目的自噬是细胞内的一种溶酶体降解过程,通过降解损伤的蛋白以及衰老的细胞器来维持细胞稳态,也是肿瘤治疗耐药性产生的原因之一。本实验探讨自噬抑制剂联合吉非替尼(gefitinib,GE)对人三阴性乳腺癌(triple-negative breast cancer,TNBC...目的自噬是细胞内的一种溶酶体降解过程,通过降解损伤的蛋白以及衰老的细胞器来维持细胞稳态,也是肿瘤治疗耐药性产生的原因之一。本实验探讨自噬抑制剂联合吉非替尼(gefitinib,GE)对人三阴性乳腺癌(triple-negative breast cancer,TNBC)MDA-MB-468细胞敏感性的影响。方法常规复苏、传代培养MDA-MB-468细胞,待细胞处于对数生长期后分别以GE单药或联合自噬抑制剂3-methyladenine(3MA)或联合bafilomycin A1(BAF)处理细胞。MTT比色法检测细胞相对增殖率,克隆形成实验检测细胞存活率,流式细胞术检测细胞凋亡,蛋白质印迹法检测自噬相关蛋白的表达。结果自噬抑制剂明显增加GE的细胞毒性,MTT比色法检测GE联合3MA、BAF处理MDA-MB-468细胞48h后半抑制率(IC50)分别为(4.1±0.2)和(3.8±0.3)μmol/L,显著低于单用GE组的(7.0±0.2)μmol/L,Z=-2.611,P<0.017。克隆形成实验显示,GE与自噬抑制剂联合3MA、BAF克隆形成率分别为(29.85±5.54)%和(33.58±6.31)%,显著低于单用GE组(63.46±8.32)%,Z=-2.309,P<0.017。细胞凋亡的研究显示,自噬抑制可促进细胞凋亡,GE联合3MA、BAF后,凋亡率分别为(23.37±2.71)%、(18.71±2.81)%,高于单用GE组(12.43±3.18)%,Z=-2.309,P<0.017。蛋白质印迹法检测结果显示,GE处理诱导自噬增加,自噬抑制剂联合GE后,MDA-MB-468细胞Cleaved Caspase-9和Cleaved Caspase-3蛋白的活性增加。结论自噬抑制可增加MDA-MB-468细胞对GE的敏感性,自噬抑制剂联合GE可能通过启动Caspase级联反应促进MDA-MB-468细胞凋亡。展开更多
半个世纪以前，比利时细胞学家Christian de Duve用自噬这一术语来描述细胞利用溶酶体来消化胞浆成分这一过程。依据待降解产物运送到溶酶体时的形态不同，自噬主要可以分为三类：①大自噬，其特征是形成独特的双层膜细胞器．自噬小体...半个世纪以前，比利时细胞学家Christian de Duve用自噬这一术语来描述细胞利用溶酶体来消化胞浆成分这一过程。依据待降解产物运送到溶酶体时的形态不同，自噬主要可以分为三类：①大自噬，其特征是形成独特的双层膜细胞器．自噬小体，这是一种通过自噬小体与溶酶体融合的途径并在细胞稳态中起着重要作用；②小自噬，溶酶体器膜将胞浆成分直接内吞进去；③分子伴侣介导的自噬，是由分子伴侣热休克蛋白70、溶酶体相关的膜蛋白2A介导的降解过程。展开更多
文摘半个世纪以前，比利时细胞学家Christian de Duve用自噬这一术语来描述细胞利用溶酶体来消化胞浆成分这一过程。依据待降解产物运送到溶酶体时的形态不同，自噬主要可以分为三类：①大自噬，其特征是形成独特的双层膜细胞器．自噬小体，这是一种通过自噬小体与溶酶体融合的途径并在细胞稳态中起着重要作用；②小自噬，溶酶体器膜将胞浆成分直接内吞进去；③分子伴侣介导的自噬，是由分子伴侣热休克蛋白70、溶酶体相关的膜蛋白2A介导的降解过程。
