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miR-7-5p靶向调控ATG4A介导自噬对子宫内膜癌细胞增殖、侵袭的影响 被引量:2
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作者 叶文蔚 杨晶金 +2 位作者 应灵潇 柴芝红 蔡仙丽 《全科医学临床与教育》 2020年第11期980-984,F0002,共6页
目的观察miR-7-5p在子宫内膜癌组织中的表达情况,并探讨miR-7-5p对子宫内膜癌细胞(HEC-1B)增殖、侵袭的影响及其机制。方法利用逆转录聚合酶链反应法(qRT-PCR)实验检测42例子宫内膜癌患者子宫内膜癌组织和癌旁正常组织中miR-7-5p的表达... 目的观察miR-7-5p在子宫内膜癌组织中的表达情况,并探讨miR-7-5p对子宫内膜癌细胞(HEC-1B)增殖、侵袭的影响及其机制。方法利用逆转录聚合酶链反应法(qRT-PCR)实验检测42例子宫内膜癌患者子宫内膜癌组织和癌旁正常组织中miR-7-5p的表达水平,并分析其与临床病理学特征的关系;CCK-8法及Tran⁃swell试验检测过表达miR-7-5p后HEC-1B细胞增殖及侵袭情况;通过生物信息学预测网站预测到自噬相关基因4A(ATG4A)与miR-7-5p有互补结合位点,并利用双荧光素酶报告系统鉴定它们的靶向关系;再通过Western blot实验检测上调miR-7-5p表达后HEC-1B细胞中ATG4A、LC3-Ⅱ、p62的表达情况,以及敲低ATG4A表达后LC3-Ⅱ、p62的表达情况。结果miR-7-5p在子宫内膜癌组织中相对表达量明显低于癌旁组织(t=18.65,P<0.05),其表达量与FIGO分期、肿瘤浸润深度及淋巴结转移密切相关(t分别=2.45、3.40、2.27,P均<0.05);上调miR-7-5p表达能明显抑制HEC-1B细胞的增殖能力以及侵袭能力(t分别=59.89、8.99,P均<0.05);miR-7-5p靶向调控ATG4A的表达,上调miR-7-5p水平能降低ATG4A、LC3-Ⅱ的表达(t分别=7.82、12.88,P均<0.05),升高p62的表达(t=-10.42,P<0.05),而敲低ATG4A水平后LC3-Ⅱ表达降低(t=11.41,P<0.05),p62表达升高(t=-23.13,P<0.05)。结论miR-7-5p与子宫内膜癌的发展及预后密切相关,miR-7-5p可通过靶向调控ATG4A基因的表达,抑制细胞自噬活性,从而降低HEC-1B细胞的增殖及侵袭水平。 展开更多
关键词 miR-7-5p 相关基因4A 子宫内膜癌 增殖 侵袭
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过表达ATG4A对晶状体上皮细胞上皮-间质转化的影响 被引量:2
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作者 闫楚凡 王静 张劲松 《中国医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第5期391-395,共5页
目的探讨自噬相关基因4A(ATG4A)过表达对晶状体上皮细胞中上皮-间质转化水平的影响。方法用细胞转染的方法在晶状体上皮细胞中过表达ATG4A并设为过表达ATG4A组(OE-ATG4A组),转染进空载体的细胞设为阴性对照组(NC组),通过实时q PCR和West... 目的探讨自噬相关基因4A(ATG4A)过表达对晶状体上皮细胞中上皮-间质转化水平的影响。方法用细胞转染的方法在晶状体上皮细胞中过表达ATG4A并设为过表达ATG4A组(OE-ATG4A组),转染进空载体的细胞设为阴性对照组(NC组),通过实时q PCR和Western blotting方法分别检测2组细胞上皮-间质转化水平,并测定2组活性氧(ROS)水平。结果与NC组比较,OE-ATG4A组晶状体上皮细胞上皮-间质转化水平明显升高(P<0.05),但ROS水平无统计学差异(P>0.05),说明ATG4A能够促进上皮-间质转化水平,但不影响ROS水平。结论ATG4A能够促进晶状体上皮细胞中上皮-间质转化。 展开更多
