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脂质修饰DNA复合结构的可控制备及膜生物学研究 被引量：1
1
作者 张露灏 曹书婷 +4 位作者 刘江波 左小磊 王丽华 樊春海 李江 《高等学校化学学报》 SCIE EI CAS CSCD 北大核心 2020年第6期1151-1162,共12页
综述了脂质-DNA复合结构的设计、可控制备和结构特性;并重点讨论其在膜生物学中的应用,包括对活细胞膜的动态分析、膜上纳米孔道的构建、对活细胞的空间排布与相互作用调控以及活体药物递送等;总结了该领域存在的一些挑战,并对未来发展... 综述了脂质-DNA复合结构的设计、可控制备和结构特性;并重点讨论其在膜生物学中的应用,包括对活细胞膜的动态分析、膜上纳米孔道的构建、对活细胞的空间排布与相互作用调控以及活体药物递送等;总结了该领域存在的一些挑战,并对未来发展进行了展望.利用这些精确可控的脂质-DNA复合结构,研究者可以更深入地理解细胞膜在分子尺度上的工作原理,实现对细胞膜功能的精确调控,为细胞成像诊断、纳米机器与人工细胞构建等应用提供有力的工具. 展开更多
关键词 脂质-DNA复合结构 膜锚定 膜生物学
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轮状病毒VP7 DNA免疫研究 被引量：1
2
作者 刘勇 袁力勇 +5 位作者 庄俊英 李春宏 冮宏映 马雁冰 孙茂盛 戴长柏 《免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2001年第6期430-432,共3页
目的研究促使基因分泌或膜锚定表达的基因修饰对轮状病毒 VP7DNA疫苗所诱导抗体水平的影响。方法把携带野生型 (VP7wt)、分泌型 (VP7s)和膜锚定型 (VP7tm ) 3种 VP7基因的重组 pc DNA3质粒分别免疫小鼠 ,用大肠杆菌表达的重组 VP7抗原检... 目的研究促使基因分泌或膜锚定表达的基因修饰对轮状病毒 VP7DNA疫苗所诱导抗体水平的影响。方法把携带野生型 (VP7wt)、分泌型 (VP7s)和膜锚定型 (VP7tm ) 3种 VP7基因的重组 pc DNA3质粒分别免疫小鼠 ,用大肠杆菌表达的重组 VP7抗原检测 VP7特异的抗体反应 ,统计分析。结果 3种 DNA疫苗均能诱导轮状病毒 VP7特异的 Ig G抗体反应 ,但其抗体水平之间无显著性差异。结论把轮状病毒 VP7基因导入分泌或膜锚定表达途径不能增强其 展开更多
关键词 轮状病毒VP7 分泌 膜锚定 基因修饰 DNA疫苗
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膜锚定Gaussia萤光素酶的细胞标记及生物荧光成像
3
作者 樊炜 贾帅争 +4 位作者 王怡 阎少多 高博 彭剑淳 詹林盛 《生物技术通讯》 CAS 2011年第6期838-841,共4页
目的:制备表达膜锚定Gaussia萤光素酶(extGluc)报告基因的慢病毒,用于标记细胞。方法:将报告基因extGluc克隆至慢病毒载体pCCsin.PPT.SFFV.IRES.eGFP.Wpre(VeGFP)中,以聚乙烯亚胺(PEI)介导,将慢病毒包装所需4种质粒(pVeGFP-extGLuc、pMD... 目的:制备表达膜锚定Gaussia萤光素酶(extGluc)报告基因的慢病毒,用于标记细胞。方法:将报告基因extGluc克隆至慢病毒载体pCCsin.PPT.SFFV.IRES.eGFP.Wpre(VeGFP)中,以聚乙烯亚胺(PEI)介导,将慢病毒包装所需4种质粒(pVeGFP-extGLuc、pMDL、pRev、pVSVG),转染293FT细胞,72 h后收集病毒上清进行浓缩,感染293FT细胞,并用流式细胞仪检测病毒滴度,生物荧光成像和化学发光分析extGluc的表达;之后,用收集的慢病毒感染人单核细胞白血病细胞株U937。结果:对经PCR筛选出的阳性克隆所含质粒进行酶切鉴定,表明extGlu报告基因插入载体中;重组慢病毒包装成功且病毒滴度为5×106 TU/mL;用包装的病毒颗粒感染293FT细胞,生物荧光成像和化学发光证实extGluc的膜定位,且酶活性与细胞数目呈线性相关;病毒颗粒能够感染悬浮细胞U937。结论:包装了extGluc标记的重组慢病毒,可用于标记细胞,为体内监测细胞迁移、聚集和变化提供了一种方法。 展开更多
