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基因治疗载体的研究进展 被引量:12
1
作者 曹明媚 戚中田 《国外医学(肿瘤学分册)》 2004年第1期22-26,共5页
载体携带目的基因的靶向高效表达是基因治疗成功的关键。基因治疗载体的研究从逆转录病毒、腺病毒、腺相关病毒、单纯疱疹病毒和慢病毒等病毒载体发展到如今还处在研究阶段的人工染色体载体、细菌载体等 ,其中病毒载体又新出现了牛痘病... 载体携带目的基因的靶向高效表达是基因治疗成功的关键。基因治疗载体的研究从逆转录病毒、腺病毒、腺相关病毒、单纯疱疹病毒和慢病毒等病毒载体发展到如今还处在研究阶段的人工染色体载体、细菌载体等 ,其中病毒载体又新出现了牛痘病毒、杆状病毒、EB病毒、水疱性口炎病毒、人巨细胞病毒、肝炎病毒以及杂交体病毒载体等。但是现有的载体都还不能达到长期稳定表达外源基因的目的 ,还需要对现有载体做进一步的改进或开发出新的载体。 展开更多
关键词 基因治疗 载体 研究进展 基因靶向转移 相关病毒 病毒 逆转录病毒 恶性肿瘤
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腺相关病毒载体的研究进展 被引量:10
2
作者 陈平 张利娟 李娜 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2022年第4期500-507,共8页
腺相关病毒(adeno-associated virus,AAV)是目前应用较为广泛的病毒载体之一。AAV载体作为基因治疗的工具,具有较高的生物安全性和稳定性、较低的免疫原性、较广的宿主范围、较强的特异性、可长时间表达外源基因等特点,因此,在基因治疗... 腺相关病毒(adeno-associated virus,AAV)是目前应用较为广泛的病毒载体之一。AAV载体作为基因治疗的工具,具有较高的生物安全性和稳定性、较低的免疫原性、较广的宿主范围、较强的特异性、可长时间表达外源基因等特点,因此,在基因治疗的研究过程中备受关注。本文就AAV的发现与生物学特性、重组AAV(r AAV)载体的设计、AAV载体在临床基因治疗中的应用及其可能引发的不良反应作一综述,以期为AAV载体今后的研究方向提供参考。 展开更多
关键词 相关病毒 重组相关病毒载体 基因治疗
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甲胎蛋白启动子调控表达p53基因的肝癌细胞靶向性基因治疗载体的研究 被引量:9
3
作者 程纪华 冷希圣 +5 位作者 彭吉润 何湘君 蔡胜利 张佑彬 王申五 杜如昱 《中华医学杂志》 CSCD 北大核心 2000年第6期461-463,共3页
目的 利用含有人甲胎蛋白启动子的腺相关病毒载体 ,构建能在人肝癌细胞株中特异表达目的基因的质粒。方法 通过设计含有特定酶切位点的引物 ,选择性地从人基因组中扩增出人甲胎蛋白启动子 (AFPpromoter)序列并克隆到含有绿色荧光蛋白 ... 目的 利用含有人甲胎蛋白启动子的腺相关病毒载体 ,构建能在人肝癌细胞株中特异表达目的基因的质粒。方法 通过设计含有特定酶切位点的引物 ,选择性地从人基因组中扩增出人甲胎蛋白启动子 (AFPpromoter)序列并克隆到含有绿色荧光蛋白 (GFP)报告基因的质粒pTR UF5上 ,构建成含报告基因的重组腺相关病毒质粒rAAV AFP GFP ;再通过平端连接的方法 ,构建成含p5 3基因的质粒rAAV AFP 5 3。通过用rAAV AFP GFP转染表达AFP的HepG2 细胞株和不表达AFP的 2 93细胞株 ,以检测AFP启动子的功能。rAAV AFP 5 3转染HLE肝癌细胞株后 ,用流式细胞分析检测对细胞周期的影响。结果 rAAV AFP GFP和经测序、酶切鉴定证实为含有人AFP启动子的质粒。细胞转染表明rAAV AFP GFP能特异地在AFP阳性细胞中高效表达目的基因 (质粒转染效率为 36 .5 % ) ;rAAV AFP 5 3使HLE的凋亡率达到 73 .88%。结论 成功构建了以腺相关病毒为载体、受人AFP启动子调控表达人野生型p5 3基因和报告基因的质粒。 展开更多
关键词 相关病毒 甲胎蛋白 启动子 基因治疗 肝癌
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Specific cellular immune responses in mice immunized with DNA,adeno-associated virus and adenoviral vaccines of Epstein-Barr virus-LMP2 alone or in combination 被引量:10