关键词 相关基因4A 晶状体 上皮-间质转化 活性氧
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miR-144调控Atg4a在巨噬细胞清除结核分枝杆菌中的作用研究 被引量:2
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作者 彭乐 李萌 席向宇 《预防医学情报杂志》 CAS 2020年第12期1621-1628,共8页
目的研究miR-144调控自噬相关基因4a(autophagy related gene,Atg4a)在巨噬细胞(macrophage)清除结核分枝杆菌(mycobacterium tuberculosis,MTB)中的作用。方法选取单核巨噬细胞细胞(RAW264.7)作为研究对象,用MTB感染RAW264.7细胞,miR-... 目的研究miR-144调控自噬相关基因4a(autophagy related gene,Atg4a)在巨噬细胞(macrophage)清除结核分枝杆菌(mycobacterium tuberculosis,MTB)中的作用。方法选取单核巨噬细胞细胞(RAW264.7)作为研究对象,用MTB感染RAW264.7细胞,miR-144抑制剂进行转染。实验为RAW264.7细胞组、MTB+RAW264.7细胞组、miR-144阴性对照组、miR-144抑制剂组。实时荧光定量PCR(real-time quantitative polymerase chain reaction,RT-qPCR)法测定各组细胞miR-144表达水平,蛋白印迹(western blotting,WB)法测定转染后Atg4a、Bcl-2、Bax、caspase3、caspase9表达水平,流式细胞仪测定各组细胞凋亡率、1.7LC3B-Ⅱ^+和/或Ag85A^+水平,TargetScan数据库预测miR-144的靶基因并用双荧光素酶实验验证。结果与正常RAW264.7细胞组相比,经MTB感染后,MTB+RAW264.7细胞组miR-144、Bax、caspase3、caspase9表达水平和细胞凋亡率、LC3-ⅡB^+-细胞、Ag85A^+-细胞升高,差异有统计学意义(P<0.05),Atg4a、Bcl-2表达水平和降低,差异有统计学意义(P<0.05)。与MTB+RAW264.7细胞组、miR-144阴性对照组相比,miR-144抑制剂组miR-144、Bcl-2表达水平和Ag85A^+-细胞降低,差异有统计学意义(P<0.05),Atg4a、Bax、caspase3、caspase9表达水平和细胞凋亡率、LC3-ⅡB^+-细胞升高,差异有统计学意义(P<0.05)。TargetScan数据库预测显示Atg4a是miR-144靶基因,双荧光素酶实验证实Atg4a是miR-144作用靶点。结论miR-144能够靶向调控Atg4a,通过抑制miR-144表达,上调Atg4a蛋白表达,可促进巨噬细胞自噬、清除MTB能力。 展开更多
关键词 miR-144 相关基因4a 细胞 结核分枝杆菌
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自噬相关基因4B在肌萎缩侧索硬化症转基因鼠动物模型及细胞模型中的表达 被引量:1
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作者 陈燕春 刘焕彩 +5 位作者 周风华 王巧真 丁昊宇 接琳琳 杜红梅 赵春艳 《解剖学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第5期520-520,封2,共5页