关键词 Gaussia萤光素酶 膜锚定 慢病毒包装 生物荧光成像
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构建表达膜锚定荧光素酶的载体实现细胞自发光成像
4
作者 陆琤 张硌 张鹏 《中国医学装备》 2019年第10期145-147,共3页
目的:构建能稳定表达膜锚定Gaussia荧光素酶(GLuc)的载体,以实现细胞自发光成像。方法:采用人源表皮生长因子受体(EGFR)、巨噬细胞集落刺激因子受体(MCSFR)、白细胞介素-4受体α链(IL4Rα)信号肽将GLuc的信号肽替换掉,并在GLuc后分别加... 目的:构建能稳定表达膜锚定Gaussia荧光素酶(GLuc)的载体,以实现细胞自发光成像。方法:采用人源表皮生长因子受体(EGFR)、巨噬细胞集落刺激因子受体(MCSFR)、白细胞介素-4受体α链(IL4Rα)信号肽将GLuc的信号肽替换掉,并在GLuc后分别加上EGFR、MCSFR及IL4Rα的跨膜结构域,构建表达膜锚定的GLuc的载体,用慢病毒感染的方法将其导入永生化的小鼠外周血来源巨噬细胞(iBloodMC),通过在细胞和培养上清中加入GLuc底物检测发光,从而检测GLuc的表达。结果:iBloodMC GLuc-EGFR和iBloodMC GLuc-IL4Rα均能稳定表达荧光素酶,且iBloodMC GLuc-EGFR的GLuc表达量较高,EGFR将GLuc锚定在膜上效果较好。结论:表达膜锚定GLuc的载体构建成功,将其导入细胞,加入底物可实现细胞自发光成像。 展开更多
关键词 荧光素酶 膜锚定 生物发光 自发光成像
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分枝杆菌膜锚定表达载体的构建与亚细胞定位分析
5
作者 王鑫 范小勇 +1 位作者 马辉 曲勍 《中华微生物学和免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第6期537-543,共7页
目的构建分枝杆菌膜锚定表达载体，并分析外源目标蛋白的表达情况及其亚细胞定位。方法在分枝杆菌胞内表达载体pMFA42的基础上进行改造，人工合成结核分枝杆菌（Myco—bacteriumtuberculosis，Mtb）相对分子质量（Mr）为19×10^3的... 目的构建分枝杆菌膜锚定表达载体，并分析外源目标蛋白的表达情况及其亚细胞定位。方法在分枝杆菌胞内表达载体pMFA42的基础上进行改造，人工合成结核分枝杆菌（Myco—bacteriumtuberculosis，Mtb）相对分子质量（Mr）为19×10^3的脂蛋白膜分泌信号序列，将其插入高效的突变型furA基因启动子（pfurAma）下游构建新型的分枝杆菌膜锚定表达载体pMFA42M。PCR扩增增强型绿色荧光蛋白（EGFP）编码基因，亚克隆至上述两种载体中并电转化耻垢分枝杆菌（Mycobacte—riumsmegmatis，Ms），分别获得重组EGFP融合表达菌株和膜锚定表达菌株；接着将Mtb主要保护性抗原Ag85A及其嵌合抗原Ag856A2的编码基因亚克隆入膜锚定表达载体pMFA42M中构建Mtb抗原-EGFP融合表达菌株；通过Westernblot和流式细胞表面标记技术来分析目标抗原的表达水平及其亚细胞定位，并进一步通过荧光显微镜直接观察重组EGFP融合表达菌株在体外和感染巨噬细胞后的荧光强度。结果通过引入Mtb19×10^3脂蛋白膜分泌信号，在高效pfurAma启动子的驱动下，成功地构建了分枝杆菌膜锚定表达载体。利用EGFP作为标签抗原，通过Westernblot、荧光显微观察和流式细胞表面标记等技术均证实了外源目标抗原可在分枝杆菌中高水平表达并定位至细胞膜上。结论本研究为重组BCG和分枝杆菌膜蛋白功能研究提供了一种新型的膜锚定表达载体，所构建的EGFP重组表达菌株亦可作为一种模式示踪菌为细胞吞噬和动物免疫中的细菌定植和移位分析提供新思路。 展开更多
关键词 分枝杆菌 增强型绿色荧光蛋白 膜锚定表达载体 亚细胞定位
原文传递
抗JEV质粒DNA免疫:膜锚定和分泌性包膜蛋白的免疫原性
6
作者 唐建蓉 《国外医学（预防．诊断．治疗用生物制品分册）》 2003年第2期86-86,共1页
关键词 抗JEV质粒 DNA免疫 膜锚定 分泌性包膜蛋白 免疫原性
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