4
作者 WANG Zhan YANG SongMei +3 位作者 ZHOU Ling DU HaiJun MO WuNing ZENG Yi 《Science China(Life Sciences)》 SCIE CAS 2011年第3期263-266,共4页
Cellular immune responses,particularly those associated with CD3+CD8+ cytotoxic T lymphocytes (CTL),are critical factors in controlling viral infection.Nasopharyngeal carcinoma (NPC) is closely associated with persist... Cellular immune responses,particularly those associated with CD3+CD8+ cytotoxic T lymphocytes (CTL),are critical factors in controlling viral infection.Nasopharyngeal carcinoma (NPC) is closely associated with persistent Epstein-Barr virus (EBV) infection.NPC vaccine studies have focused on enhancing specific antiviral CTL responses.In this study,three vaccines capable of expressing the EBV-latent membrane protein 2 (LMP2) (a DNA vector,an adeno-associated virus (AAV) vector,and a replication-defective adenovirus serotype 5 (Ad5) vector) were respectively used to immunize female Balb/c mice (4-6 weeks old) at weeks 0,2 and 4,either alone or in combination.Our results suggest that combined immunization with DNA,AAV,and adenovirus vector vaccines induced specific cellular immunity more effectively than any of these vectors alone or a combination of two of the three,constituting a sound vaccine strategy for the prevention and treatment of NPC. 展开更多
关键词 EBV-LMP2 DNA vaccine recombinant adenovirus vaccine recombinant adeno-associated virus vaccine combinatorial immunization specific cell-mediated immune responses
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兔骨髓基质干细胞成骨诱导及增强型绿色荧光蛋白基因腺相关病毒体外转染的研究 被引量:9
5
作者 郑召民 董智勇 +1 位作者 邝冠明 李佛保 《中华创伤骨科杂志》 CAS CSCD 2006年第10期914-918,共5页
