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p65 DNA结合域的克隆、表达及其酵母双杂交自身激活作用检测
被引量：
4
1
作者
徐祥
梁华平
+4 位作者
刘昕
代佳平
刘琛
罗艳
王正国
《第三军医大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2003年第2期123-126,共4页
目的 获得NF κBp65亚基DNA结合域cDNA及构建酵母双杂交系统中的靶基因 ,并检测靶基因的表达和自身激活活性。方法 利用引物二聚体搭桥技术 ,扩增p65亚基DNA结合域基因片段 ,并将其克隆入酵母双杂交载体pG BKT7DNA BD。应用醋酸锂法...
目的 获得NF κBp65亚基DNA结合域cDNA及构建酵母双杂交系统中的靶基因 ,并检测靶基因的表达和自身激活活性。方法 利用引物二聚体搭桥技术 ,扩增p65亚基DNA结合域基因片段 ,并将其克隆入酵母双杂交载体pG BKT7DNA BD。应用醋酸锂法转化酵母细胞AH10 9,在SD Trp选择培养基上培养 ,观察转化株的生长情况。按尿素 SDS法抽提酵母蛋白 ,用SDS PAGE电泳和Western blot鉴定靶蛋白在酵母细胞中的表达。利用液相法和平板法检测阳性转化株 β 半乳糖苷酶的活性。 结果 获得p65DNA结合域基因片段 ,并成功构建酵母双杂交系统中的靶基因。靶基因能在酵母细胞中表达 ,对酵母细胞无毒性作用 ,无自身激活活性。结论 NF κBp65亚基DNA结合域可作为酵母双杂合系统中的靶基因 ,用于肽库筛选 。
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关键词
P65
DNA结合域
克隆
核因子ΚB
酵母双杂交
自身
激活
作用
酵母表达
炎症反应
下载PDF
职称材料
小鼠Dnd1酵母双杂交系统诱饵载体的构建及自身激活检测
被引量：
1
2
作者
张菁
罗畅
+2 位作者
丁小凤
张健
彭小宁
《湖南师范大学学报（医学版）》
2008年第1期1-4,共4页
目的:构建用于酵母双杂交系统的诱饵载体pDBLeu-Dnd1,并检测其是否有自身激活作用。方法:设计引物引入SalⅠ、NotⅠ酶切位点,使用PCR方法从质粒pcDNA3.1-Dnd1中扩增小鼠Dnd1基因的编码区序列,连至pMD18-T载体。酶切验证及测序正确后,用...
目的:构建用于酵母双杂交系统的诱饵载体pDBLeu-Dnd1,并检测其是否有自身激活作用。方法:设计引物引入SalⅠ、NotⅠ酶切位点,使用PCR方法从质粒pcDNA3.1-Dnd1中扩增小鼠Dnd1基因的编码区序列,连至pMD18-T载体。酶切验证及测序正确后,用SalⅠ,NotⅠ内切酶分别消化pMD-T-Dnd1及pDBLeu载体而后构建诱饵载体pDBLeu-Dnd1,并检测其在G IBCO/BRL公司的酵母双杂交系统中的自身激活作用。结果:成功构建诱饵载体pDBLeu-Dnd1,并证明其在该系统中无自身激活作用。结论:pDBLeu-Dnd1可应用该酵母双杂交系统筛选与之相互作用的蛋白。
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关键词
Dnd1基因
酵母双杂交系统
自身
激活
作用
原文传递
人肝再生增强因子的酵母双杂交诱饵载体的构建及自激活作用检测
3
作者
佟明华
陈思强
+3 位作者
孔祥平
姚汝华
易学瑞
杨联萍
《实用临床医学（湖北）》
2003年第2期16-18,共3页
目的 构建肝再生增强因子的酵母双杂交诱饵质粒，为进一步研究其相互作用蛋白奠定基础。方法 将人肝再生增强因子的编码序列重组入pGBKT载体中，经酶切及序列分析鉴定构建正确后，转化酵母AHl09菌株，转化子在SD／-His／-Trp选择培养基...
