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抗膀胱癌J82及丝裂霉素C单链抗体基因的研究
1
作者 朱理玮 梁晓宇 +4 位作者 王炜 何强 何向辉 邱宇杰 王鹏志 《中华实验外科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2001年第4期361-363,共3页
目的　研制单链抗体 ,以减少鼠源抗体的异源性 ,为寻找合理的导向治疗方案提供工具。方法　将经抗原刺激的BALB/C小鼠脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞融合制备杂交瘤 ,用多聚酶链反应 (PCR)方法克隆其抗体可变区基因 ,并用重叠延伸拼接法 (SOE)... 目的　研制单链抗体 ,以减少鼠源抗体的异源性 ,为寻找合理的导向治疗方案提供工具。方法　将经抗原刺激的BALB/C小鼠脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞融合制备杂交瘤 ,用多聚酶链反应 (PCR)方法克隆其抗体可变区基因 ,并用重叠延伸拼接法 (SOE)构建相应的单链可变区抗体片段 (ScFv)基因。结果　获得杂交瘤细胞株D10及 1C8,酶联免疫吸附法及免疫组织化学法证实所分泌的抗体可分别与人膀胱癌细胞及丝裂霉素C特异性结合。获得两种抗体的可变区基因( 32 0bp及 34 0bp片段 )及ScFv基因 ( 75 0bp片段 )。 结论　应用PCR SOE方法可快速便捷地获得目的抗体的ScFv基因 ,为进一步研制双特异性ScFv提供了实验基础。 展开更多
关键词 单克隆抗体 基因 丝裂霉素类 膀胱癌j82
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罗哌卡因抑制膀胱癌J82细胞增殖、迁移及侵袭的分子机制研究
2
作者 杨欣宇 杨阳 王立娟 《检验医学与临床》 CAS 2024年第21期3195-3200,共6页
目的探讨罗哌卡因对人膀胱癌J82细胞增殖、迁移和侵袭的影响及对c-Jun氨基末端激酶(JNK)信号通路的调控作用。方法体外培养人膀胱癌J82细胞,该研究分为预实验和正式实验两个部分。预实验分组:对照组(不进行干预),低、中、高浓度罗哌卡因... 目的探讨罗哌卡因对人膀胱癌J82细胞增殖、迁移和侵袭的影响及对c-Jun氨基末端激酶(JNK)信号通路的调控作用。方法体外培养人膀胱癌J82细胞,该研究分为预实验和正式实验两个部分。预实验分组:对照组(不进行干预),低、中、高浓度罗哌卡因组(200、400、800μmol/L罗哌卡因);正式实验分组:对照组、罗哌卡因组(有显著作用浓度的罗哌卡因)、阳性药物组(100 nmol/L紫杉醇)、抑制剂组(罗哌卡因+20μmol/L JNK信号通路抑制剂SP600125)和激活剂组(罗哌卡因+1μg/mL JNK信号通路激活剂茴香霉素),干预24 h。分别采用细胞计数试剂盒-8(CCK-8)法、5-乙炔基-2′脱氧尿嘧啶核苷(EdU)、划痕法、Transwell小室法、蛋白免疫印迹法检测细胞活力、增殖率、迁移率、侵袭细胞数、上皮间质转化(EMT)及JNK通路相关蛋白水平。结果预实验中,与对照组比较,高浓度罗哌卡因组细胞活力明显降低(P<0.05),以高浓度罗哌卡因(800μmol/L)进行正式实验。正式实验中,罗哌卡因组和阳性药物组细胞增殖率、迁移率、侵袭细胞数,以及N-钙黏蛋白(N-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)、纤维粘连蛋白(FN)和磷酸化(p)-JNK表达水平较对照组降低(P<0.05),E-钙黏蛋白(E-cadherin)表达水平较对照组升高(P<0.05)。与罗哌卡因组相比,抑制剂组细胞增殖率、迁移率、侵袭细胞数,以及N-cadherin、Vimentin、FN和p-JNK表达水平降低(P<0.05),E-cadherin表达水平升高(P<0.05),而激活剂组上述指标趋势则正好相反(P<0.05)。结论罗哌卡因可能通过阻断JNK信号通路活化抑制人膀胱癌J82细胞增殖、迁移、侵袭和EMT进程。 展开更多
关键词 膀胱癌 罗哌卡因 人膀胱癌j82细胞 c-jun氨基末端激酶信号通路 增殖 迁移 侵袭 上皮间质转化
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CYP2U1基因沉默对人膀胱癌J82细胞增殖、凋亡、迁移能力的影响
3
作者 赵小磊 赵振华 +1 位作者 常俊锴 李松 《实用医学杂志》 CAS 北大核心 2020年第13期1750-1753,共4页
目的观察细胞色素P4502U1(CYP2U1)基因沉默对人膀胱癌J82细胞增殖、凋亡、迁移能力的影响。方法脂质体转染法转染至J82细胞,qRT-PCR、Western-blot检测CYP2U1、p53、caspase-3、Bcl-2的表达。MTT、划痕试验、流氏细胞技术分别检测各组... 目的观察细胞色素P4502U1(CYP2U1)基因沉默对人膀胱癌J82细胞增殖、凋亡、迁移能力的影响。方法脂质体转染法转染至J82细胞,qRT-PCR、Western-blot检测CYP2U1、p53、caspase-3、Bcl-2的表达。MTT、划痕试验、流氏细胞技术分别检测各组细胞增殖、迁移、凋亡情况。结果 CYP2U1基因沉默后CYP2U1在人膀胱癌J82细胞中表达减少(P <0.05)。沉默CYP2U1基因可提高人膀胱癌J82细胞的增殖和迁移,抑制凋亡,促进Bcl-2的表达,抑制p53、caspase-3的表达(P <0.05)。结论 CYP2U1基因沉默能促进人膀胱癌J82细胞的增殖和迁移,抑制其凋亡,可能与下调p53、caspase-3、上调Bcl-2 mRNA及蛋白的表达有关。 展开更多
关键词 细胞色素P4502U1 人膀胱癌j82细胞 增殖 凋亡 迁移
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