目的探讨重组增强型绿色荧光蛋白基因腺相关病毒(AAV—EGFP)对细胞生物学行为的影响,为组织工程寻找一种理想的病毒载体及细胞示踪标记方法。方法采用全骨髓法分离培养BMSCs,诱导培养液诱导细胞成骨转化,行细胞形态学检查、细胞表... 目的探讨重组增强型绿色荧光蛋白基因腺相关病毒(AAV—EGFP)对细胞生物学行为的影响,为组织工程寻找一种理想的病毒载体及细胞示踪标记方法。方法采用全骨髓法分离培养BMSCs,诱导培养液诱导细胞成骨转化,行细胞形态学检查、细胞表面抗原鉴定、碱性磷酸酶(ALP)染色及Von Kossa染色,评价细胞成骨情况。在此基础上转染AAV—EGFP,观察细胞形态学改变及荧光表达的时间与强度,计算转染效率,确定转染的较佳感染复数(MOI)值,MTT法描记细胞生长曲线,观察AAV载体对细胞活性的影响。结果细胞扩增迅速、形态良好、纯度较高,经诱导后呈现明显的成骨改变。实验确定AAV转染细胞的较佳MOI值为1×10^5,以此值转染AAV—EGFP后细胞荧光持续高效稳定表达(〉8周),并可随细胞有丝分裂传至子代,可以满足示踪标记的需要,AAV转染效率高,对细胞活性影响小。结论AAV长期稳定表达目的基因,是一种理想的组织工程病毒载体;基于基因转染方法高效稳定表达EGFP,可作为种子细胞良好的示踪标记方法。 展开更多
关键词 骨髓基质干细胞 成骨诱导 相关病毒 增强型绿色荧光蛋白 转染
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腺相关病毒(AAV)载体研究进展 被引量:10
6
作者 赵丽琴 席斌 彭华松 《生物技术进展》 2012年第2期110-115,共6页
基因治疗的载体在基因治疗过程中起着至关重要的作用,其中腺相关病毒(AAV)载体具有低致病性、对宿主免疫原性弱、长期稳定表达、广泛的细胞和组织亲嗜性等优点,是目前发展最热,也是最有希望的载体之一,已被广泛应用于临床研究。本文综... 基因治疗的载体在基因治疗过程中起着至关重要的作用,其中腺相关病毒(AAV)载体具有低致病性、对宿主免疫原性弱、长期稳定表达、广泛的细胞和组织亲嗜性等优点,是目前发展最热,也是最有希望的载体之一,已被广泛应用于临床研究。本文综述了腺相关病毒载体的研究进展,包括AAV的血清型、新型载体的开发、生产工艺及其放大及临床研究及讨论了AAV载体还存在的问题及可能的解决方案。随着腺相关病毒载体研究的进展,新的载体系统必将在基因治疗中发挥更重要的作用。 展开更多
关键词 相关病毒 AAV 载体 基因治疗 血清型
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重组腺相关病毒载体介导人血管内皮生长因子165基因对缺血心肌血管新生的影响 被引量:8
7
作者 黄志军 袁洪 +4 位作者 曾钧发 吴小兵 彭建强 易斌 阳国平 《中国动脉硬化杂志》 CAS CSCD 2004年第6期627-631,共5页
为了研究重组 2型腺相关病毒载体介导人血管内皮生长因子 16 5 (hVEGF16 5 )基因对兔缺血心肌血管新生的影响 ,选取了 4 0只新西兰兔 ,建立心肌缺血模型后随机分为血管内皮生长因子高、中、低剂量组及对照组等 4组 ,分别向缺血区域心肌... 为了研究重组 2型腺相关病毒载体介导人血管内皮生长因子 16 5 (hVEGF16 5 )基因对兔缺血心肌血管新生的影响 ,选取了 4 0只新西兰兔 ,建立心肌缺血模型后随机分为血管内皮生长因子高、中、低剂量组及对照组等 4组 ,分别向缺血区域心肌注射不同剂量的腺相关病毒载体 人血管内皮生长因子 16 5或磷酸盐缓冲液。 4周后取心肌组织和血液标本 ,采用逆转录聚合酶链反应和酶联免疫吸附法检测人血管内皮生长因子 16 5基因的表达 ;制作组织学切片以观察心肌组织的病理改变 ,于高倍镜下计数缺血区域毛细血管数目。结果发现 ,血管内皮生长因子低、中、高剂量组的人血管内皮生长因子 16 5 GAPDHmRNA比值依次为 0 .14± 0 .0 3、0 .4 0± 0 .0 4和 0 .6 4± 0 .0 4 ,血清人血管内皮生长因子 16 5含量分别为 6 4 .6± 8.0ng L、32 7.1± 9.9ng L和 4 71.6± 6 .9ng L ,各组间的差异均具有显著性 (P <0 .0 1)。低、中、高剂量组单个高倍视野内的毛细血管数分别为 4 .6± 1.3、11.6± 1.8和 2 1.8± 3.1条 ,而对照组为 4 .5± 1.5条。高、中剂量组的毛细血管数显著高于对照组 (P <0 .0 1) ,而低剂量组与对照组相比差异无显著性 (P >0 .0 5 )。相关分析发现毛细血管数与腺相关病毒载体 人血管内皮生长因子 16 5剂量呈? 展开更多
关键词 病理学与病理生理学 相关病毒 血管内皮生长因子 缺血心肌 血管新生 基因治疗
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腺相关病毒载体的靶向策略探讨 被引量:6
8
