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题名错配PCR致突变的实验条件研究
被引量：11
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作者
陈晓穗
汪保安
王琰
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机构
中国人民解放军海军总医院中心实验科
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出处
《第二军医大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2003年第3期307-310,共4页
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基金
全军"十五"医药科研规划重点课题(0 1Z0 15 )
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文摘
目的 :对目前常用的致突菌株和PCR随机突变方法进行评价。 方法 :用单链抗体表达质粒转化致突菌株XL1 Red ,转种传代 7d ,选取克隆测定DNA序列。用错配PCR在相同基因中引入突变 ,比较不同Mg2 + 浓度、不同dNTP的浓度、不同dITP等条件下所致突变率。 结果 :在XL1 Red菌株中转种 7d(约 5 0代 )后 ,测定突变率 <0 .1%。在错配PCR中 ,增加Mg2 + 浓度可提高突变率 ,增加dTTP和dCTP浓度的致突变效果优于增加dATP和dGTP的效果。在dITP配以低浓度的dATP或dGTP时突变率较低 ,使用 5mmol/LMgCl2 、0 .5mmol/LMnCl2 、1mmol/LdTTP和dCTP的条件下 ,经 2轮PCR(共6 0个循环 )突变率可 >2 %。其突变类型有明显偏向性 ,以A/T的突变为主 ,转换多于颠换。 结论 :用致突菌株引入的突变率过低 ,不适用于抗体亲和力成熟 ,错配PCR在合适条件下可达到 2 %以上突变率 ,适用于随机突变抗体库的构建 ,但其突变类型有偏向性 ,应予以考虑。
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关键词
聚合酶链反应
突变
致突菌株
SCFV
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Keywords
PCR
random mutation
mutator strain
ScFv
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分类号
Q784
[生物学—分子生物学]
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