目的 构建肝再生增强因子的酵母双杂交诱饵质粒，为进一步研究其相互作用蛋白奠定基础。方法 将人肝再生增强因子的编码序列重组入pGBKT载体中，经酶切及序列分析鉴定构建正确后，转化酵母AHl09菌株，转化子在SD／-His／-Trp选择培养基上培养；滤纸法β-半乳糖苷酶活性测定；Westem blot检测目的蛋白表达情况。结果 正确地构建了人肝再生增强因子的酵母双杂交诱饵质粒pGBKT7-hALR，其酵母AHl09转化菌在SD／-Trp培养基上30℃培养65h，长出φlmm菌落，而在SD／-Trp-His培养基上不生长，β-半乳糖苷酶活性检测呈阴性。Westem blot结果显示目的蛋白以35KD的融合蛋白形式表达。结论 诱饵质粒pGBKT7-hALR对宿主菌AHl09没有毒性作用，能稳定表达目的蛋白，不能自身激活报告基因，可用于酵母双杂交的筛选工作。
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关键词
肝再生增强因子
酵母双杂交
自身
激活
作用
下载PDF
职称材料
题名
p65 DNA结合域的克隆、表达及其酵母双杂交自身激活作用检测
被引量：
4
1
作者
徐祥
梁华平
刘昕
代佳平
刘琛
罗艳
王正国
机构
第三军医大学附属大坪医院野战外科研究所第一研究室
第三军医大学基础医学部分子遗传学教研室
出处
《第三军医大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2003年第2期123-126,共4页
基金
国家重点基础研究发展规划资助项目 ("973"项目 ) (G19990 54 2 0 3)
国家自然科学基金资助项目 ( 30 0 80 0 0 9)
重庆市科委基金资助项目 ( 2 0 0 0 6 319)
文摘
目的 获得NF κBp65亚基DNA结合域cDNA及构建酵母双杂交系统中的靶基因 ,并检测靶基因的表达和自身激活活性。方法 利用引物二聚体搭桥技术 ,扩增p65亚基DNA结合域基因片段 ,并将其克隆入酵母双杂交载体pG BKT7DNA BD。应用醋酸锂法转化酵母细胞AH10 9,在SD Trp选择培养基上培养 ,观察转化株的生长情况。按尿素 SDS法抽提酵母蛋白 ,用SDS PAGE电泳和Western blot鉴定靶蛋白在酵母细胞中的表达。利用液相法和平板法检测阳性转化株 β 半乳糖苷酶的活性。 结果 获得p65DNA结合域基因片段 ,并成功构建酵母双杂交系统中的靶基因。靶基因能在酵母细胞中表达 ,对酵母细胞无毒性作用 ,无自身激活活性。结论 NF κBp65亚基DNA结合域可作为酵母双杂合系统中的靶基因 ,用于肽库筛选 。
关键词
P65
DNA结合域
克隆
核因子ΚB
酵母双杂交
自身
激活
作用
酵母表达
炎症反应
Keywords
NF κB
p65
yeast two hybrid system
autonomous activation
expression in yeast cells
分类号
Q785 [生物学—分子生物学]
R364.5 [医药卫生—病理学]
下载PDF
职称材料
题名
小鼠Dnd1酵母双杂交系统诱饵载体的构建及自身激活检测
被引量：
1
2
作者
张菁
罗畅
丁小凤
张健
彭小宁
机构
湖南师范大学医学院
湖南师范大学生命科学学院基因敲除与转基因动物实验室
出处
《湖南师范大学学报（医学版）》
2008年第1期1-4,共4页
基金
教育部留学归国人员资助项目〔2005(383)〕
文摘
目的:构建用于酵母双杂交系统的诱饵载体pDBLeu-Dnd1,并检测其是否有自身激活作用。方法:设计引物引入SalⅠ、NotⅠ酶切位点,使用PCR方法从质粒pcDNA3.1-Dnd1中扩增小鼠Dnd1基因的编码区序列,连至pMD18-T载体。酶切验证及测序正确后,用SalⅠ,NotⅠ内切酶分别消化pMD-T-Dnd1及pDBLeu载体而后构建诱饵载体pDBLeu-Dnd1,并检测其在G IBCO/BRL公司的酵母双杂交系统中的自身激活作用。结果:成功构建诱饵载体pDBLeu-Dnd1,并证明其在该系统中无自身激活作用。结论:pDBLeu-Dnd1可应用该酵母双杂交系统筛选与之相互作用的蛋白。
关键词
Dnd1基因
酵母双杂交系统
自身
激活
作用
Keywords
Dnd1 gene
yeast two-hybrid system
self-activation
分类号
R [医药卫生]
原文传递
题名
人肝再生增强因子的酵母双杂交诱饵载体的构建及自激活作用检测
3
作者
佟明华
陈思强
孔祥平
姚汝华
易学瑞
杨联萍
机构
解放军第
毕南理工大学生物工程系
出处
《实用临床医学（湖北）》
2003年第2期16-18,共3页
文摘
目的 构建肝再生增强因子的酵母双杂交诱饵质粒，为进一步研究其相互作用蛋白奠定基础。方法 将人肝再生增强因子的编码序列重组入pGBKT载体中，经酶切及序列分析鉴定构建正确后，转化酵母AHl09菌株，转化子在SD／-His／-Trp选择培养基上培养；滤纸法β-半乳糖苷酶活性测定；Westem blot检测目的蛋白表达情况。结果 正确地构建了人肝再生增强因子的酵母双杂交诱饵质粒pGBKT7-hALR，其酵母AHl09转化菌在SD／-Trp培养基上30℃培养65h，长出φlmm菌落，而在SD／-Trp-His培养基上不生长，β-半乳糖苷酶活性检测呈阴性。Westem blot结果显示目的蛋白以35KD的融合蛋白形式表达。结论 诱饵质粒pGBKT7-hALR对宿主菌AHl09没有毒性作用，能稳定表达目的蛋白，不能自身激活报告基因，可用于酵母双杂交的筛选工作。
关键词
肝再生增强因子
酵母双杂交
自身
激活
作用
分类号
Q784 [生物学—分子生物学]
下载PDF
职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
p65 DNA结合域的克隆、表达及其酵母双杂交自身激活作用检测
徐祥
梁华平
刘昕
代佳平
刘琛
罗艳
王正国
《第三军医大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2003
4
下载PDF
职称材料
2
小鼠Dnd1酵母双杂交系统诱饵载体的构建及自身激活检测
张菁
罗畅
丁小凤
张健
彭小宁
《湖南师范大学学报（医学版）》
2008
1
原文传递
3
人肝再生增强因子的酵母双杂交诱饵载体的构建及自激活作用检测
佟明华
陈思强
孔祥平
姚汝华
易学瑞
杨联萍
《实用临床医学（湖北）》
2003
0
下载PDF
职称材料
已选择
0
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