作者 王毅刚 黄芳 +2 位作者 蔡荣 钱程 刘新垣 《科学通报》 EI CAS CSCD 北大核心 2007年第10期1107-1115,共9页
与其他病毒载体相比,腺相关病毒(adenovirus-associated virus,AAV)由于具有宿主范围广、病原性低和携带的治疗基因表达期长等优势而成为目前最有前景的基因转移载体之一.然而,在临床基因治疗过程中,AAV具有广泛的宿主范围同时也导致缺... 与其他病毒载体相比,腺相关病毒(adenovirus-associated virus,AAV)由于具有宿主范围广、病原性低和携带的治疗基因表达期长等优势而成为目前最有前景的基因转移载体之一.然而,在临床基因治疗过程中,AAV具有广泛的宿主范围同时也导致缺乏组织或细胞特异性,对靶细胞的基因转染效率不高,同时也缺乏安全性.因此,提高重组AAV(rAAV)的靶向能力对于基因治疗成功与否非常关键.目前,各种不同血清型AAVs的分离、鉴定、应用以及rAAV制备技术的发展使得rAAV载体可用于更多的临床基因治疗实验.而且,当前针对rAAV载体各种靶向策略的研究也显示了很好的基因治疗应用前景.这些靶向策略主要包括转录靶向、受体靶向、共价偶联靶向、各种不同血清型AAV的应用以及基因重组靶向策略等.本文就近年来基于rAAV载体的各种靶向策略的进展作一评述. 展开更多
关键词 相关病毒 基因治疗 靶向
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罕见病的基因治疗研究进展 被引量:5
9
作者 李玉欢 李伟 《罕少疾病杂志》 2023年第3期109-112,共4页
罕见病是发病率很低的一大类少见疾病,其中很多疾病为慢性、严重的遗传病,常常危及生命,多数为基因缺陷导致,缺乏有效的治疗方法。基因治疗是一种新型的治疗方法,可利用载体将遗传物质引入靶细胞,通过纠正或补充缺陷基因来治疗或预防罕... 罕见病是发病率很低的一大类少见疾病,其中很多疾病为慢性、严重的遗传病,常常危及生命,多数为基因缺陷导致,缺乏有效的治疗方法。基因治疗是一种新型的治疗方法,可利用载体将遗传物质引入靶细胞,通过纠正或补充缺陷基因来治疗或预防罕见病。本文将概述基因治疗的策略,并详细阐述应用最广泛的腺相关病毒载体在眼病、血液病、神经系统疾病、肌肉疾病治疗中的应用,总结展望我国基因治疗行业的发展前景。 展开更多
关键词 罕见病 遗传病 基因治疗 相关病毒
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重组腺相关病毒:很有潜力的基因治疗载体 被引量:8
10
作者 唐彬秩 秦豪杰 +1 位作者 傅强 屈艺 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2006年第8期711-718,共8页
腺相关病毒(AAV)是细小病毒家族的一员,为无包膜的线性单链DNA病毒.由于AAV具有长期潜伏于人体而不具有任何明显致病性等优点,人们对AAV作为一种理想的基因治疗载体给予了很大期望.但是,近来发现,这类载体在应用上有许多明显的缺陷,包... 腺相关病毒(AAV)是细小病毒家族的一员,为无包膜的线性单链DNA病毒.由于AAV具有长期潜伏于人体而不具有任何明显致病性等优点,人们对AAV作为一种理想的基因治疗载体给予了很大期望.但是,近来发现,这类载体在应用上有许多明显的缺陷,包括某些细胞膜上病毒受体数量极少,重组AAV载体位点特异性整合不足,AAV衣壳成分和转基因产物引起宿主的免疫反应等等.这些缺陷促使人们加大对AAV生物学特性和转染过程的研究,从而更好地对AAV载体进行改进,使新一代重组AAV载体具备基因治疗所必需的安全性、高效性和靶向性,以期更广泛地应用于临床. 展开更多
关键词 相关病毒 重组载体 基因治疗
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外伤性视神经病变的神经再生研究进展 被引量:9
11
作者 陈海英 黄正如 《中华实验眼科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2018年第1期75-80,共6页
