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腾冲菌脂肪酶的表达纯化及酶学性质的表征
被引量：
2
1
作者
李迅
仲惠
+3 位作者
王亮亮
邓若冰
高红
王飞
《化工进展》
EI
CAS
CSCD
北大核心
2014年第12期3337-3341,共5页
将来自腾冲菌的脂肪酶（LipA）基因（lipA）克隆到大肠杆菌表达载体pET28a（含T7启动子）和pTrc99A （含Trc启动子）中，转入大肠杆菌表达，发现Trc启动子更适合LipA的表达。通过热处理和DEAE-Sepharose阴离子柱纯化过程，重组LipA得到...
将来自腾冲菌的脂肪酶（LipA）基因（lipA）克隆到大肠杆菌表达载体pET28a（含T7启动子）和pTrc99A （含Trc启动子）中，转入大肠杆菌表达，发现Trc启动子更适合LipA的表达。通过热处理和DEAE-Sepharose阴离子柱纯化过程，重组LipA得到纯化，比酶活达到1.9U/mg，重组LipA分子量为42kDa。重组LipA在80℃、pH 4.5时酶活最高，经85℃保温2h，酶活保持60%以上；在pH值4.0～6.0之间，LipA具有较好的稳定性；Cu^2＋和Zn^2＋对酶活力分别有38.9%和69.2%的抑制作用，Mn^2＋、Co^2＋和Tween-20对该酶有较大的激活作用；以p-nitrophenyl-laurate （p-NP-C12）为底物时，该酶的Km值为1.5mmol/L，kcat为34.5s-1。
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关键词
腾冲
菌
脂肪酶
酶学性质
对硝基苯十二酸酯
下载PDF
职称材料
腾冲嗜热厌氧菌新型变旋酶的表达、纯化及晶体分析
2
作者
武岚
钱忠
+2 位作者
付俊
缪时英
王琳芳
《中国医学科学院学报》
CAS
CSCD
北大核心
2009年第6期696-701,共6页
目的纯化腾冲嗜热厌氧菌新型变旋酶TTE1925,用于晶体生长和三维结构分析。方法将tte1925基因克隆至原核表达载体pGEX-6P-1中,将菌落PCR和测序鉴定正确的重组质粒转化E.coliBL21(DE 3)后获得表达菌株。该菌株经异丙基-β-D-硫代半乳糖苷...
目的纯化腾冲嗜热厌氧菌新型变旋酶TTE1925,用于晶体生长和三维结构分析。方法将tte1925基因克隆至原核表达载体pGEX-6P-1中,将菌落PCR和测序鉴定正确的重组质粒转化E.coliBL21(DE 3)后获得表达菌株。该菌株经异丙基-β-D-硫代半乳糖苷诱导高效表达出带有谷胱甘肽S转移酶标签的可溶性融合蛋白,经过GlutathioneSepharoseTM4B亲和层析、Resource Q 6 mL离子交换层析和10/300 superdex 200分子筛层析纯化后,得到目的蛋白TTE1925。结果纯化后蛋白的纯度达到99%以上。蛋白采用悬滴气相扩散法得到衍射至1.9的棒状晶体。结论成功制备了高纯度TTE1925蛋白,获得TTE1925蛋白质晶体,为进一步解析变旋酶的三维结构及其生物学功能分子机制研究奠定了基础。
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关键词
腾冲
菌
TTE1925
半乳糖变旋酶
原核表达
蛋白质纯化
结晶
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职称材料
题名
腾冲菌脂肪酶的表达纯化及酶学性质的表征
被引量：
2
1
作者
李迅
仲惠
王亮亮
邓若冰
高红
王飞
机构
南京林业大学化学工程学院、江苏省生物质绿色燃料与化学品重点实验室
出处
《化工进展》
EI
CAS
CSCD
北大核心
2014年第12期3337-3341,共5页
基金
国家自然科学基金面上项目(31270612,31170537)
江苏省高校自然科学研究重大项目(11KJA480001)
江苏高校优势学科建设工程项目(PAPD)
文摘
将来自腾冲菌的脂肪酶（LipA）基因（lipA）克隆到大肠杆菌表达载体pET28a（含T7启动子）和pTrc99A （含Trc启动子）中，转入大肠杆菌表达，发现Trc启动子更适合LipA的表达。通过热处理和DEAE-Sepharose阴离子柱纯化过程，重组LipA得到纯化，比酶活达到1.9U/mg，重组LipA分子量为42kDa。重组LipA在80℃、pH 4.5时酶活最高，经85℃保温2h，酶活保持60%以上；在pH值4.0～6.0之间，LipA具有较好的稳定性；Cu^2＋和Zn^2＋对酶活力分别有38.9%和69.2%的抑制作用，Mn^2＋、Co^2＋和Tween-20对该酶有较大的激活作用；以p-nitrophenyl-laurate （p-NP-C12）为底物时，该酶的Km值为1.5mmol/L，kcat为34.5s-1。
关键词
腾冲
菌
脂肪酶
酶学性质
对硝基苯十二酸酯
Keywords
Thermoanaerobacter tengcongensis
lipase
enzymatic properties
p-nitrophenyl-laurate
分类号
Q556.1 [生物学—生物化学]
Q786
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职称材料
题名
腾冲嗜热厌氧菌新型变旋酶的表达、纯化及晶体分析
2
作者
武岚
钱忠
付俊
缪时英
王琳芳
机构
中国医学科学院北京协和医学院基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室
中国科学院北京基因组研究所
出处
《中国医学科学院学报》
CAS
CSCD
北大核心
2009年第6期696-701,共6页
基金
国家重点基础研究发展计划项目(973计划)(2006CB504001)
973重大研究计划项目(2006CB944002)~~
文摘
目的纯化腾冲嗜热厌氧菌新型变旋酶TTE1925,用于晶体生长和三维结构分析。方法将tte1925基因克隆至原核表达载体pGEX-6P-1中,将菌落PCR和测序鉴定正确的重组质粒转化E.coliBL21(DE 3)后获得表达菌株。该菌株经异丙基-β-D-硫代半乳糖苷诱导高效表达出带有谷胱甘肽S转移酶标签的可溶性融合蛋白,经过GlutathioneSepharoseTM4B亲和层析、Resource Q 6 mL离子交换层析和10/300 superdex 200分子筛层析纯化后,得到目的蛋白TTE1925。结果纯化后蛋白的纯度达到99%以上。蛋白采用悬滴气相扩散法得到衍射至1.9的棒状晶体。结论成功制备了高纯度TTE1925蛋白,获得TTE1925蛋白质晶体,为进一步解析变旋酶的三维结构及其生物学功能分子机制研究奠定了基础。
关键词
腾冲
菌
TTE1925
半乳糖变旋酶
原核表达
蛋白质纯化
结晶
Keywords
Thermoanaerobacter tengcongensis
TTE1925
galactose mutarotase
prokaryotic expression
protein purification
crystallization
分类号
Q786 [生物学—分子生物学]
下载PDF
职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
腾冲菌脂肪酶的表达纯化及酶学性质的表征
李迅
仲惠
王亮亮
邓若冰
高红
王飞
《化工进展》
EI
CAS
CSCD
北大核心
2014
2
下载PDF
职称材料
2
腾冲嗜热厌氧菌新型变旋酶的表达、纯化及晶体分析
武岚
钱忠
付俊
缪时英
王琳芳
《中国医学科学院学报》
CAS
CSCD
北大核心
2009
0
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职称材料
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