目的:检测自噬相关基因(Atg) 4B在肌萎缩侧索硬化症(ALS)转基因鼠动物模型、神经母细胞瘤与脊髓杂交细胞系34(NSC-34)运动神经元细胞模型中的表达变化,探讨Atg4B调节的自噬与ALS发病的关系.方法:通过RT-PCR、免疫印迹和免疫组织化学检测... 目的:检测自噬相关基因(Atg) 4B在肌萎缩侧索硬化症(ALS)转基因鼠动物模型、神经母细胞瘤与脊髓杂交细胞系34(NSC-34)运动神经元细胞模型中的表达变化,探讨Atg4B调节的自噬与ALS发病的关系.方法:通过RT-PCR、免疫印迹和免疫组织化学检测Atg4B在ALS转基因鼠发病不同时间点脊髓中的表达变化;应用pEGFP-G93A-SOD1和pEGFP-wt-SOD1转染NSC-34细胞,通过RT-PCR、免疫印迹和免疫荧光显色检测转染后24、48 h和72 h Atg4B在细胞模型中的表达变化.结果:与野生型鼠相比较,ALS鼠脊髓中Atg4B mRNA及蛋白在发病早期变化不明显,发病中期和晚期均下调;与转染pEGFP-wt-SOD1的NSC-34细胞相比,转染pEGFP-G93 A-SOD1的NSC-34细胞在转染后24 h Atg4B mRNA及蛋白无明显变化,转染后48 h和72 h均下调.结论:自噬基因Atg4B表达下调与ALS发病密切相关. 展开更多
关键词 肌萎缩侧索硬化症 相关基因4B 基因 神经母细胞瘤与脊髓杂交细胞系-34
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miR-34a/ATG4B对db/db小鼠肾脏损伤中自噬和氧化应激的影响 被引量:1
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作者 郝建兵 唐杰 郝丽荣 《医学综述》 CAS 2021年第16期3298-3303,共6页
目的探讨miR-34a/自噬相关基因(ATG)4B对2型糖尿病(db/db)小鼠肾脏损伤中自噬和氧化应激的影响。方法将30只4周龄健康雄性db/db小鼠适应性喂养2周,后采用随机数字表法将其分为5组:模型组(无任何干预)、miR-34a激动剂组(尾静脉注射miR-34... 目的探讨miR-34a/自噬相关基因(ATG)4B对2型糖尿病(db/db)小鼠肾脏损伤中自噬和氧化应激的影响。方法将30只4周龄健康雄性db/db小鼠适应性喂养2周,后采用随机数字表法将其分为5组:模型组(无任何干预)、miR-34a激动剂组(尾静脉注射miR-34a激动剂,首次20 nmol,维持剂量每3天5 nmol)、miR-34a激动剂对照组(尾静脉注射miR-34a激动剂阴性对照物,方法剂量同激动剂)、miR-34a拮抗剂组(尾静脉注射miR-34a拮抗剂,首次200 nmol,维持剂量每3天50 nmol)、miR-34a拮抗剂对照组(尾静脉注射miR-34a拮抗剂阴性对照物,方法剂量同拮抗剂),每组6只;同时选取6只6周龄健康雄性db/m小鼠作为正常对照组(无任何干预)。4周后检测空腹血糖、血脂、尿白蛋白、肾脏组织中ATG4B、自噬标记蛋白[微管相关蛋白1轻链3(LC3)Ⅱ和p62]和氧化应激水平[超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)和活性氧类(ROS)]。结果10周龄时,模型组小鼠的体重、空腹血糖、糖化血红蛋白、总胆固醇、三酰甘油水平及尿蛋白/尿肌酐比值以及肾脏miR-34a、p62蛋白、MDA和ROS水平均高于对照组,但ATG4B、LC3Ⅱ、SOD水平低于对照组(P<0.01)。miR-34a激动剂组、miR-34a拮抗剂组与模型组小鼠血糖和糖化血红蛋白水平比较差异无统计学意义(P>0.05),但miR-34a激动剂组尿白蛋白/尿肌酐比值明显高于模型组,而miR-34a拮抗剂组尿白蛋白/尿肌酐比值明显低于模型组(P<0.01)。miR-34a激动剂组小鼠肾脏ATG4B、LC3Ⅱ、SOD水平低于激动剂阴性对照组,而p62、MDA和ROS水平高于激动剂阴性对照组(P<0.01);miR-34a拮抗剂组小鼠肾脏ATG4B、LC3Ⅱ、SOD水平高于拮抗剂阴性对照组,而p62蛋白表达水平低于拮抗剂阴性对照组(P<0.01)。结论miR-34a通过下调糖尿病小鼠肾脏中ATG4B蛋白表达抑制自噬和诱导氧化应激,导致肾脏损伤。 展开更多