外伤性视神经病变(TON)是头面部外伤后视功能损害的重要原因之一。与成年哺乳动物中枢神经系统(CNS)神经元一样,视网膜神经节细胞(RGC)的轴突在视神经损伤后通常不能自发再生,从而导致不可逆的视功能丧失。RGC轴突不能再生的原... 外伤性视神经病变(TON)是头面部外伤后视功能损害的重要原因之一。与成年哺乳动物中枢神经系统(CNS)神经元一样,视网膜神经节细胞(RGC)的轴突在视神经损伤后通常不能自发再生,从而导致不可逆的视功能丧失。RGC轴突不能再生的原因被归结为视神经损伤后RGC的凋亡、成熟神经元丧失固有的再生能力、缺乏合适的再生刺激信号、视神经损伤局部的抑制性细胞外微环境。本文阐述了激活RGC的再生潜能、阻断抑制轴突再生的信号传导、给予适当的再生刺激信号等途径促进视神经再生的研究现状,以及以腺相关病毒为载体的基因治疗在视神经再生中的应用潜能。 展开更多
关键词 外伤性视神经病变 神经再生 相关病毒 基因治疗
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腺相关病毒基因治疗载体的改良与应用 被引量:8
12
作者 张凤兰 文朝阳 丁卫 《首都医科大学学报》 CAS 北大核心 2009年第4期565-573,共9页
腺相关病毒(adeno-associated virus,AAV)的非致病特性使得以其为基础的重组病毒载体具有卓越的安全性,成为在基因治疗中最富吸引力的候选载体之一,并且在多种疾病的临床治疗中广泛应用。在过去的十余年中,随着分子病毒学领域对AAV基础... 腺相关病毒(adeno-associated virus,AAV)的非致病特性使得以其为基础的重组病毒载体具有卓越的安全性,成为在基因治疗中最富吸引力的候选载体之一,并且在多种疾病的临床治疗中广泛应用。在过去的十余年中,随着分子病毒学领域对AAV基础研究的进展,研究者不断地为重组腺相关病毒的生产和改良提供新的思路和方案,以改善其对宿主或靶向细胞的感染选择性和转导效率,其中相当部分已逐渐向临床试验阶段过渡。本综述将在介绍AAV基本生物学特征的同时,结合一些实验室研究的成功案例,重点讨论AAV的改良策略、实施方案与应用特点,并对当前以AAV为载体的基因治疗的全球现状及其所面临的挑战与前景进行分析和探讨。 展开更多
关键词 相关病毒 基因治疗 重组载体 临床试验
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腺相关病毒介导的小鼠IX因子在血友病B小鼠体内表达研究 被引量:5
13
作者 陈立 陈浩明 +4 位作者 陆华中 吴小兵 卢大儒 邱信芳 薛京伦 《中国科学(C辑)》 CSCD 北大核心 2003年第2期175-181,共7页
通过重组HSV/AAV辅助病毒方法制备出高滴度(>10^(12))的重组AAV/mFⅨ病毒颗粒,并注射到血友病B小鼠的后肢骨骼肌中,获得了稳定的高水平小鼠Ⅸ因子表达(>370ng/mL),持续时间超过350d。治疗组小鼠体内的Ⅸ因子活性达到正常值的30%... 通过重组HSV/AAV辅助病毒方法制备出高滴度(>10^(12))的重组AAV/mFⅨ病毒颗粒,并注射到血友病B小鼠的后肢骨骼肌中,获得了稳定的高水平小鼠Ⅸ因子表达(>370ng/mL),持续时间超过350d。治疗组小鼠体内的Ⅸ因子活性达到正常值的30%,而且出血症状得到显著改善。在小鼠血浆中未发现抗Ⅸ因子的中和抗体,第1次注射后抗AAV抗体的水平也非常低。重复注射AAV/mFⅨ病毒后,不同剂量组的小鼠体内的抗AAV抗体出现了不同的结果。组织分析结果证实了血浆中有功能的FⅨ因子确实来源于骨骼肌。以上结果显示,AAV介导的基因转移是血友病B基因治疗的极有前途的方法。 展开更多
关键词 血友病B 基因治疗 相关病毒 小鼠 Ⅸ因子 基因表达 抗体 单纯疱疹病毒
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重组腺相关病毒载体相关性杂质 被引量:8
14
作者 刁勇 王启钊 +1 位作者 肖卫东 许瑞安 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第5期717-723,共7页
可以稳定表达治疗基因而无明显不良反应的重组腺相关病毒(rAAV)载体被认为是最有发展前景的基因治疗载体。但如何建立可以有效去除rAAV载体内具有潜在致病危害的杂质、产品质量符合临床使用要求的纯化工艺是研究人员面临的巨大挑战。其... 可以稳定表达治疗基因而无明显不良反应的重组腺相关病毒(rAAV)载体被认为是最有发展前景的基因治疗载体。但如何建立可以有效去除rAAV载体内具有潜在致病危害的杂质、产品质量符合临床使用要求的纯化工艺是研究人员面临的巨大挑战。其中针对载体相关性杂质的纯化工艺尤为关键,因为该类杂质的性质与真正的rAAV载体极其相似,一旦存在便难以去除,且会引起严重不良反应。以下总结了该类杂质形成的过程及有别于rAAV载体的特点,并对可以防止其生成或将其与rAAV载体有效分离的技术手段进行了评价。 展开更多
