[目的]探讨HPV18致癌基因E6选择性剪接在宫颈癌细胞中的潜在作用。[方法]HPV18感染或过表达HPV18致癌基因E6后,MTT法检测宫颈癌细胞C-33 A的增殖水平、逆转录PCR和琼脂糖凝胶电泳检测E6选择性剪接产物表达水平、免疫印迹检测E7蛋白表达...[目的]探讨HPV18致癌基因E6选择性剪接在宫颈癌细胞中的潜在作用。[方法]HPV18感染或过表达HPV18致癌基因E6后,MTT法检测宫颈癌细胞C-33 A的增殖水平、逆转录PCR和琼脂糖凝胶电泳检测E6选择性剪接产物表达水平、免疫印迹检测E7蛋白表达水平。高通量测序HPV18感染或不感染的C-33 A细胞后调控E6选择性剪接的关键分子。[结果]过表达E6并感染HPV18的C-33 A细胞的增殖水平(2.35±0.37 vs 1.27±0.28)显著上升,且高于未过表达E6(1.27±0.28 vs 0.68±0.11)(P<0.05)。HPV18感染和过表达SRSF3后,选择性剪接产物E6*Ⅰ水平上升(0.25±0.03 vs 0.65±0.13)、E7蛋白表达水平(0.20±0.04 vs 0.77±0.18)上升。敲低SRSF3和过表达miR-1208时,C-33 A细胞的增殖水平(1.30±0.18 vs 0.65±0.13,1.75±0.27 vs 0.75±0.13)显著下降(P<0.05)。与只过表达E6相比,E6与SRSF3共表达、E6过表达同时干扰miR-1208均能够显著促进C-33 A细胞的增殖水平(0.65±0.13 vs 1.65±0.40,0.59±0.11 vs 1.70±0.24)(P<0.05)。敲低SRSF3后,选择性剪接产物E6*Ⅰ水平下降(0.15±0.02 vs 0.57±0.15)、E7蛋白表达水平下降(0.20±0.04 vs 0.77±0.18)(P<0.05)。干扰miR-1208后,选择性剪接产物E6*Ⅰ水平上升(1.12±0.25 vs 2.56±0.33)、SRSF3(0.15±0.03 vs 0.75±0.15)和E7蛋白表达水平上升(0.65±0.11 vs 0.98±0.20);过表达miR-1208后,选择性剪接产物E6*Ⅰ水平下降(1.85±0.34 vs 1.15±0.20)、SRSF3(1.33±0.14 vs 0.20±0.05)和E7蛋白表达水平下降(0.88±0.13 vs 0.50±0.10)(P<0.05)。此外,miR-1208靶向SRSF3 mRNA的3′端非编码区。[结论]miR-1208靶向SRSF3 mRNA的3′端非编码区并减少SRSF3的蛋白表达水平。SRSF3能够促进HPV18致癌基因E6的选择性剪接和E7蛋白的表达。HPV18感染后操纵miR-1208/SRSF3/E6/E7调控轴促进宫颈癌细胞的增殖。展开更多
文摘[目的]探讨HPV18致癌基因E6选择性剪接在宫颈癌细胞中的潜在作用。[方法]HPV18感染或过表达HPV18致癌基因E6后,MTT法检测宫颈癌细胞C-33 A的增殖水平、逆转录PCR和琼脂糖凝胶电泳检测E6选择性剪接产物表达水平、免疫印迹检测E7蛋白表达水平。高通量测序HPV18感染或不感染的C-33 A细胞后调控E6选择性剪接的关键分子。[结果]过表达E6并感染HPV18的C-33 A细胞的增殖水平(2.35±0.37 vs 1.27±0.28)显著上升,且高于未过表达E6(1.27±0.28 vs 0.68±0.11)(P<0.05)。HPV18感染和过表达SRSF3后,选择性剪接产物E6*Ⅰ水平上升(0.25±0.03 vs 0.65±0.13)、E7蛋白表达水平(0.20±0.04 vs 0.77±0.18)上升。敲低SRSF3和过表达miR-1208时,C-33 A细胞的增殖水平(1.30±0.18 vs 0.65±0.13,1.75±0.27 vs 0.75±0.13)显著下降(P<0.05)。与只过表达E6相比,E6与SRSF3共表达、E6过表达同时干扰miR-1208均能够显著促进C-33 A细胞的增殖水平(0.65±0.13 vs 1.65±0.40,0.59±0.11 vs 1.70±0.24)(P<0.05)。敲低SRSF3后,选择性剪接产物E6*Ⅰ水平下降(0.15±0.02 vs 0.57±0.15)、E7蛋白表达水平下降(0.20±0.04 vs 0.77±0.18)(P<0.05)。干扰miR-1208后,选择性剪接产物E6*Ⅰ水平上升(1.12±0.25 vs 2.56±0.33)、SRSF3(0.15±0.03 vs 0.75±0.15)和E7蛋白表达水平上升(0.65±0.11 vs 0.98±0.20);过表达miR-1208后,选择性剪接产物E6*Ⅰ水平下降(1.85±0.34 vs 1.15±0.20)、SRSF3(1.33±0.14 vs 0.20±0.05)和E7蛋白表达水平下降(0.88±0.13 vs 0.50±0.10)(P<0.05)。此外,miR-1208靶向SRSF3 mRNA的3′端非编码区。[结论]miR-1208靶向SRSF3 mRNA的3′端非编码区并减少SRSF3的蛋白表达水平。SRSF3能够促进HPV18致癌基因E6的选择性剪接和E7蛋白的表达。HPV18感染后操纵miR-1208/SRSF3/E6/E7调控轴促进宫颈癌细胞的增殖。
