房后经子房内表面,沿胎座经珠柄进入珠孔,进入1个助细胞,在卵细胞与中央细胞之... 应用石蜡制片技术,观察亚麻的受精过程及其各阶段经历的时间。结果表明,亚麻开花时落到柱头上的花粉随即萌发,花粉管在花柱引导组织的细胞间隙中生长,进入子房后经子房内表面,沿胎座经珠柄进入珠孔,进入1个助细胞,在卵细胞与中央细胞之间释放2个精子;精子脱掉细胞质鞘后,形成精核与细胞质体;2个精核同时分别进入卵细胞和中央细胞,并与卵核及次生核融合;精核与次生核融合速度稍快;观察到合子中雌、雄性核仁融合的过程。受精各阶段经历的时间为,花粉落到柱头上随即萌发;开花后4.5h左右,花粉管长入胚珠的珠孔;4.5～5.5h,花粉管进入1个助细胞并释放精子;5.5～6.5h为精卵融合和精核与次生核的融合期;7.5～8.5h初生胚乳核分裂;12.5h之后,合子分裂;6.5～12.5h为合子静止期。 展开更多
关键词 亚麻(Linum usitatissimum L.) 花粉管生长途径 受精过程 受精经历时间
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