关键词 相关病毒 载体相关性杂质 纯化 基因治疗
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重组1和2型腺相关病毒转导增强绿色荧光蛋白在大鼠脑中的表达 被引量:7
15
作者 栗世方 王任直 +9 位作者 李桂林 扈国杰 张波 窦万臣 顾建刚 张振兴 孔燕国 魏俊吉 魏宇魁 田宇 《中华医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第8期542-546,共5页
目的 探讨重组1、2型腺相关病毒(rAAV1和rAAV2)载体经不同途径向大鼠脑转入增强绿色荧光蛋白(EGFP)报告基因的表达情况,选择更加适于中枢神经系统(CNS)转基因治疗的rAAV血清型和可行的基因转入途径。方法 将24只雄性健康成年SD大鼠随... 目的 探讨重组1、2型腺相关病毒(rAAV1和rAAV2)载体经不同途径向大鼠脑转入增强绿色荧光蛋白(EGFP)报告基因的表达情况,选择更加适于中枢神经系统(CNS)转基因治疗的rAAV血清型和可行的基因转入途径。方法 将24只雄性健康成年SD大鼠随机分为4组:rAAV1海马注射组、rAAV1脑室注射组、rAAV2海马注射组和rAAV2脑室注射组,每组6只大鼠。对每组大鼠立体定向注射剂量和滴度相匹配的rAAV1 EGFP和rAAV2- EGFP载体,分别于注射后2周和4周处死大鼠取脑,行序列冰冻切片并以荧光显微镜观察EGFP在脑内的表达情况,计算EGFP在脑的表达体积。结果 2周时各组小鼠EGFP表达量少或无表达,差异无统计学意义; 4周时rAAV1海马注射组表达体积为(7 .00±0. 98)mm3,rAAV2海马注射表达体积为(0. 81±0 .28)mm3 (P<0 .01); 4周时AAV1脑室注射组表达体积为(12 .72±0 .28)mm3, AAV2脑室注射组表达体积为(0 .24±0. 13)mm3(P<0 .001)。结论 在CNS中rAAV1是一种比rAAV2更为优越的转基因载体,rAAV1可通过脑室内注射途径在CNS高表达,并可直接转导胶质细胞。 展开更多
关键词 表达 大鼠 脑室注射 海马 相关病毒 转导 EGFP 增强绿色荧光蛋白 报告基因 雄性
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rAAV/BA46转染树突状细胞诱导特异细胞免疫 被引量:8
16
作者 尤长宣 苏瑾 +3 位作者 廖旺军 张军一 Paul L Hermonat 罗荣城 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第12期2146-2149,共4页
目的探讨以腺相关病毒为载体,乳腺癌抗原BA46基因转染树突状细胞(DC)诱导特异细胞免疫的可行性。方法取健康人外周血,采用密度梯度离心法分离外周血单个核细胞(DC前体细胞),将细胞分为基因转染组及对照组,基因转染组以重组腺相关病毒rAA... 目的探讨以腺相关病毒为载体,乳腺癌抗原BA46基因转染树突状细胞(DC)诱导特异细胞免疫的可行性。方法取健康人外周血,采用密度梯度离心法分离外周血单个核细胞(DC前体细胞),将细胞分为基因转染组及对照组,基因转染组以重组腺相关病毒rAAV/BA46/Neo转染,对照组以293细胞裂解物冲击,两组细胞均采用重组人粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)、白细胞介素4(IL-4)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)诱导DC前体细胞成熟。第7天,收集DC,取该DC与T细胞按比例混合,诱导细胞毒性T淋巴细胞(CTL),用3H-TdR掺入法检测DC刺激自体淋巴细胞增殖能力;以流式细胞仪分析CTL细胞中IFN-γ、IL-4、CD4、CD8、CD25、CD69的表达情况,同时取BA46阳性的乳腺癌细胞株Hs578T为靶细胞,采用51Cr释放法检测杀伤效率。结果BA46基因转染组DC具备较强的刺激淋巴细胞增殖的能力,所诱导的CTL高表达CD8、CD69和IFN-γ,对BA46阳性的靶细胞有较强的杀伤作用,该杀伤具有BA46抗原特异性和MHC限制性。结论乳腺癌BA46基因转染DC成功诱导特异的细胞免疫,为基因修饰细胞治疗乳腺癌打下实验室基础。 展开更多