关键词 糖尿病肾脏疾病 MIR-34A 相关基因4B 氧化应激
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下调自噬相关蛋白ATG4B抑制贝氏柯克斯体细胞内增殖
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作者 张家宁 付梦姣 +7 位作者 焦俊 欧阳譞 于永慧 赵明亮 张珊 温博海 熊小路 孙岩松 《军事医学》 CAS 2022年第8期569-575,共7页
目的研究宿主细胞自噬相关基因4B(ATG4B)对贝氏柯克斯体胞内生长繁殖的影响。方法用ATG4B特异小干扰RNA(siRNA)处理宿主细胞(THP-1和Vero),以非特异siRNA和无siRNA处理的细胞为对照;逆转录实时荧光定量PCR(qRT-PCR)和Western印迹检测抑... 目的研究宿主细胞自噬相关基因4B(ATG4B)对贝氏柯克斯体胞内生长繁殖的影响。方法用ATG4B特异小干扰RNA(siRNA)处理宿主细胞(THP-1和Vero),以非特异siRNA和无siRNA处理的细胞为对照;逆转录实时荧光定量PCR(qRT-PCR)和Western印迹检测抑制效果;Western印迹分析细胞自噬标识蛋白(p62和LC3)的量变;qRT-PCR检测贝氏柯克斯体感染细胞中细菌增殖水平;共聚焦显微镜观察贝氏柯克斯体感染细胞中细菌寄生囊泡发育状况。结果与对照组比较,ATG4B特异siRNA处理组的细胞自噬标识蛋白p62和LC3-Ⅱ明显增多,细菌繁殖量更低,细菌寄生囊泡为散在分布小囊泡而不是单一成熟大囊泡。结论宿主细胞ATG4B表达下调可部分阻断自噬,自噬的部分阻断使贝氏柯克斯体寄生囊泡发育受阻,进而抑制贝氏柯克斯体胞内生长繁殖,为阐明宿主细胞的自噬促进贝氏柯克斯体繁殖的致病机制提供了新的依据。 展开更多
关键词 贝氏柯克斯体 相关基因4B 小干扰RNA 胞内寄生 感染 细胞增殖
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携带Flag标签的人自噬相关蛋白4B的真核表达及功能鉴定
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作者 洪甜 晋帅 +7 位作者 张立 李玲 梁迎春 宋烨琼 董倩 刘阳 徐小洁 叶棋浓 《生物技术通讯》 CAS 2016年第1期73-75,共3页
目的:构建携带Flag标签的人自噬相关基因4B(ATG4B)的真核表达质粒,获得Flag-ATG4B融合蛋白,并检测其与LC3的相互作用。方法:以本实验室保存的乳腺文库为模板,采用PCR技术扩增获得ATG4B序列,并将其插入pc DNA3.0-Flag载体构建成重组质粒... 目的:构建携带Flag标签的人自噬相关基因4B(ATG4B)的真核表达质粒,获得Flag-ATG4B融合蛋白,并检测其与LC3的相互作用。方法:以本实验室保存的乳腺文库为模板,采用PCR技术扩增获得ATG4B序列,并将其插入pc DNA3.0-Flag载体构建成重组质粒,转染HEK293T细胞后用Western印迹检测融合蛋白的表达,用免疫共沉淀检测ATG4B与LC3的相互作用。结果:菌液PCR和重组质粒的双酶切结果及测序均表明重组质粒构建成功,Western印迹表明融合蛋白在HEK293T细胞中获得表达,免疫共沉淀结果表明表达的ATG4B能与LC3结合。结论:构建了pc DNA3.0-Flag-ATG4B真核表达质粒,表达的ATG4B蛋白对LC3的切割至关重要。 展开更多
关键词 相关基因4B 真核表达 LC3
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