关键词 BA46 相关病毒 特异细胞免疫
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重组腺相关病毒基因药物的细胞免疫毒性及对策 被引量:8
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作者 刁勇 王启钊 +1 位作者 肖卫东 许瑞安 《药学学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第9期1071-1077,共7页
重组腺相关病毒 (rAAV) 因具有在体内可以长期稳定表达转基因、安全性高等优点, 迅速成为基因治疗的首选载体之一。最近采用 rAAV 基因药物进行的血友病临床实验所暴露的细胞免疫毒性引起人们高度关注, 此问题能否顺利解决直接关系该类... 重组腺相关病毒 (rAAV) 因具有在体内可以长期稳定表达转基因、安全性高等优点, 迅速成为基因治疗的首选载体之一。最近采用 rAAV 基因药物进行的血友病临床实验所暴露的细胞免疫毒性引起人们高度关注, 此问题能否顺利解决直接关系该类药物的发展前景。之后的研究发现针对 AAV 衣壳蛋白的 T 细胞免疫反应是毒性反应的原因。本文针对 rAAV 细胞免疫毒性的各种假说进行了分析, 总结了 AAV 衣壳蛋白抗原肽如何在靶细胞递呈并激活细胞毒性 T 淋巴细胞的研究结果, 并针对该免疫毒性的各关键环节提出了可能的解决方案, 包括免疫抑制、载体优化、提高纯度等, 期望有助于提高 rAAV 基因药物的临床安全性和有效性。 展开更多
关键词 细胞免疫毒性 基因药物 相关病毒
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表达血管抑制因子的腺相关病毒载体的构建及其体内外活性 被引量:8
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作者 刁勇 马健 +2 位作者 李欣燕 孙学英 许瑞安 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第11期1949-1954,共6页
血管抑制因子(Vasostatin,VAS),为集钙蛋白N-末端180个氨基酸大小的蛋白,是一种内源性血管生成抑制因子,对多种肿瘤的生长具有很强的抑制作用。近期有研究显示,VAS可以促进神经内分泌肿瘤的恶化,提醒研究人员在开发该抗肿瘤药物时必须... 血管抑制因子(Vasostatin,VAS),为集钙蛋白N-末端180个氨基酸大小的蛋白,是一种内源性血管生成抑制因子,对多种肿瘤的生长具有很强的抑制作用。近期有研究显示,VAS可以促进神经内分泌肿瘤的恶化,提醒研究人员在开发该抗肿瘤药物时必须非常谨慎。将VAS cDNA插入腺相关病毒-2表达质粒pAAV-2,采用无辅助病毒参与的三质粒共转染法制备rAAV-VAS病毒。体外分别转染小鼠胰内皮细胞MS1和结肠癌细胞HCT-116,MTT法测定对细胞生长的影响,Western blotting方法检测VAS的表达。采用小鼠皮下移植瘤模型,验证VAS的表达对肿瘤生长、新生血管密度、以及细胞增殖的作用。结果证明构建的rAAV-VAS病毒载体,能抑制小鼠胰内皮细胞的生长,转染HCT-116后能有效表达VAS蛋白,但HCT-116的体外生长不受影响。瘤体注射rAAV-VAS后,HCT-116移植瘤在小鼠体内的生长速度明显减缓,肿瘤新生血管密度明显降低。结果显示,rAAV-VAS可以抑制HCT-116移植瘤的新生血管形成,但对其细胞增殖无明显作用。 展开更多
关键词 血管抑制因子 结肠肿瘤 血管生成 基因药物 相关病毒
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重组BMP_(4/7)融合基因腺相关病毒的构建及其对兔骨髓基质干细胞生物学行为的影响 被引量:7
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作者 袁绍辉 尚剑 +2 位作者 邵国军 刘玉耆 博超刚 《中国矫形外科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第20期1568-1572,共5页
[目的]应用重组骨形成蛋白4/7融合基因腺相关病毒载体(AAV BMP4/7)转染兔骨髓基质干细胞(BMSCs),观察其对BMSCs生物学行为的影响。[方法](1)采用RT-PCR一步法和基因重组法,从胎盘组织中克隆BMP4和BMP7成熟肽cDNA,获取BMP4/7融合基因,克... [目的]应用重组骨形成蛋白4/7融合基因腺相关病毒载体(AAV BMP4/7)转染兔骨髓基质干细胞(BMSCs),观察其对BMSCs生物学行为的影响。[方法](1)采用RT-PCR一步法和基因重组法,从胎盘组织中克隆BMP4和BMP7成熟肽cDNA,获取BMP4/7融合基因,克隆到质粒pGEM质粒中;(2)从pGEM-BMP4/7质粒中切取BMP4/7融合基因克隆到穿梭质粒,在大肠杆菌内重组,在293细胞中构建AAV-BMP4/7重组腺相关病毒载体;(3)不同MOI值的AAV-BMP4/7转染兔BMSCs,观察细胞形态学变化,MTT法描记细胞生物曲线,观察对细胞增殖的影响,以AAV-EDFP做对照;(4)AAV-BMP4/7转染兔BMSCs细胞7、14d后,行ALP及OC含量测定,观察成骨活性,以AAV-EDFP做对照。[结果](1)成功构建高滴度的携带BMP4/7融合基因的重组腺相关病毒AAV-BMP4/7;(2)AAV-BMP4/7转染BMSCs细胞后,细胞增殖活性良好,转染效率为72%,细胞形态呈典型的成骨改变,1×105vg/cell的MOI值对细胞形态影响较小,而转染效率强于5×104vg/cell(59.38%)。(3)AAV-BMP4/7转染细胞后,ALP、OC含量均明显增高,并与转染后诱导培养的时间呈正相关,与对照组比较差异统计学意义(tALP=896.88P<0.001tOC=543.24P<0.01)。[结论]AAV-BMP4/7融合基因转染效率高,对BMSCs细胞有明显的诱导成骨活性,对骨愈合的基因治疗提供了新的思路和途径。 展开更多
关键词 骨组织工程 骨形成蛋白 融合基因 相关病毒 骨髓基质干细胞
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Klotho基因转导延缓自发性高血压大鼠高血压进程及改善其心脏损害的作用研究 被引量:8
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作者 李宝善 马厚勋 +1 位作者 王艳娇 吴平 《中华医学遗传学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第6期662-668,共7页
目的研究Klotho基因转导对自发性高血压大鼠(spontaneous hypertensiverat,SHR)高血压进程及心脏损害的影响及可能机制。方法应用含有小鼠全长KlothocDNA的重组腺相关病毒(rAAV.mKL)载体基因转导作为干预方法。实验分4组:实验组... 目的研究Klotho基因转导对自发性高血压大鼠(spontaneous hypertensiverat,SHR)高血压进程及心脏损害的影响及可能机制。方法应用含有小鼠全长KlothocDNA的重组腺相关病毒(rAAV.mKL)载体基因转导作为干预方法。实验分4组:实验组(A、B、C3组)均为SHR,对照组(D组)为年龄、性别匹配的SD大鼠,每组5只;其中A、B、c组SHR分别尾静脉注射等体积含单纯磷酸盐缓冲液(空白组)、rAAV.mKL及腺相关病毒载体介导的增强绿色荧光蛋白(rAAV.EGFP),对照组SD大鼠也注射等体积磷酸盐缓冲液,实验观察12周。实验结束时,测血浆血糖,酶联免疫吸附剂测定法测胰岛素、胰岛素样生长因子-1(insulin-like growth factor-1,IGF-1)蛋白水平;心脏称重计算心脏体重指数;荧光显微镜检测心脏冰冻切片EGFP荧光;逆转录PCR、免疫组化、Western印迹检测心脏组织Klotho、IGF-1、IGF-1受体(IGF-1receptor,IGF-1R)mRNA及蛋白表达以及磷酸化Akt蛋白表达。HE及Masson染色后观察肥大心肌及胶原纤维。结果发现rAAV.mKL转导SHR后能阻止其血压进一步升高,而其他两组SHR的血压则继续升高。与sHR对照组相比,rAAV.mKL转导组其心脏组织KlothomRNA及蛋白表达上调,其血浆血糖、IGF-1水平升高,心肌磷酸化Akt蛋白降低;同时其心肌肥大、胶原纤维增生较SHR对照组明显减轻。结论Klotho基因转导可以阻止自发性高血压进程,也可以阻止心肌肥大及胶原纤维增生。保护心脏机制可能与胰岛素、IGF-1信号通路受到抑制有关,即通过抑制下游Akt磷酸化而实现。 展开更多
关键词 KLOTHO基因 高血压 相关病毒 心脏保护
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